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miR-1247-5p对Smad2基因的靶向调控作用
目的 利用miR-1247-5p过表达模拟物mimics,研究miR-1247-5p对TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的靶向调控作用.方法 合成模拟miR-1247-5p过表达的模拟物mimics,及抑制miR-1247-5p表达的抑制物inhibitors;同时构建与miR-1247-5p互补靶基因Smad2的3'非翻译区,将其克隆到线性化的Report荧光报告载体中.将测序鉴定阳性的report-Smad2 3'-UTR重组质粒,与miR-1247-5p的mimics/inhibitors共转染至HEK-293T细胞,通过relative luciferase activity实验验证靶向关系,并通过Western blot实验进一步检测Smad2蛋白表达水平.结果 成功构建report-Smad2 3'-UTR重组质粒,Western blot实验表明转染miR-1247-5p mimics组中Smad2蛋白表达下调(P＜0.05);而转染miR-1247-5p inhibitors组中,Smad2蛋白表达上调(P＜0.05).结论 证实miR-1247-5p直接靶向TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的表达,在蛋白水平对其进行调控,为进一步研究miRNA在细胞通路中的调控作用提供了依据.
关键词： miR-1247-5p TGF-β信号通路 Smad2基因 肿瘤 -
E3泛素连接酶Arkadia的结构特征、生物学功能及其在疾病发生发展中的作用
蛋白泛素化是一种重要的转录后修饰过程,可与蛋白酶体一起识别并降解未折叠蛋白及多余蛋白.E3泛素连接酶Arkadia由RNF-111基因所编码,决定了靶蛋白底物的特异性,是泛素化过程中起决定作用的关键酶.近年来研究发现,Arkadia可以通过泛素化降解细胞内蛋白而发挥增强转化生长因子β信号通路的作用.本文回顾了Arkadia的新研究进展,对其基本特征、生物学功能及其在疾病发生发展中的作用综述如下.
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TGF-β信号通路与马方综合征及Loeyz-Dietz综合征研究进展
马方综合征及Loeyz-Dietz综合征是常染色体显性遗传结缔组织病,以主动脉瘤样扩张并进而发生破裂猝死为主要临床特征.近年来,分子生物学研究发现TGF-β信号通路及其调控基因在上述遗传性主动脉瘤疾病的病理生理过程中起到重要作用.本文通过对TGF-β信号通路与马方综合征及Loeyz-Dietz综合征相关研究进展进行综述,分析这一信号通路对于这两种遗传结缔组织病诊治的重要意义.
关键词： TGF-β信号通路 马方综合征 Loeyz-Dietz综合征 -
Arkadia上调转化生长因子-B信号促进卵蛋白致敏大鼠气道重塑形成
支气管哮喘(简称哮喘)所致气道重塑的发生与转化生长因子(TGF)-β信号通路的活化密切关联.TGF-β生物学效应的发挥在很大程度上依赖于泛素蛋白酶体通路对TGF -β/Smad通路中基本信号分子的降解而得以实现.在上述过程中,E3泛素连接酶Arkadia和Smurf2能够诱导Smad7、SnoN和Ski的泛素化降解.本研究为明确卵蛋白致敏大鼠气道重塑发生过程中Arkadia和Smurf2对TGF-β信号通路的调控作用,采用卵蛋白致敏、激发方法建立慢性气道重塑大鼠模型;体外培养正常人支气管上皮细胞( NHBEC),用TGF-β1对NHBEC进行刺激,在此过程中分别用Arkadia-siRNA、Smurf2 -siRNA及蛋白酶抑制剂(lactacystin)对NHBEC进行预处理.
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乳腺癌TGF-β信号通路相关转录因子研究进展
目的 总结与转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路相关的转录因子在乳腺癌发生发展过程中的作用,分析它们与TGF-β信号通路之间的网络调控机制.方法 应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“乳腺癌、转录因子和TGF-β”等为关键词,检索2011-01-01-2015-12 31的相关文献.纳入标准:(1)乳腺癌侵袭转移;(2)转录因子与TGF-β信号通路存在联系.剔除标准:(1)未阐明转录因子与TGF-β信号通路作用的具体机制;(2)实验设计不严谨.符合纳入标准的英文文献146篇,中文文献35篇,根据剔除标准剔除英文文献50篇,中文文献34篇,后纳入分析文献88篇.结果 TGF-β信号通路是一条极为重要的细胞内信号转导途径,能调控细胞增殖、分化、迁移、粘附及凋亡等生理活动.在乳腺癌中,TGF-β信号通路起着双重作用,即在肿瘤发生的早期阶段,TGF-β信号通路起着一种预防性或肿瘤抑制的作用,但随着肿瘤的发展,TGF-β能够通过影响肿瘤微环境、增强侵袭性及抑制免疫细胞功能来促进肿瘤细胞的转移.多个转录因子c-Myc、p53、C/EBPβ、14-3-3ξ、Blimp-1、Oct-4和Nanog、Foxq1、TBX3、FOXM1、GATA3、HOXB9、Six1、Pokemon、Snail、Slug和SOX4已证实与TGF-β信号通路发生相互作用,共同参与调控乳腺癌发生发展过程.结论 乳腺癌发生过程中转录因子与TGF-β信号通路形成复杂的调控网络,对乳腺癌的进程起着双向调节作用.
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TGF-β信号通路调控乳腺癌上皮-间质转化的研究进展
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指具有极性的上皮细胞丧失极性,转化成具有迁移能力的间质细胞的过程.在乳腺癌中,EMT的发生促进原位癌向侵袭性癌发展,并与肿瘤细胞获得耐药性有关.参与调控细胞发生EMT的因素众多,涉及众多信号通路、转录因子及下游相关基因.其中,转化生长因子β (transforming growth factor β,TGF-β)信号通路在乳腺癌EMT过程中起着重要的作用.本文综述了TGF-β信号通路在调控乳腺癌EMT的研究进展.
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Arkadia在TGF-β/Smad信号转导通路中的作用
转化生长因子-β(TGF-β)是一种多功能蛋白,具有调节细胞增殖、分化、迁移及凋亡等多种细胞生物学效应.已有研究证实,TGF-β是重要的促纤维化细胞因子之一,且与肿瘤的发展密切相关.Smad信号是其发挥作用的主要通路.而近年研究发现,E3泛素连接酶Arkadia通过Smad信号能起到增强TGF-β信号通路生物学效应的作用,因而日益引起人们的关注.拟对TGF-β信号转导通路中Arkadia的作用作一综述.
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TGF-β信号通路与肺纤维化治疗的研究进展
TGF-β信号通路与肺纤维化密切相关.通过阻断其信号通路来抑制纤维化的进程,成为肺纤维化治疗的研究热点.TGF-β/Smads通路被认为是TGF-β信号传导的经典通路,新研究证明包括PI3K/Akt、MAPK、NF-κB 、Notch等通路也参与了TGF-β信号的转导与调控.TGF-β信号的转导与调控是一个涉及多通路多靶点的复杂过程.目前,肺纤维化的治疗手段依然十分有限,进一步探明TGF-β信号传导通路对于发现肺纤维化的有效治疗靶点,积极开发传统中药及维生素类药物,发现更多有效的基因及干细胞治疗等新型治疗技术,控制肺纤维化的进程具有重要意义.
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Oct4与TGF-β信号通路相关因子在胃癌组织中的表达和相互关系
目的:探讨八聚体结合蛋白4(Oct4)与TGF-β信号通路相关因子在胃癌组织中的表达情况和相互关系.方法:57例胃癌患者手术切除的癌组织及对应正常胃组织,采用Western blotting法检测Oct4、TβRⅡ、Smad2、Smad3、E-Cadheri蛋白的表达情况,分析它们与胃癌临床病理特征的关系,以及胃癌组织Oct4表达与TβRⅡ、Smad2、Smad3、E-Cadherin的相关性.结果:胃癌组织Oct4蛋白的表达明显高于正常组织,TβRⅡ、Smad2、Smad3、E-Cadherin蛋白的表达明显低于正常组织(P＜0.05).胃癌组织Oct4、TβRⅡ、Smad2、Smad3、E-Cadherin表达与与肿瘤组织分型、临床分期、淋巴结转移和浆膜浸润有关(P＜0.05).胃癌组织Oct4表达与TβRⅡ、Smad2、Smad3、E-Cadherin呈负相关关系(r=-0.887、-0.912、-0.779、-0.879,P＜0.01).结论:胃癌组织Oct4高表达可参与胃癌的发生发展和浸润、转移,其机制可能与调节TGF-β信号通路,诱导细胞上皮间质转化有关.
关键词： 胃癌 八聚体结合蛋白4(Oct4) TGF-β信号通路 上皮间质转化 -
人参皂苷对心衰大鼠Periostin蛋白及TGF-β信号通路影响
目的:探讨人参皂苷对心衰大鼠Periostin蛋白及TGF-β信号通路的作用机制.方法:选取SD大鼠100只.随机分为对照组、心衰组、人参皂苷Rb1低剂量组、人参皂苷Rb1高剂量组、西药组等5组.每组20只.手术诱导心衰模型, 手术方法为缩窄腹主动脉, 并给予相应药物治疗.观察大鼠一般形态及检测每组大鼠的心肌组织中periostin蛋白及TGF-β1蛋白的表达.结果:Periostin蛋白含量表达:与心衰组比较, 人参皂苷Rb1高剂量组Periostin蛋白表达降低明显 (P＜0.05), 西药组和人参皂苷Rb1低剂量组Periostin蛋白表达显著降低 (P＜0.01) .TGF-β1蛋白含量:心衰组和对照组的TGF-β1蛋白含量对比显著升高 (P＜0.01);和心衰组对比, 人参皂苷Rb1高剂量组、西药组的TGF-β1蛋白含量显著下降 (P＜0.01) .结论:人参皂苷Rb1能够通过影响心肌组织periostin蛋白的表达, 抑制TGF-β信号通路, 从而改善心衰大鼠心室重构, 防治心力衰竭.
关键词： 人参皂苷 心衰 Periostin蛋白 TGF-β信号通路 -
TGF-β信号通路与高盐诱发高血压的关系
TGF-β 信号通路的基因多态性一直以来被报道与高血压相关,但是具体的关联机制仍存在争议,有研究认为TGF-β 信号通路参与高盐诱导的高血压,与高盐诱导高血压正相关;而另有研究表明TGF-β 信号通路与高血压负相关,转基因调控TGF-β1基因启动子制备出TGF-β1低表达的转基因小鼠,发现降低TGF-β1表达与提高血管紧张素-肾素-醛固酮系统活性相关,进而导致血压的增高.本文从TGF-β 信号通路的基本构成、TGF-β 信号通路与高盐诱导高血压的关系和中医心肾一体治疗理念三个方面介绍了TGF-β 信号通路与高血压之间关系的新研究进展.
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TGF-β1通过PI3K及ERK信号通路调节肺动脉高压过程中IGFBPs蛋白表达
目的:探讨大鼠肺动脉高压(PAH)过程中TGF-β1对胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)表达调节是否依赖于PI3K及ERK信号通路.方法:取健康成年SD大鼠26只,随机分成2组:PAH组,腹腔注射1％的野百合碱,剂量为60 mg/kg;对照(C)组腹腔注射生理盐水.于4周后超声检测肺动脉平均压力,取肺组织做HE染色,应用NIS-Element系统测量中膜厚度.原代培养肺动脉平滑肌(PASMC)细胞,分别加入TGF-β1及TGF-β1中和抗体后,Western-blot检测IGFBP3,IGFBP5,Smad2/Smad3表达.加入ERK特异性抑制剂PD98059或H3K抑制剂LY294002,检测IGFBP3,IGFBP5表达.结果:野百合碱处理4周后,肺动脉高压组的平均肺动脉压力及右室/(左室+室间隔)比值显著高于对照组.TGF-β1可显著升高IGFBP3,IGFBP5及p-Smad3的表达(P＜0.05),而抑制TGF-β1则可显著降低三种蛋白的表达(P＜0.05).加入LY294002抑制PI3K ERK后,IGFBP3和p-Smad2两种蛋白的表达量显著下调(P＜0.05).加入PD98059抑制ERK后可显著降低IGFBP3及IGFBP5的表达水平(P＜0.05).结论:PAH中TGF-β1升高可通过活化Smad2/Smad3上调IGFBP3和IGFBP5的表达.TGF-β1促进IGFBP3,IGFBP5表达的作用依赖于PI3K及ERK信号通路.
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新型shRNA慢病毒载体抑制TGIF表达及对TGF-β通路的调节
目的 构建针对同源域蛋白TGIF(5′-TG-3′interacting factor)可诱导表达shRNA的慢病毒载体,鉴定其在大肠癌细胞系DLD1中对TGIF的基因沉默效率,进一步研究其对TGF-β信号通路下游基因的影响.方法 设计并合成针对TGIF的RNA干扰序列,克隆到可被强力霉素诱导的新型Tet-on慢病毒载体,将慢病毒颗粒感染大肠癌细胞系DLD1细胞.培养并分离细胞克隆后,使用强力霉素(doxcycline)进行诱导,用Real-Time PCR和Western印迹法检测TGIF和PAI-1的表达情况.结果 构建了针对TGIF可诱导shRNA的真核表达病毒载体并获得相应的病毒,病毒可以高效感染大肠癌细胞系DLD1.在强力霉素诱导下,TGIF在DLD1细胞系的表达得到有效抑制,TGF-β下游基因PAI-1和p15表达明显升高.结论本研究成功构建了可诱导表达shRNA慢病毒载体,其在强力霉素诱导下可以有效抑制TGIF在大肠癌细胞系内的表达；TGIF可以抑制TGF-β信号传导通路.
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TGF-β信号通路及细胞黏附分子在非小细胞肺癌的研究
目的 观察TGF-β1、TβR Ⅱ、Smad2、E-cad、E-sel、integrin-β1、ICAM-1及CD44v6在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达特征,探讨其与非小细胞肺癌的组织学类型、TNM分期及淋巴结转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP和SABC法检测TGF-β1、TβR Ⅱ、Smad2、E-cad、E-sel、integrin-β1、ICAM-1及CD44v6的表达,并对其与NSCLC临床病理因素的关系进行分析.结果 TGF-β1与integrin-β1在肺腺癌组织的阳性表达率显著高于肺鳞状细胞癌组织(P＜0.05),E-cad在肺腺癌组织的阳性表达率显著低于肺鳞状细胞癌组织(P＜0.05).TGF-β1及TβR Ⅱ在NSCLC TNM分期Ⅰ期组织的阳性表达率显著低于Ⅱ期和Ⅲ期组织(P＜0.01).TGF-β1、TβR Ⅱ、Smad2及CD44v6在有淋巴结转移的NSCLC组织中阳性表达率显著高于无淋巴结转移的NSCLC组织(P＜0.05),E-cad在有淋巴结转移的NSCLC组织中阳性表达率显著低于无淋巴结转移的NSCLC组织(P＜0.05).结论 TGF-β1、E-cad及integrin-β1与NSCLC的组织学类型有关,TGF-β1及TβR Ⅱ能促进NSCLC的病程进展;TGF-β1、TβR Ⅱ、Smad2、E-cad、及CD44v6的阳性表达与NSCLC的淋巴结转移密切相关,TGF-β1、TβR Ⅱ、Smad2、E-cad及CD44v6在NSCLC的淋巴结转移中起着重要的促进作用,可作为估计NSCLC可能有淋巴结转移的指标.
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Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路与肝癌的靶向治疗
原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界常见的第五大恶性肿瘤,其发病率仍在升高,并且是肿瘤相关死亡的第三大原因[1].尽管人类在肿瘤治疗上取得了很大的进步,但目前的治疗手段对根治肿瘤和预防其转移、复发作用有限,手术、化疗和放疗只能消除部分肿瘤组织或细胞,大多数患者在这些治疗后,肿瘤再生长和复发[2-5],预后很差,其中位生存期为6～16个月[6].肝癌的发病机制复杂,是多因素、多基因、多阶段共同参与的结果,其中细胞信号转导通路对其发生、发展起着至关重要的作用.目前已知Wnt/β-catenin信号通路主要通过激活其下游靶基因而导致肝癌的发生与发展,TGF-β信号通路调节黏附复合物的解离诱导上皮间质转化(EMT),在肝癌细胞的浸润、转移方面起重要作用,理解这两个信号通路的生物学行为有利于将来针对肝癌细胞进行基因靶向治疗.
关键词： 肝癌 Wnt/β-catenin信号通路 TGF-β信号通路 转移浸润 -
胃癌组织 Oct4表达变化及意义
目的：探讨八聚体结合蛋白4（Oct4）在胃癌发生、发展中的作用及其机制。方法选择60例胃癌患者手术切除的癌组织及其相应癌旁正常组织，分别应用qRT-PCR技术、Western blotting技术检测Oct4 mRNA和蛋白表达；分析胃癌组织Oct4表达与TGF-β信号通路中TβRⅡ、Smad2、Smad3、E-Cadherin效应因子及患者临床病理参数的关系。结果胃癌组织 Oct4、Smad3 mRNA 和蛋白的相对表达量明显高于癌旁正常组织（ P 均＜0．05）， TβRⅡ、Smad2、E-Cadherin mRNA和蛋白的相对表达量明显低于癌旁正常组织（ P均＜0．05）。胃癌组织Oct4表达与TβRⅡ、Smad2、E-Cadherin蛋白表达呈负相关（r分别为－0．887、－0．912、－0．879，P均＜0．01），与Smad3蛋白表达呈正相关（r＝0．779，P＜0．01）。胃癌组织Oct4表达变化与患者性别、年龄无关（P均＞0．05），与肿瘤组织分化程度、临床分期、淋巴结转移和浆膜浸润有关（P均＜0．05）。结论胃癌组织Oct4高表达可促进胃癌的发生、发展，其机制可能与Oct4参与调节TGF-β信号通路、诱导细胞发生上皮间质转化有关。
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透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞TGF-β通路中相关信号分子影响的实验研究
目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对硝普钠造模后软骨细胞TGF-β(转化生长因子-β)信号通路中ALK1,ALK5,ALK1/ALK5及MMP-13的表达影响,探讨其防治骨关节炎的作用机制.方法:2月龄清洁级雄性SD大鼠90只,随机分为空白组30只、壮骨关节丸组30只和透骨消痛胶囊组30只,制备含药血清.4周龄清洁级雄性SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系.1 mmol/L SNP干预第2代软骨细胞复制软骨细胞凋亡模型.分为1 mmol/L SNP组,1 mmol/L SNP+10％壮骨关节丸组,1 mmol/L SNP+5％、10％和15％透骨消痛胶囊组,分别培养3,6和9d,Real-time PCR和Western blot分别检测各组软骨细胞ALK1,ALK5及MMP-13基因及蛋白表达.结果:含药血清分别干预细胞3,6和9d后,ALK1,ALK1/ALK5及MMP-13基因及蛋白的表达,壮骨关节丸组和透骨消痛胶囊组均明显低于1 mmol/L SNP组(P＜0.01,P＜0.05);ALK5基因及蛋白的表达,壮骨关节丸组和透骨消痛胶囊组均明显高于1 mmol/L SNP组(P＜0.01,P＜0.05).结论:透骨消痛胶囊通过调节TGF-β信号通路发挥抗软骨细胞凋亡作用.
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TGF-β对牙周膜干细胞性能的调节作用
目的：研究TGF?β对牙周膜干细胞（ periodontal ligament stem cells，PDLSCs）自我更新与分化能力的调节。方法：取牙周膜组织进行干细胞分离培养并给予TGF?β刺激，检测其对PDLSCs自我更新与多向分化潜能的影响，并分析分子相互作用模式。结果：TGF?β促进PDLSCs的增殖与自我更新，抑制PDLSCs成骨分化与成脂分化潜能。 TGF?β对PDLSCs性能的调节与Notch信号通路有关。结论：TGF?β在调节PDLSCs具有重要作用。
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口腔扁平苔藓中TGF－β信号通路及其信号转导蛋白Smads家族
口腔扁平苔藓（OLP）是一种T细胞相关的伴有慢性浅表性炎症的黏膜角化异常性疾病，TGF－β信号通路及其信号转导蛋白Smads家族在疾病的发生发展中起着重要作用。TGF－β及Smads蛋白在OLP患者外周血及局部组织细胞中的表达相较于健康人群均有差异。此外，TGF－β信号通路及Smads蛋白家族在多种免疫相关疾病中也都起着不可忽视的作用，系统了解相关的研究进展能让我们更全面地认识TGF－β信号通路，有益于深入研究OLP。
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大鼠肾间质纤维化中微小RNA-21的表达变化及其机制
肾间质纤维化是许多肾脏疾病的重要病理变化,转化生长因子β(TGF-β)信号通路的活化是纤维化发生的重要标志,抑制TGF-β信号通路可以明显缓解肾间质纤维化[1].微小RNA(miRNA)是一组含21～25个核苷酸的非编码RNA,通过转录后调节机制参与机体各个器官的生物学功能,在细胞存活、增殖、分化、凋亡、炎性反应、纤维化等信号通路中扮演重要角色[2].
