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HPLC测定蝙蝠蛾拟青霉培养物5种核苷类成分的含量
建立HPLC同时测定蝙蝠蛾拟青霉培养物中尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺嘌呤和腺苷5种核苷类成分含量的方法.采用Waters SunFire C 18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以甲醇-水为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长260 nm.结果尿嘧啶的线性范围为10.00 ～200.00 mg·L-1(r=0.9994),尿苷的线性范围为10.10 ～202.00 mg· L-1(r =0.999 2),鸟苷的线性范围为10.00～200.00mg· L-1(r =0.999 1),腺嘌呤的线性范围为10.30 ～206.00 mg· L-1(r =0.999 2),腺苷的线性范围为10.45～209.00mg·L-1(r=0.999 1);尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺嘌呤和腺苷的精密度RSD分别为0.032％,0.035％,0.039％,0.049％,0.000 80％;尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺嘌呤和腺苷的平均加样回收率分别为97.34％,99.10％,101.6％,98.61％,100.2％,RSD分别为1.3％,2.1％,0.96％,0.95％,1.3％.该方法灵敏度高、选择性好,线性关系及重复性好,适合于蝙蝠蛾拟青霉培养物及其提取物中核苷类成分的含量分析.
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蝙蝠蛾拟青霉模式菌相关问题的探讨
蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali是中国中医科学院中药研究所于1982年从云南省迪庆州白马雪山采集的冬虫夏草上分离得到一种真菌新种,2008年进行名称合格化发表,明确指定该种原描述使用的82-2菌株的干培养物作为模式标本,并指明保存在中国中医科学院植物标本馆(CHICMM)即(CMMI),至今还保存在该馆内.2015年2月姚一建等在《Taxon》杂志上发表“Neotypification of Paecilomyces hepiali (Hypocreales)”一文要求另立蝙蝠蛾拟青霉新模式菌,该文提出另立蝙蝠蛾拟青霉新模式菌不能成立.
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蝙蝠蛾拟青霉菌丝体对小鼠体力疲劳及缺氧的影响
目的：研究发酵培育的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体（ PHM）抗疲劳、耐缺氧作用及其机制。方法将72只雄性昆明小鼠随机分为正常饲养组（ Home组）、对照组、莫达非尼（ Moda）组以及PHM低、中、高剂量组。给药14 d，每天2次。除Home组外，其他5组小鼠于末次给药后40 min，8、24和48 h通过轮式疲劳仪接受强迫攀跑训练，并于72 h接受力竭攀跑训练。记录小鼠每次训练过程中的电击次数。力竭训练结束后，运用试剂盒检测小鼠的肝糖原、肌糖原、血清尿素氮、血清乳酸、血清肌酸激酶和全血ATP水平。另将96只雄性昆明小鼠随机分为对照组和PHM低、中、高剂量组，每组24只，其中12只进行常压耐缺氧实验，另12只进行亚硝酸钠中毒实验。结果与对照组相比，PHM 能显著降低小鼠电击次数，改善疲劳相关生化指标并显著延长其缺氧存活时间。结论PHM作为虫草替代品用于抗疲劳、耐缺氧具有一定的潜力和良好的应用前景。
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蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究
以5月和6月两个不同时段采集的分别产于青海省化隆县和四川省康定县的冬虫夏草(Cordyceps sinensis)新鲜子实体为材料,采用分子生物学方法,以rDNA-ITS序列为分子标记,对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)与冬虫夏草之间的关系进行了探讨.以真菌通用引物ITS1/ITS4分别对蝙蝠蛾拟青霉及冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA进行PCR扩增,获得的片段克隆到pMD18-T Vector上进行测序,结果表明,随机挑取的46个克隆与某些已在GenBank中注册的中国被毛孢(Hirsutella sinensis)或冬虫夏草的rDNA-ITS序列的一致性均在99%以上.但与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列的一致性约为72%.根据蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列设计了两对特异引物,分别以不同产地及不同生长时期共4个批次的冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA为模板,进行PCR及巢式PCR扩增,均得到了相应片段,该片段与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列具有100%的一致性.在GenBank中注册号为AB067740的另一个标明为冬虫夏草的rDNA-ITS序列与注册号为AJ309353的中国被毛孢的rDNA-ITS序列一致性仅为87.3%,但根据AB067740序列设计特异引物,也从冬虫夏草基因组DNA中扩增到其相应序列.研究结果表明,在天然冬虫夏草中除了中国被毛孢之外,还普遍存在着蝙蝠蛾拟青霉等内寄生菌.
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保健食品27般武艺(一)
目前国家食药监局批准的保健食品的保健功能共有27种,而规定可用来制作保健食品的原料只有201种(其中既是食品又是药品的87种),也就是说,保健食品从原料到组方到功效宣称,都必须在这个规定的范围内,不得逾越.增强免疫力能增强免疫力功能的物质通常被称为免疫增强剂,指单独或同时与抗原使用时能增强机体免疫应答的物质.免疫增强剂的原料种类可以说是保健食品中多的,主要包括:矿物质类,如硒、锌等;中药类,如黄芪、当归、白芍、女贞子、枸杞等;免疫佐剂,如蜂胶等;微生物制剂,如蝙蝠蛾拟青霉菌粉;维生素类,如维生素E、维生素A等;以及蛋白质、氨基酸和核酸制剂等.药店里常卖的蜂胶软胶囊、灵芝西洋参胶囊等都是用于增强免疫力的保健食品.
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蝙蝠蛾拟青霉菌丝体抗小鼠力竭疲劳作用
目的：评价发酵培育的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体（PHM）抗小鼠力竭疲劳作用及其作用机制。方法采用轮式疲劳仪强迫小鼠每日30 min 连续18 d 进行攀跑运动，攀跑速度从10．2 m·min -1逐渐递增至12．6 m·min -1，并于第19天（d 19）强迫小鼠攀跑60 min以建立力竭疲劳模型。每日训练前40 min 分别ig给予PHM 140，280及560 mg·kg -1和莫达非尼13 mg·kg -1。分别于d5，d9，d13，d17和d19记录小鼠的电击次数，每日记录小鼠的体质量。检测肌糖原（MG）、肝糖原（LG）、血清尿素氮（SUN）、血清乳酸（SLA）和血清肌酸激酶（CK）的含量。结果模型组小鼠在d19力竭训练中的电击次数显著高于给药组，且与正常对照组小鼠相比，其MG 及 LG 含量显著降低，而SUN 及CK水平显著升高（P＜0．05）。PHM 280及560 mg·kg -1组小鼠在力竭训练中的电击次数分别为133±55和115±41次，均显著低于模型组（240±89）次（P＜0．01）。PHM 560 mg·kg -1组小鼠的 MG 和 LG 分别为1．28±0．24和（40．9±10．2）mg·g -1，均显著高于模型组〔MG：（0．91±0．26）mg·g -1，LG：（22．2±2．9）mg·g -1；P＜0．01〕，而SUN，SLA和CK分别为（5．8±1．3）mmol·L-1，（5．7±1．7）mmol·L-1和（0．6±0．2）kU·L-1，均显著低于模型组〔SUN：（7．5±2．1）mmol·L-1，SLA：（7．1±1．8）mmol·L-1，CK：（0．8±0．3）kU·L-1；P＜0．05〕。与模型组小鼠相比，莫达非尼组小鼠的电击次数显著降低（P＜0．01），但MG，LG，SUN，SLA和CK水平无显著性差异。结论 PHM可能通过增加能源物质的储备，增强机体有氧代谢能力，并减少代谢产物的积累，以维持机体内环境稳定及正常代谢功能，从而起到抗力竭疲劳的作用。
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中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉小鼠免疫功能调节作用的比较
目的 观察中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉对小鼠免疫功能的影响.方法 分别给予中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉后,测定观察对小鼠碳粒廓清功能、迟发性变态反应、溶血素抗体、淋巴细胞增殖和NK细胞活性等的影响.结果 3.0 g/kg中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉可显著提高小鼠吞噬指数和半数溶血值(p＜0.01)、显著提高T、B淋巴细胞增殖能力(P ＜0.01,P＜0.05)、显著提高NK细胞活性(P＜0.05),0.5～1.5 g/kg中国被毛孢都能显著抑制小鼠耳廓肿胀(P＜0.01,P＜0.05),同时还能抑制脾脏和胸腺增大(P＜0.01,P＜0.05).结论 中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉均具有免疫调节作用,而中国被毛孢免疫抑制及增强天然免疫系统作用要优于蝙蝠蛾拟青霉,而对适应性免疫系统增强作用蝙蝠蛾拟青霉优于中国被毛孢.
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冬虫夏草菌丝体化学成分的研究
冬虫夏草菌丝体为从新鲜冬虫夏草中分离得到的蝙蝠蛾拟青霉(Cs-4)菌种经发酵培养所得菌丝体的干燥粉末,为黄棕色,气香,味微苦.
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虫草菌粉中2种菌丝体的化学成分和药理活性研究进展
虫草菌粉是从新鲜冬虫夏草中分离得到菌丝体经发酵培养而得,近年来因其显著的药理活性而受到广泛关注.虫草菌粉中中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉2种菌丝体的化学成分和药理活性具有明显差异,通过对二者的研究进展进行较为全面客观的文献整理分析,以期为虫草菌粉的进一步研究和开发利用提供参考.
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蝙蝠蛾拟青霉及蛹虫草与野生冬虫夏草活性比较
目的 冬虫夏草是我国珍稀药用资源,具有多种药理活性.但是天然虫草产量少需求大,使其成为濒危资源.通过研究与其具有相似的化学成分和药理作用的蝙蝠蛾拟青霉和蛹虫草,可以对其进行保护.方法 利用野生冬虫夏草、蝙蝠蛾拟青霉和蛹虫草的有效成分含量测定,抗疲劳活性,免疫增强活性及体外降血糖活性研究进行比较.结果 3种虫草均含有多糖,腺苷和虫草酸;此外,蝙蝠蛾拟青霉和蛹虫草中的多糖及虫草酸含量均与冬虫夏草相当;冬虫夏草具有显著的降血糖活性、抗疲劳活性和免疫增强活性;蝙蝠蛾拟青霉具有很好的降血糖活性和抗疲劳活性;蛹虫草具有显著的免疫增强活性和抗疲劳活性;且三者对小鼠的自主活动次数均无显著影响,表明三者均对小鼠无刺激性.结论 蝙蝠蛾拟青霉和蛹虫草与野生冬虫夏草的药理作用相似,具有很大的发展空间.
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冬虫夏草君沛胶囊改善中老年人运动代谢和运动耐力研究
冬虫夏草数世纪来被用于补益食品和草药.冬虫夏草君沛胶囊(CordyMax)是采用从冬虫夏草中分离出的蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Chen et Dai)Cs-4菌株,经工业发酵而生产出的冬虫夏草的替代品.
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蝙蝠蛾拟青霉和中国弯颈霉蛋白质氨基酸分析及质量评价
目的 对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)和中国弯颈霉(Tol ypocladium sinenis)2种虫生真菌菌丝的蛋白质氨基酸进行含量分析及质量评价,为2种真菌的其他相关研究和应用提供依据.方法 采用盐酸水解法水解菌丝粉,用Agilent 1200高效液相色谱仪C18反相柱梯度进行分离,上柱前加入邻苯二甲醛-氯甲酸芴甲酯(OPA-FMOC)自动衍生化.参照标准品氨基酸,计算待测样品的氨基酸含量.结果 测定了17种蛋白水解氨基酸的含量,其中蝙蝠蛾拟青霉中有4种氨基酸(天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸)的含量高于中国弯颈霉,中国弯颈霉中有11种氨基酸(谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、脯氨酸)的含量高于蝙蝠蛾拟青霉.中国弯颈霉氨基酸总量、必需氨基酸总量、非必需氨基酸总量高于蝙蝠蛾拟青霉,蝙蝠蛾拟青霉支链氨基酸含量高于中国弯颈霉.两者必需氨基酸的模式均符合世界卫生组织和联合国粮农组织(WHO/FAO)提出的必需氨基酸模式谱和参考标准.结论 蝙蝠蛾拟青霉与中国弯颈霉均具有较高的营养价值,但两者的蛋白质氨基酸含量并不等同.
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HS - SPME - GC/MS 分析蝙蝠蛾拟青霉发酵菌粉的挥发性成分
目的：对蝙蝠蛾拟青霉发酵菌粉的挥发性成分进行分析。方法采用顶空固相微萃取与气相色谱质谱法（HS - SPME - GC/ MS）分析蝙蝠蛾拟青霉发酵菌粉中挥发性物质的成分。结果共鉴定出48种化学成分，其中吡嗪类和醛类化合物相对含量高，占总量的46.7%和44.4%。蝙蝠蛾拟青霉发酵菌粉的主要挥发性物质为2-甲基丁醛（29.41%）、3-乙基-2，5-二甲基吡嗪（9.19%）、异丁醛（6.57%）、2，5-二甲基吡嗪（5.96%）、2-乙基-6-甲基吡嗪（5.35%）、2-乙基-5-甲基吡嗪（4.35%）和2-乙基3-甲基吡嗪（4.08%）。结论 HS -SPME - GC/ MS 技术可以作为分析蝙蝠蛾拟青霉发酵菌粉挥发性成分分析的有效方法。
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冬虫夏草免疫抑制作用研究现状
冬虫夏草[Cordyceps Sinensis(Berk)Sacc]简称虫草,是虫草真菌(Cordyceps Sinensis)的子座及其寄生蝙蝠蛾(Hepialus Armoricans)幼虫尸体的复合物.由于生长条件苛刻,天然资源十分紧张,近年来用人工发酵法培养出具有相似化学成分和药理作用的多种虫草菌丝体,如中国拟青霉(Pacilomyces Sinensis Sp.nov)、蝙蝠蛾拟青霉(Pacilomyces Hepiali Chen)、虫草菌粉和人工虫草[亚香棒虫草(Cordyceps Hawkesii Gary)的菌丝培养物]等.传统观点认为虫草为免疫增强剂[1～3],但近年研究发现虫草可抑制免疫功能,并在器官移植的动物实验和临床研究中有抗排斥反应作用,因而提出了虫草为免疫调节剂的观点[4-9].本文将其免疫抑制作用研究现状作一综述.
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响应面法优化蝙蝠蛾拟青霉发酵培养基配方
为了提高虫草无性型蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali菌丝体中的腺苷含量,采用响应面法对其液体发酵培养基配方进行了优化.首先采用Plackett-Burman设计法对影响蝙蝠蛾拟青霉腺苷收率的8个相关因素进行了筛选,从中确定其主要影响因子为马铃薯和蚕蛹粉.然后用陡爬坡试验逼近上述2个因素的大响应区域,并通过中心组合设计和响应面分析法,确定了主要影响因子的佳浓度.优化后的培养基组成为:马铃薯8.25％,蔗糖1％,玉米粉1％,蛋白胨0.5％,蚕蛹粉0.81％,KH2 PO4 0.1％,MgSO4·7H2O 0.1％,(NH4)2 SO40.1％.该配方所产生的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中腺苷含量由优化前的2.15 mg/g(干重)提高到3.44 mg/g(干重).
关键词： 蝙蝠蛾拟青霉 Plackett-Burman设计法 中心组合设计 响应面法 腺苷 -
人参对冬虫夏草蝙蝠蛾拟青霉固体发酵的影响
选择人参药材加入到选育好的冬虫夏草蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)固态发酵基质中,并对发酵产物中的有效成分进行检测.结果显示,蝙蝠蛾拟青霉能有效地将人参皂苷Rb1转化为Rd,从而高产稀有人参皂苷Rd,同时合成甘露醇、虫草素和腺苷,实现一次发酵过程同时获得了虫草和人参的有效成分.表明中药中的成分与药用真菌生长代谢间的相互作用,完全可能起到协同增效的作用.
