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蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究
以5月和6月两个不同时段采集的分别产于青海省化隆县和四川省康定县的冬虫夏草(Cordyceps sinensis)新鲜子实体为材料,采用分子生物学方法,以rDNA-ITS序列为分子标记,对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)与冬虫夏草之间的关系进行了探讨.以真菌通用引物ITS1/ITS4分别对蝙蝠蛾拟青霉及冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA进行PCR扩增,获得的片段克隆到pMD18-T Vector上进行测序,结果表明,随机挑取的46个克隆与某些已在GenBank中注册的中国被毛孢(Hirsutella sinensis)或冬虫夏草的rDNA-ITS序列的一致性均在99%以上.但与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列的一致性约为72%.根据蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列设计了两对特异引物,分别以不同产地及不同生长时期共4个批次的冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA为模板,进行PCR及巢式PCR扩增,均得到了相应片段,该片段与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列具有100%的一致性.在GenBank中注册号为AB067740的另一个标明为冬虫夏草的rDNA-ITS序列与注册号为AJ309353的中国被毛孢的rDNA-ITS序列一致性仅为87.3%,但根据AB067740序列设计特异引物,也从冬虫夏草基因组DNA中扩增到其相应序列.研究结果表明,在天然冬虫夏草中除了中国被毛孢之外,还普遍存在着蝙蝠蛾拟青霉等内寄生菌.
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中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉小鼠免疫功能调节作用的比较
目的 观察中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉对小鼠免疫功能的影响.方法 分别给予中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉后,测定观察对小鼠碳粒廓清功能、迟发性变态反应、溶血素抗体、淋巴细胞增殖和NK细胞活性等的影响.结果 3.0 g/kg中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉可显著提高小鼠吞噬指数和半数溶血值(p＜0.01)、显著提高T、B淋巴细胞增殖能力(P ＜0.01,P＜0.05)、显著提高NK细胞活性(P＜0.05),0.5～1.5 g/kg中国被毛孢都能显著抑制小鼠耳廓肿胀(P＜0.01,P＜0.05),同时还能抑制脾脏和胸腺增大(P＜0.01,P＜0.05).结论 中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉均具有免疫调节作用,而中国被毛孢免疫抑制及增强天然免疫系统作用要优于蝙蝠蛾拟青霉,而对适应性免疫系统增强作用蝙蝠蛾拟青霉优于中国被毛孢.
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虫草菌粉中2种菌丝体的化学成分和药理活性研究进展
虫草菌粉是从新鲜冬虫夏草中分离得到菌丝体经发酵培养而得,近年来因其显著的药理活性而受到广泛关注.虫草菌粉中中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉2种菌丝体的化学成分和药理活性具有明显差异,通过对二者的研究进展进行较为全面客观的文献整理分析,以期为虫草菌粉的进一步研究和开发利用提供参考.
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中国被毛孢分生孢子形成过程显微结构的研究
分生孢子是中国被毛孢(H sinensis)生活史中极为重要的一个环节,其在冬虫夏草侵染和形成过程中有着十分关键的作用.本实验以中国被毛孢纯培养菌种为实验材料,采用显微镜观察了其菌丝体经营养生长产分生孢子过程中显微结构变化,结果表明:中国被毛孢在固体培养条件下,可以形成分生孢子,其形态和产生方式与微循环产孢过程中形成的分生孢子一致,同时,在产孢过程中,还存在瓶梗结构纵裂形成对生分生孢子的现象.
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中国被毛孢菌丝体对小鼠免疫功能的影响
目的:研究中国被毛孢菌丝体对小鼠免疫功能的影响.方法:分别给予中国被毛孢菌丝体50、200和800 mg/kg灌胃,连续用药5 d,进行小鼠碳粒廓清试验、血清溶血素试验和二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发性变态反应(DTH).结果:中国被毛孢菌丝体在200 mg/kg和800 mg/kg剂量下,能明显增强小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能、体液免疫功能和细胞免疫功能,且有显著剂量依赖性.结论:中国被毛孢菌丝体有明显的免疫促进作用.
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冬虫夏草性状鉴别与含量标准存在的问题
目的:提供和完善冬虫夏草的性状鉴别特征与资料,探讨含量标准存在的问题.方法:系统查阅相关文献,结合市场情况,全面论述冬虫夏草的同属真菌入药、无性型、寄主基原鉴定、药材的性状鉴别、质量标准等方面的问题.结果:只有冬虫夏草菌Cordyc eps sienesis是《中国药典》法定的正品,其他同属真菌均系伪劣品；冬虫夏草药材的性状鉴别要特别注意虫与“草”的长度比和粗细比,以及“草”从虫的什么部位长出与是否分枝等；冬虫夏草及发酵产物质量标准仅根据腺苷(虫草素)、甘露醇(虫草酸)和多糖等非特异性成分的定性定量结果就声称代用冬虫夏草是欠妥当的.结论:应加强特异性化学成分质量标准的研究,并加强有关冬虫夏草和各种发酵产物作为食品、保健品和药品的质量监管.
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利用原生质体紫外诱变技术选育可常温发酵的中国被毛孢新菌株
中国被毛孢(Hirsutella sinensis)是天然冬虫夏草[Cordyceps sinensis (Berk) Sacc.]的真正无性型,其生长温度低(低于20℃),生长缓慢(发酵周期长达20～30d),对人工发酵的技术条件要求很高,因而大大增加了工业化发酵生产的成本和技术难度.为了解决上述问题,实验中从天然冬虫夏草子座中分离到中国被毛孢菌株BS-1,并对其进行了原生质体紫外诱变处理.经过粗筛和精筛,从中选出一株可常温下(25～28℃)发酵、生长迅速(发酵周期4～5 d)、有效成分(甘露醇和腺苷)含量显著高于原始菌株的诱变株BS-5962.通过连续10代PDA斜面继代培养和摇瓶试验,以及连续3批的1t罐的中试试验,检查结果表明所得诱变株性状优异而稳定.可为降低中国被毛孢的液体深层发酵成本和技术难度提供一种有效的解决方案.
