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柿叶提取物对HEK293-APPswe转基因细胞模型的抗氧化作用及对Nrf2/HO-1途径的影响
目的:观察柿叶提取物(PLE)对阿尔茨海默病细胞模型HEK293-APPswe(20E2)的抗氧化应激的影响,并从核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路研究其作用机制.方法:Western blot检测APP蛋白表达水平,ELlSA检测各组细胞上清Aβ1-40的量,确定细胞模型是否建立成功.用CCK-8检测不同浓度的柿叶提取物对细胞活性的影响,选定干预佳浓度.设分组:SH-SY5Y为空白对照组(NC组),20E2为模型组(20E2组),用柿叶提取物干预为加药组(20E2+PLE组).DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内ROS的变化,ELISA检测各组细胞上清Aβ31-42的量,Western blot检测胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白的表达水平变化.结果:与模型组相比,加药组ROS表达减少,细胞外Aβ1-42浓度降低,细胞核内Nrf2表达增多,HO-1蛋白含量增加.结论:柿叶提取物能有效降低模型组氧化应激的水平,可能是通过降低Ap1-42的聚集,激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达来减弱氧化应激的损伤.
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丹参酚酸B通过Nrf2/HO-1对脑缺血/再灌注损伤的保护作用研究
目的:研究丹参酚酸B对脑缺血/再灌注(Cerebral ischemia/reperfusion,CI/R)损伤的保护作用及机制.方法:通过结扎颈总动脉缺血2h再灌注48 h复制CI/R模型,将实验大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参酚酸B组,每组10只,培养大脑皮层神经细胞,分别给予0,10,25,50 umol/L的丹参酚酸B.通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑蓝(TTC)染法测定大鼠脑梗死面积,WesternBlot检测大鼠Nrf2和HO-1蛋白表达水平以及细胞中Nrf2和HO-1蛋白表达水平.再通过细胞缺氧缺糖模型,检测不同浓度丹参酚酸B对于细胞死亡率及细胞内ROS水平以及转染Nrf2或HO-1 siRNA后细胞死亡率及细胞内ROS水平.结果:与模型组比较,丹参酚酸B组的大鼠脑梗死面积明显减小,脑组织中Nrf2和HO-1蛋白表达水平均明显增加(P＜0.05).大脑皮层细胞中,随着丹参酚酸B浓度增加,细胞HO-1蛋白及细胞核中Nrf2蛋白表达水平逐渐提高,而细胞质中Nrf2蛋白表达水平逐渐降低(P＜0.05).细胞缺糖缺氧条件下,与对照组相比,丹参酚酸B组均能够降低细胞的死亡率及细胞内ROS水平,敲除Nrf2或HO-1后,丹参酚酸B组的细胞死亡率与细胞内ROS水平均有明显减低(P＜0.05).结论:丹参酚酸B对大鼠CI/R具有保护作用,其作用机制可能通过Nrf2/HO-1减轻CI/R所造成的氧化应激损伤.
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依达拉奉对过氧化氢诱导血管内皮细胞Nrf2/HO-1表达的影响
目的 探讨依达拉奉对过氧化氢诱导血管内皮细胞Nrf2/HO-1表达的影响.方法 将对数生长期的血管内皮细分为对照组、依达拉奉组、H2O2组、依达拉奉+H2O2组、H2O2+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组,用不同条件的培养基培养48 h后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞内ROS,Western blot方法检测Nrf2/HO-1蛋白表达,PCR法检测Nrf2/HO-1 mRNA表达.结果 依达拉奉促进血管内皮细胞的增殖,拮抗H2O2诱导血管内皮细胞增殖抑制作用.与对照组比较,依达拉奉组ROS无明显增高(P＞0.05),Nrf2/HO-1蛋白和mRNA表达明显增高(P＜0.05);而H2O2组ROS明显增高(P＜0.05),Nrf2/HO-1蛋白和mRNA表达明显下降(P＜0.05).与H2O2组比较,依达拉奉+H2 O2组和H2O2+ NAC组ROS明显降低(P＜0.05),Nrf2/HO-1蛋白和mRNA表达明显增高(P＜0.05).结论 H2O2下调血管内皮细胞Nrf2/HO-1表达,而依达拉奉通过清除细胞内ROS,拮抗H2O2下调细胞Nrf2/HO-1表达,从而抑制H2O2导致血管内皮细胞损伤.
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醛类应激介导ω-3鱼油脂肪乳剂预处理减轻大鼠脑局灶性缺血再灌注损伤的机制研究
目的 探究ω-3鱼油脂肪乳剂预处理对大鼠脑局灶性缺血再灌注损伤的保护作用,分析其可能机制.方法 将40只SD大鼠随机分成正常组(C组)、模型组(M组)、ω-3鱼油脂肪乳剂5d组(FOFE-5组)、ω-3鱼油脂肪乳剂10d组(FOFE-10组)、ω-3鱼油脂肪乳剂15d组(FOFE-15组),静脉尾注药物,并建立鼠脑局灶性缺血再灌注损伤模型,比较各组大鼠的神经行为评分、大脑梗死面积,脑组织中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LHD)水平,核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧化酶HO-1mRNA表达.结果 C组大鼠的神经行为评分和大脑梗死面积均为0,FOFE-5、FOFE-10组以及FOFE-15组大鼠的神经行为评分和大脑梗死面积较M组显著降低;与M组比较,FOFE-5预处理使MDA、LHD水平显著降低;与C组比较,M组的大鼠脑组织中Nrf2和HO-1 mRNA相对表达量明显升高,FOFE-5预处理组的Nrf2和HO-1 mRNA相对表达量较M组明显升高,差异均具有显著性(P<0.05).结论 ω-3鱼油脂肪乳剂预处理通过调节醛类应激介导的氧化应激以及Nrf2/HO-1信号通路对大鼠大脑局灶性缺血再灌注损伤起到了保护作用.
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血竭素高氯酸盐对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖及凋亡的影响
目的:研究血竭素高氯酸盐(Dracorhodin perchlorate,DP)对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖和凋亡的影响并初步探讨其相关机制.方法:以舌鳞癌细胞Tca-8113为研究对象,采用CCK-8、流式细胞术分析及WesternBlot等方法检测不同浓度DP对Tca-8113细胞的增殖、凋亡及核因子E2-相关因子2(nuclear factor E2-relatedfactor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白表达的变化.采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行分析.结果:CCK-8检测表明,与空白对照组相比,DP可以显著抑制细胞增殖,且对细胞的增殖抑制作用有时间-剂量依赖性(P＜0.05).流式细胞术及Western Blot检测结果显示DP可以促进细胞凋亡(P＜0.05),并提高Nrf2、HO-1在Tca-8113细胞中的表达.结论:DP能抑制舌鳞癌细胞Tca-8113增殖并诱导其发生凋亡,其作用可能与Nrf2/HO-1信号通路激活有关;可能成为抗口腔癌药物.
