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高效液相色谱法测定克痹骨泰胶囊中血竭素高氯酸盐的含量
目的:建立反相高效液相色谱法测定克痹骨泰胶囊中血竭素高氯酸盐含量的方法.方法:采用Diamonsil(钻石)C180DS2(250mm×4.6mm 5um)色谱柱,乙腈-0.05%NaH2p水溶液(45:55)为流动相,流速为1mLmin<'-1>,检测波长为270nm.按外标法进行检测.结果:血竭素高氯酸盐在浓度为0.005 μg.ml<'-1>～0.056μg.ml<'-1>范围内线性关系良好,r=0.9999,样品加样平均回收率为99.82%(n=6),RSD为0.60%.结论:该方法简便,准确、重复性好、专属性强,可作为克痹骨泰胶囊的含量测定有效方法.
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血竭素高氯酸盐抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子的表达
目的:研究血竭素高氯酸盐抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达,探讨其防治糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾纤维化的机制.方法:将培养的HMC分为低糖组(LG组,5.5 mmol·L~(-1)D-葡萄糖)、高糖组(HG组,25 mmol·L~(-1) D-葡萄糖),每组均设血竭素高氯酸盐浓度7.5 μmol·L~(-1)对照,作用24,48 h后,采用RT-PCR方法和Western blot方法检测CTGF mRNA和蛋白水平的表达.结果:与高糖组比较,低糖组中CTGF mRNA和蛋白表达均显著性减少(P＜0.01),高糖组加血竭素高氯酸盐干预后,CTGF mRNA和蛋白表达显著性减少(P＜0.01).结论:血竭素高氯酸盐可以抑制CTGF的表达,这可能是其防治DN肾纤维化的部分机制.
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血竭素高氯酸盐诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制
目的研究血竭素高氯酸盐诱导HeLa细胞凋亡机制.方法MTT法测定血竭素高氯酸盐对HeLa细胞的细胞毒作用.通过显微镜,荧光染色观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化.用Western印迹法分析药物对蛋白质表达的影响.结果血竭素高氯酸盐明显抑制HeLa等细胞的增殖,诱导HeLa细胞调亡.Caspase-1,-3,-8,-9及家族抑制剂可明显抑制血竭素高氯酸盐诱导的凋亡.Western印迹结果显示血竭素高氯酸盐作用12 h后Bax及Bcl-XL的表达明显改变,caspase-3,-8前体及caspase-3底物ICAD和PARP发生降解.结论血竭素高氯酸盐(60 μmol·L-1)通过改变Bax/Bcl-XL的表达激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡.
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展筋活血散质量标准研究
目的:完善展筋活血散的质量标准.方法:重新血竭、当归的薄层鉴别,增加了人参、三七、没药的薄层鉴别及胆红素的HPLC鉴别;增加了HPLC法测定血竭素的含量.HPLC含量测定法采用CAPCELL PAK C18 MGⅡ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)及Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(50∶50) ;流量为1.0 mL·min-1 ;检测波长为440 nm.结果:薄层鉴别阴性对照均无干扰;HPLC含量测定方法中血竭素高氯酸盐在0.0381～3.0444 μg范围内有良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.80%(n=6).结论:所建方法简单、准确,可用于展筋活血散的质量控制.
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冠脉宁片中化工染料检查及血竭素高氯酸盐含量测定研究
目的 建立冠脉宁片中化工染料检查及血竭素高氯酸盐含量测定方法.方法 采用高效液相色谱-串联质谱联用法(HPLC-MS/MS)对冠脉宁片中血竭药材可能存在的化工染料进行检查,并采用高效液相色谱法对其中的血竭素含量进行测定.化工染料检查使用色谱柱为:Agilent Zorbax-SB C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.02 mol·L-1乙酸铵和乙腈的混合溶液,梯度洗脱,520 nm检测;质谱采用ESI+扫描,二级离子扫描方式.血竭素含量测定使用的色谱柱为Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(37∶63),检测波长440 nm.结果 56批次样品中共有7批样品可检出苏丹红Ⅰ、Ⅳ以及808猩红等化工染料.血竭素高氯酸盐在0.408 ～816.6 μg· mL-1内有良好的线性关系,回归方程为y=1.746 1×107ρ+2 419.9,r=1.000 0;平均回收率为98.37％(RSD为1.2％,n=6).56批次样品中血竭素含量在0.01 ～0.25 mg·片-1内.结论 所建立的方法简便,准确,快速,可用于冠脉宁片中血竭药材的质量控制.
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乳没镇痛胶囊质量标准研究
目的：：建立乳没镇痛胶囊质量标准。方法：采用薄层色谱法对制剂中乳香和没药进行鉴别；采用高效液相色谱法测定制剂中血竭素高氯酸盐含量。结果：薄层色谱斑点清晰，分离度较好，专属性强。高效液相色谱法测定结果，血竭素高氯酸盐在79.53～530.2μg线性关系良好(r=0.9999)，平均加样回收率96.2%，RSD为0.8%。结论：该方法快速、灵敏、准确，可有效控制乳没镇痛胶囊的质量。
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高效液相色谱法测定蒙成药当归-4味散中血竭素的含量
建立蒙成药当归-4味散含量测定方法.采用液相色谱法测定血竭素高氯酸盐的含量.血竭素高氯酸盐的线性范围为0.05275～0.64940μg,相关系数r=0.9999,平均加样回收率为96.82%,RSD=1.2%.该方法具有简便、快速、准确等特点,可用于本品的质量控制.
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血竭素高氯酸盐对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马TGF-阻通路相关蛋白的影响
目的 探究血竭素高氯酸盐(Dracorhodin perchlorate,DP)对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马TGF-β1通路相关蛋白的影响.方法 随机选取10只大鼠作为假手术组,其余大鼠建立AD模型,造模成功后分为模型组、多奈哌齐组(0.33 mg/kg)、DP低剂量组(10 mg/kg)、DP中剂量组(20 mg/kg)、DP高剂量组(30mg/kg),所有大鼠均行灌胃治疗,假手术组及模型组给予等量生理盐水,治疗4周后,采用MWM实验检测大鼠学习记忆能力,免疫组化检测海马组织中Aβ的表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测海马组织中TGF-β1和SMAD2表达情况.结果 与模型组相比,DP组大鼠逃避潜伏时间明显缩短,穿越平台的次数明显增加,大鼠海马组织中Aβ的表达水平显著降低(P＜0.05),且呈剂量依赖性.Western blot检测结果显示,与模型组相比,DP组大鼠海马组织中TGF-β1表达水平显著升高(P＜0.05),p-SMAD2的表达水平显著降低(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论 DP能够改善AD模型大鼠的学习记忆,推测这一作用是通过调控海马组织中TGF-β1和p-SMAD2的表达水平实现的,为AD的临床治疗提供一定理论基础.
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复方血竭灌肠剂的质量控制
1 仪器与药品 HP-8452A紫外分光光度计.血竭素高氯酸盐对照品:中国药品生物制品检定所;血竭:中国科学院西双版纳玉林制药有限公司.白芨:北京景琪饮片厂.复方血竭灌肠剂:本院自制.2 质量控制2.1 性状 本品为血红色,黏稠液体.2.2 鉴别 取血竭灌肠液1g,放入20mL试管中,加乙醚10mL,密塞,振摇10分钟,滤过,滤液作为供试液.另取血竭对照液0.1g,同法制成对照药材,照薄层色谱法(中国药典)试验.取供试品、对照药材及血竭素高氯酸盐对照品溶液(精密称取血竭高氯酸盐对照品10mg置50mL棕色瓶中,加3％磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得)各10～ 20μL,分别点于同一G薄层板上.以氯仿-甲醇(95:5)为展开剂,展开,取出,晾干.供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同的橙色斑点.
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中药血竭的稳定性研究
血竭系棕榈科植物麒麟竭Daemonorps draco BI.果实渗出的树脂经加工制成,具有祛瘀定痛,止血生肌的功能[1].李时珍在<本草纲目>中称之为"活血圣药",是常用的名贵中药.血竭中的主要成分为血竭素、血竭红素、去甲血竭素等[2].实验表明[3]血竭中血竭素具有热不稳定性.但目前对此方面的研究还不够深入,报道甚少.因此本试验采用恒温加速试验法,以血竭素为指标,用高效液相色谱法测定其含量,探索温度对血竭中血竭素的变化规律,预测有效贮存期,为血竭的合理应用、制剂、提供参考和依据.
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血竭的稳定性研究
血竭系棕榈科植物麒麟竭Daemonorops draco BI.果实渗出的树脂经加工制成,具有祛瘀定痛、止血生肌.用于跌打折损,内伤瘀痛;外伤出血不止等症[1].
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血竭素高氯酸盐防治糖尿病肾病小鼠肾损伤的作用及机制的研究
目的:探讨血竭素高氯酸盐对糖尿病肾病(DN)所致肾损伤的防治作用.方法:用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射的方法建立DN小鼠模型.设血竭素高氯酸盐20、10和5 mg/(kg·d) 3个剂量治疗组,将血竭素高氯酸盐溶于等渗盐水中灌胃,以胰岛素治疗为对照组,同时设DN模型组及正常对照组.治疗4周后检测小鼠肾质量指数、肾小球细胞外基质(ECM)、24 h尿蛋白定量、血清肌酐清除率.用RT-PCR法检测血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及纤连蛋白(FN)的mRNA表达.结果:不同剂量血竭素高氯酸盐治疗组对SGK1、TGF-β1及FN的mRNA表达均有一定的抑制作用,其表达水平低于糖尿病(DM)模型组,其中血竭素高氯酸盐20和10 mg/kg组较正常对照组低(P＜0.05).血竭素高氯酸盐治疗组的肾质量指数、血清肌酐清除率、24 h尿蛋白定量及ECM均较DN模型组下降(P＜0.05).结论:血竭素高氯酸盐能防治小鼠DN的肾损伤,其机制可能与下调肾皮质TGF-β1、SGK1及FN的mRNA水平有关.
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高效液相色谱法测定八厘散中血竭素的含量
目的 用高效液相色谱法测定八厘散中血竭素的含量.方法 采用HyperClone BDS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(35∶65);流速1.0 mL·min-1;检测波长440 nm;柱温35℃.结果 血竭素高氯酸盐浓度的线性范围为2.96～14.80 μg·mL-1,r=0.999 8,回收率为98.54%(RSD=1.36%).结论 本法方便、快速、准确,可用于八厘散中的血竭素的含量测定.
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高效液相色谱法测定回生第一丹胶囊中血竭素的含量
目的运用反相高效液相色谱法测定回生第一丹胶囊中血竭素的含量.方法采用Zorbax C18柱,乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氢钠溶液(50:50)为流动相,检测波长为440nm.结果血竭素平均回收率为100.1%,RSD为1.5%(n=6).结论 本法简便、快速、重现性好,可作为产品的定量分析方法.
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血竭素高氯酸盐对早期糖尿病肾病肾脏损伤防治作用的研究
目的 探讨血竭素高氯酸盐对早期糖尿病肾病的肾脏保护作用.方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)150 mg·kg-1单次腹腔注射C57BL/6 小鼠,建立小鼠早期糖尿病肾病模型,设正常对照组、糖尿病肾病模型组、胰岛素对照组及血竭素高氯酸盐5、10、20 mg·kg-1·d-1 3种剂量治疗组(血竭素高氯酸盐溶于生理盐水中灌胃).治疗4 wk后检测各组小鼠肾重指数、肾小球细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、24 h尿蛋白含量、肌酐清除率,用RT-PCR方法 检测纤连蛋白(fibronectin,FN)mRNA表达,免疫组化方法 检测FN蛋白的表达及分布.结果 与糖尿病肾病模型组比较,血竭素高氯酸盐治疗组的肌酐清除率及尿蛋白均降低(P<0.05);各治疗组均能减少肾皮质中肾小球ECM的积聚(P<0.05)、FN mRNA和蛋白的表达(P<0.01).结论 血竭素高氯酸盐能保护早期糖尿病肾病的肾损伤.
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血竭素高氯酸盐促进离体兔角膜基质细胞凋亡的作用
目的 观察天然药物血竭素高氯酸盐(Dp)对离体兔角膜基质细胞增生的抑制作用,探讨其对细胞凋亡的影响,为临床上角膜瘢痕的防治提供新思路.方法 新西兰白兔18只,采用组织块培养法,在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液中培养兔角膜基质细胞,通过含有EDTA的胰蛋白酶消化进行传代.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同质量浓度Dp(10～80 μg/mL)对细胞生长的抑制率,电镜观察Dp作用后角膜细胞的凋亡情况,流式细胞术(FCM)检测Dp作用后细胞凋亡率.结果 第3代角膜基质细胞呈现对波形蛋白单克隆抗体阳性反应和对角蛋白12多克隆抗体的阴性反应.角膜上皮细胞对角蛋白12抗体呈现绿色的荧光反应.Dp作用24、48、72 h后,其IC50分别为47.721、41.40、32.01 μg/mL.MTT比色法显示Dp对角膜基质细胞的抑制率呈现明显的质量浓度依赖性;电镜可观察到角膜细胞的凋亡;FCM检测Dp作用24 h的细胞凋亡率呈剂量依赖性升高(P<0.01).在Dp作用后24、48、72 h,Dp质量浓度与抑制率呈正相关(r=0.984,P<0.01;r=0.947,P=0.007;r=0.920,P=0.03).结论 Dp对兔角膜基质细胞的增生具有显著的抑制作用,且呈量效关系促进角膜基质细胞发生凋亡.
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血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1在梗阻性肾病肾间质中的表达和血竭素高氯酸盐对其的干预作用
目的 探讨在单侧输尿管梗阻(UUO)性肾病肾间质中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(serum and glucocorticoid induced kinase 1,SGK1)的表达及血竭素高氯酸盐(Dracohodin Perchlorate,DP)对其的干预作用.方法 用单侧输尿管梗阻的方法致大鼠肾间质纤维化,60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量DP治疗组,分别在造模第3、7、14天后处死各组大鼠,采集静脉血检测肾功能(BUN、SCr)变化,肾组织标本用碘酸-席夫(PAS)染色确证发生纤维化病变,免疫组化技术检测肾组织SGK1蛋白的表达及DP干预后的变化.结果 与假手术组比较,模型组大鼠第7、14天血清BUN、SCr水平显著升高(P＜0.05),肾间质纤维化形成;与模型组比较,仅有DP高剂量治疗组大鼠血清肾功能指标好转(P＜0.05),肾间质纤维化好转.模型组大鼠肾间质SGK1蛋白的表达明显高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间延长其表达呈增强趋势;仅DP高剂量治疗组大鼠的肾间质SGK1蛋白显著低于模型组(P＜0.05).结论 在梗阻性肾病肾间质纤维化进程中,SGK1蛋白表达明显上调,而DP对SGK1蛋白的表达有显著的抑制作用,可能对肾间质纤维化病变起到一定延缓作用.
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血竭素高氯酸盐对成纤维细胞增殖与成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响
目的 观察血竭素高氯酸盐(Dp)对人皮肤成纤维细胞(Fb)生物学特性的影响,探讨其促进创而愈合的机制.方法 分离培养人正常Fb,将Dp以不同浓度(0.063、0.125、0.250、0.625、1.250、2.500 mg/L)分别加入培养液,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Dp在不同浓度以及不同时间点对体外培养的Fb增殖作用的影响.通过流式细胞仪,实时荧光定量聚合酶链式反应( real-time PCR)分别检测适浓度培养条件下Fb的细胞周期变化以及成纤维细胞生长因子(FGF) mRNA的合成表达.结果 Dp在0.625～1.250 mg/L浓度范围内,其吸光度值(0.237±0.012、0.243±0.017)均高于对照组(0.208±0.011)差异有统计学意义(t值分别为2.11、2.23,P＜0.05),此浓度范围可促进Fb增殖,且呈剂量依赖性,在浓度为1.250 mg/L时(A值0.243±0.017),促增殖作用为显著(t =2.23,P＜0.01),流式细胞仪结果显示,在浓度为1.250 mg/L时,Dp可明显促进Fb通过G1/S及S/G2期限制点,S期及G2/M期细胞与对照组比较明显增多,G0/G1期细胞与对照组比较明显减少(t值分别为4.32、7.53、3.27,P＜0.05).细胞因子mRNA表达测定中,1.250 mg/L Dp组与对照组比较表达明显上调,差异亦有统计学意义(=1.48,p＜0.05).结论 Dp能显著促进Fb增殖,加快Fb周期进程,同时可促进FGF的mRNA表达,可能与血竭促进创面愈合的机制有关.
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血竭素高氯酸盐对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖及凋亡的影响
目的:研究血竭素高氯酸盐(Dracorhodin perchlorate,DP)对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖和凋亡的影响并初步探讨其相关机制.方法:以舌鳞癌细胞Tca-8113为研究对象,采用CCK-8、流式细胞术分析及WesternBlot等方法检测不同浓度DP对Tca-8113细胞的增殖、凋亡及核因子E2-相关因子2(nuclear factor E2-relatedfactor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白表达的变化.采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行分析.结果:CCK-8检测表明,与空白对照组相比,DP可以显著抑制细胞增殖,且对细胞的增殖抑制作用有时间-剂量依赖性(P＜0.05).流式细胞术及Western Blot检测结果显示DP可以促进细胞凋亡(P＜0.05),并提高Nrf2、HO-1在Tca-8113细胞中的表达.结论:DP能抑制舌鳞癌细胞Tca-8113增殖并诱导其发生凋亡,其作用可能与Nrf2/HO-1信号通路激活有关;可能成为抗口腔癌药物.
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HPLC法测定骨筋丸胶囊中血竭素高氯酸盐的含量
目的:建立高效液相色谱法对骨筋丸胶囊进行含量测定.方法:选用Hypersil ODS分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(45:55),流速:1.0 ml·min-1;检测波长:440 nm.结果:血竭素高氯酸盐在0.14～1.40 μg内线性关系良好(r=0.999 7),平均回收率为98.3%,RSD=0.7%(n=6).结论:方法简便、快速、准确,能有效控制骨筋丸胶囊质量.
