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胡椒碱和(R)-(+)-香茅醛对多药耐药乳腺癌细胞的耐药逆转作用
肿瘤治疗过程中多药耐药(MDR)的发生会降低化疗药物的疗效.转运体的高表达是引起肿瘤MDR的重要机制.P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)作为ABC(ATP-binding cassette,ABC)转运体家族的一员,经常在耐药肿瘤细胞中高表达,引起MDR.为了克服P-gp引起的MDR,抗肿瘤药物可以与P-gp抑制剂同时给药.胡椒碱和(R)-(+)-香茅醛都是来源于日常饮食的P-gp抑制剂.在本研究中我们评价了胡椒碱和(R)-(+)-香茅醛在多药耐药乳腺癌细胞系MCF-7/DOX细胞中的耐药逆转作用.经过72小时的孵育后,细胞毒性研究结果表明胡椒碱和(R)-(+)-香茅醛均能降低MCF-7/DOX细胞的耐药性.此外,胡椒碱可以浓度依赖性地下调MDR1基因的mRNA水平,而(R)-(+)-香茅醛对MDR1基因的mRNA水平没有影响.因此,胡椒碱和(R)-(+)-香茅醛可以浓度依赖性地逆转MCF-7/DOX细胞的MDR,胡椒碱的耐药逆转作用与下调MDR1基因的mRNA水平相关.
关键词： MDR1 胡椒碱 (R)-(+)-香茅醛 MCF-7/DOX P糖蛋白 -
替米沙坦在Caco-2细胞模型中的体外转运研究
目的 研究替米沙坦(telmisartan,TMS)在Caco-2细胞中的跨膜转运特征.方法 采用体外培养的人小肠上皮细胞Caco2模型对TMS的跨膜转运进行研究.考察了浓度、pH、P-糖蛋白(P-glyprotein,P-gp)抑制剂对TMS跨膜转运的影响.结果 TMS在Caco-2细胞中的转运存在外排作用,并且外排作用随着浓度的增加趋于饱和;另外TMS的吸收转运随pH值的增加而减少.加入P-糖蛋白抑制剂环孢素A和胺碘酮后,Pratio.从3.5分别下降到1.2和0.9,加入前后有极显著性差异(P＜0.01).结论 P-gp参与了TMS的跨膜转运,从而从吸收机制上初步解释了P-gp的外排作用可能是TMS生物利用度低,个体差异大的原因.
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浙贝母散剂逆转急性白血病多药耐药的临床研究
目的初步探讨浙贝母散剂和化疗合用时是否能起到逆转P170高表达的作用及其临床应用前景.方法.应用流式细胞仪检测急性白血病患者P糖蛋白(P170)表达,并对阳性患者随机分组,用浙贝母散剂加联合化疗进行逆转多药耐药的临床研究.结果.浙贝母散剂在临床安全剂量下,与常规化疗方案合用,仍可逆转P170高表达;浙贝母散剂与急性白血病(AL)常规化疗方案合用可以降低骨髓原始细胞百分比,有可能提高临床治疗完全缓解率.结论.浙贝母散剂可能成为一种安全有效的多药耐药逆转剂,在P170高表达的急性白血病中有较大的临床意义及推广价值.
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急性白血病患者MRP、p170与多药耐药关系的分析
目的:评价p糖蛋白 (p170) 和多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein, MRP)表达与急性白血病患者多药耐药的关系.方法:将急性白血病患者按治疗效果分为初治敏感组、完全缓解组和复发难治组三组,用免疫细胞化学结合流式细胞仪测定p170 和MRP.结果:p170 在各型白血病中完全缓解组均低于初治和复发难治组,MRP在AML中复发难治组明显高于完全缓解组;复发难治组35人中27例有上述两或一种蛋白表达增高,两者均与临床耐药相关.综合分析敏感性、特异性和准确性,以p170和MRP联合评价效果佳.结论:急性白血病多药耐药的发生是多因素的,p170 和MRP均与之有关.
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姜黄素逆转P-gp介导卵巢癌多药耐药机制的研究
目的 探讨姜黄素对P糖蛋白(P-gp)介导的卵巢癌多药耐药的逆转作用及其可能机制.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测人卵巢癌癌细胞株加药后的增殖,碘化丙啶(PI)染色法检测细胞凋亡率,westernblot法检测p-Akt和P-gp的表达量.结果 姜黄素合用顺铂处理细胞(OVCAR-3/DDP细胞株)48 h,顺铂的浓度在0.05～5μg/ml时,加入姜黄素25 μmol/L,耐药细胞生存率下降明显(P＜0.05),尤以顺铂0.25 μg/ml和姜黄素25 μmol/L作用时耐药细胞生存率下降明显.单用顺铂组细胞的凋亡率为(13.2±2.5)％,采用在顺铂基础上联合使用姜黄素后细胞凋亡率为(21.8±3.5)％,与单独使用顺铂相比,顺铂与姜黄素联合使用诱导细胞凋亡的作用显著增强(P＜0.05).与单用顺铂0.25 μg/ml相比,联合使用姜黄素后p-Akt和P-gp的表达量明显降低(P＜0.05),2组间Akt的表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 姜黄素不增加顺铂对OVCAR-3细胞毒性作用;对于OVCAR-3/DDP细胞株,姜黄素明显增加顺铂细胞毒性;姜黄素明显抑制了p-Akt和P-gp蛋白的表达.姜黄素可能通过抑制Akt信号通路降低P-gp的表达进而逆转多药耐药.
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TRAIL逆转P糖蛋白介导的多药耐药研究进展
恶性肿瘤是人类健康的重大威胁.化疗是恶性肿瘤综合治疗的重要组成部分,但肿瘤细胞对化疗药物的抵抗影响着化疗的疗效.国内外一些研究表明,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在治疗P糖蛋白介导的多药耐药肿瘤上有独特作用.在部分肿瘤中TRAIL能通过特定分子机制调控P-糖蛋白,进而产生逆转肿瘤耐药的生物学效应.该文对上述研究的进展予以综述.
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乳腺癌耐药蛋白在肿瘤中的研究进展
肿瘤细胞的多药耐药性(MDR)是导致临床肿瘤治疗失败的主要原因之一,而其发生主要与多药耐药基因的高表达有关.目前,公认的与MDR关系为密切的耐药蛋白有3个,即P糖蛋白、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和多药耐药相关蛋白1,分别由腺苷三磷酸(ATP)结合盒B亚家族成员1/MDR1、ATP结合盒亚家族G成员2和ATP结合盒亚家族C成员1基因编码.除促进肿瘤细胞化疗耐药外,上述3种耐药蛋白还能促进靶向治疗和内分泌治疗耐药,甚至还参与细胞内信号转导和基因的表达调控,因此肿瘤组织中多药耐药蛋白的高表达成为患者预后不良的标志之一.未来,需深入研究BCRP的功能以为逆转肿瘤耐药和寻找新的抗肿瘤治疗策略提供依据.
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P糖蛋白介导多药耐药逆转的研究进展
肿瘤的化疗是其综合治疗的一个重要方面,而多药耐药(MDR)的影响是导致化疗失败的重要原因.国内外对逆转MDR也进行了很多研究工作,在各种引起MDR的机制中,以P耱蛋白(Pgp)介导的MDR占重要方面,针对逆转Pgp介导的MDR的研究也较多,主要包括化学逆转剂、单克隆抗体和基因水平调控等方面.
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妊娠肝内胆汁淤积症的研究进展
妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是妊娠特发的肝脏功能紊乱疾病,已引起国内外学者的密切关注,成为近年产科研究的热点之一.ICP的发病机制尚未明确,各类学说异彩纷呈,但遗传、激素因素与ICP存在密切联系,这是目前普遍接受的观点.现将近年国内外对ICP的研究进展综述如下.
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组织T细胞因子4、P糖蛋白和抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-xl在结直肠癌中的表达及其临床意义
目的 探讨组织T细胞因子4(TCF-4)、P糖蛋白(P-gp)和抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-xl(Bcl-xl)在结直肠癌中的表达及其临床病理特征的关系.方法 选取广州医科大学附属广州市第一人民医院2013年1～12月100例手术切除结直肠癌组织及距病灶10 cm以上的正常组织,应用免疫组化的方法,分别检测TCF-4、P-gp和Bcl-xl蛋白在结直肠癌组织及正常组织的表达,并分析其与临床病理的关系.结果 TCF-4、P-gp和Bcl-xl在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为85％、67％和84％,明显高于正常黏膜组织(9％、2％、7％),差异有统计学意义(P＜0.05);结直肠癌组织中TCF-4、P-gp,Bcl-xl三者间表达呈正相关(r=0.301、0.581、0.390,P＜ 0.01).结直肠癌组织中TCF-4和Bcl-xl阳性表达与肿瘤组织的分化程度呈正相关(r=0.390,P＜0.01),结直肠癌组织中TCF-4、P-gp,Bcl-xl阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型之间无明显相关(P＞0.05),与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期有关(P＜0.05).结论 结直肠癌组织中TCF-4、P-gp和Bcl-xl的表达与浸润、转移、TNM分期及复发密切相关,可作为判断结直肠癌患者预后的指标,P-gp和Bcl-xl在结直肠癌中的多药耐药机制可能与Wnt/β-Catenin-TCF信号通路TCF-4有关.
关键词： 结直肠癌 组织T细胞因子4 P糖蛋白 抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-xl -
99mTc-MIBI乳腺癌显像与多药耐药蛋白MRP、Pgp及GST-π关系的研究
目的 探讨乳腺癌确诊患者99mTc-MIBI显像与多药耐药相关蛋白(MRP)、P糖蛋白(Pgp)、胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)的关系.方法 30例乳腺癌患者,术前行早期及延迟时相99mTc-MIBI乳腺癌显像,术后标本病理及免疫组化检查并测定MRP、Pgp及GST-π水平,分析三者与早期相、延迟相肿瘤/正常组织(T/N)摄取比值和滞留分数(R1)的关系.结果 MRP表达阴性组T/N(d)比值和RI明显高于表达阳性组(1.93±0.84 Vs 1.21±0.51,30%±32% Vs -27%±24%),而MRP表达阴性组与阳性组T/N(e)比值之间无明显差异.Pgp表达阴性组T/N(d)比值明显高于表达阳性组(1.66±0.85 Vs 1.15±0.30),而Pgp表达阴性组与表达阳性组T/N(e)比值和RI之间无明显差异.GST-π表达阴性组与表达阳性组之间T/N(d)、T/N(e)、RI均无明显差异.结论 99mTc-MIBI显像可以检测乳腺癌患者肿瘤细胞内MRP和Pgp的功能,对术后化疗有指导意义.
关键词： 乳腺癌 核素显像 多药耐药相关蛋白 P糖蛋白 胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶 -
贲门腺癌经典多药耐药机制的研究
目的 研究贲门腺癌经典多药耐药机制.方法 用流式细胞术检测55例贲门腺癌患者癌组织和距离肿瘤5 cm以上癌旁正常组织P糖蛋白.结果 55例贲门腺癌组织P糖蛋白阳性表达率为50.9%,癌旁正常组织未见P170表达,两者差别有统计学意义.结论 贲门腺癌存在经典多药耐药机制,检测癌组织P糖蛋白对化疗药物选择及逆转多药耐药具有重要意义.
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针对性化疗方案对恶性滋养细胞肿瘤患者P63、P糖蛋白表达的影响及其疗效
目的 分析针对性化疗方案对恶性滋养细胞肿瘤P63、P糖蛋白表达水平的影响及疗效.方法 选取2013年2月-2014年1月收治的恶性滋养细胞肿瘤88例,随机分为观察组与对照组各44例.另选取同期40例健康人为健康组.观察组依照病情予针对性化疗方案,对照组患者予统一的草药化疗,应用免疫组化法检测3组163、P糖蛋白表达,比较两组临床疗效.结果 观察组总有效率高于对照组(P＜0.05).观察组与对照组治疗前组织中P63、P糖蛋白表达阳性率高于健康组,治疗后观察组P63表达阳性率低于对照组(P＜0.05),但P糖蛋白表达阳性率与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 针对性化疗方案治疗可明显降低恶性滋养细胞肿瘤患者P63蛋白表达,但对P糖蛋白表达无显著影响,疗效优于统一的单药化疗.
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乌司他丁上调P糖蛋白表达对百草枯诱导HK-2细胞损伤的影响
目的 探讨乌司他丁(ulinastatin,UTI)上调P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达对百草枯(paraquat,PQ)诱导HK-2细胞损伤的保护作用及机制.方法 实验分为两部分.第一部分实验分为正常对照组、PQ组、UTI+PQ组、UTI对照组.第二部分实验分为阴性病毒组(包含对照组、PQ组、PQ+UTI组、UTI组)和P-gp siRNA组(包含对照组、PQ组、PQ+UTI组、UTI组).阴性病毒组:细胞转染空白病毒;P-gp siRNA组:细胞转染携带P-gp siRNA的病毒.常规培养HK-2细胞,在800 μmol/LPQ干预后,蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测HK-2细胞内P-gp表达量.并以携带P-gp沉默基因的慢病毒技术抑制P-gp表达,应用细胞活性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞存活率;Western blot法检测病毒转染后的P-gp的表达量;高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测细胞内PQ浓度.结果 与正常对照组比较,PQ组细胞内P-gp的表达量无明显变化;与PQ组比较,UTI+PQ组细胞内P-gp的表达量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与相应阴性病毒组比较,P-gp siRNA组细胞存活率无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).与阴性病毒+PQ组比较,P-gp siRNA+PQ组细胞内PQ浓度无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05);与P-gp siRNA+PQ组比较,P-gp siRNA+PQ+UTI组细胞内PQ含量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 UTI在体外能明显减少PQ诱导的HK-2细胞损伤,提高HK-2细胞的存活率,但可能与其上调P-gp的表达关系不大.
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三氧化二砷抑制K562/ADM细胞 P-糖蛋白表达并提高化疗药物的敏感性
目的研究三氧化二砷(As2O3)对人多药耐药白血病细胞K562/ADM的诱导凋亡作用和对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响,以及As2O3与常规化疗药物对耐药细胞的联合效应. 方法以白血病多药耐药细胞系K562/ADM为As2O3作用的靶细胞,用MTT比色法检测细胞增殖活性,光镜、激光共聚焦显微镜和电镜观察形态学变化,流式细胞术进行细胞周期分析和P-gp表达的检测,激光共聚焦显微镜检测P-gp功能.结果 K562/ADM 细胞对阿霉素(ADM)高度耐受,并与柔红霉素(DNR)和足叶乙甙(Vp16)交叉耐药.0.5～20.0 μmol/L As2O3抑制K562/ADM细胞增殖,抑制活性高于K562细胞.经As2O3诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学变化和亚G1期细胞比例增高等凋亡特征性改变.As2O3下调K562/ADM细胞P-gp的表达并抑制其功能,增加K562/ADM细胞对ADM、DNR和Vp16的敏感性.结论 As2O3能够诱导白血病多药耐药细胞凋亡,并通过抑制耐药细胞P-gp的表达和功能提高耐药白血病细胞对常规化疗药物的敏感性.
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环孢菌素D衍生物PSC 833逆转K562/A02细胞多药耐药的研究
目的证实PSC 833逆转剂的高效性,探讨PSC 833逆转肿瘤细胞多药耐药的机制.方法以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02(耐阿霉素)为实验研究对象,采用MTT法检测细胞毒性;直接免疫荧光测定法检测P糖蛋白(P-gp)表达水平;RT-PCR法检测mdr1 mRNA水平;以流式细胞术测定两种细胞系内柔红霉素(DNR)的潴留来反映P-gp的外排功能.结果与K562细胞系相比,K562/A02耐药细胞系mdr1 mRNA及P-gp高表达,DNR潴留减少.1?μmol/L的PSC 833对K562/A02细胞的mdr1 mRNA及P-gp表达水平无明显影响(P>0.05),PSC 833对K562/A02细胞的DNR细胞毒性有剂量依赖性增敏作用,其增敏作用至少是环孢菌素A(CsA)、维拉帕米(Ver)的3倍.PSC 833能增加K562/A02耐药细胞系的DNR潴留.1 μmol/L的PSC 833能使K562/A02细胞内DNR潴留量恢复至K562细胞的100.9%,而10 μmol/L CsA只恢复至K562细胞的86.9%, PSC 833对K562细胞系的DNR细胞毒性及DNR潴留均无明显影响(P>0.05).结论 PSC 833较CsA、Ver逆转活性至少高3～10倍,其逆转K562/A02多药耐药的机制可能是通过抑制P-gp功能,而非直接下调mdr1 mRNA及P-gp水平.
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Gelsolin、P-gp、TopoⅡ、GST-π检测在非小细胞肺癌预后中的价值
目的:探讨凝溶胶蛋白(Gelsolin)、P糖蛋白(P-gp)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷胱苷肽转移酶(GST-π)在预测非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征、癌细胞转移和患者预后中的价值.方法:采用S-P免疫组化法检测126例NSCLC患者癌组织标本及其癌旁组织标本Gelsolin蛋白、P-gp、TopoⅡ、GST-π表达情况.结果:Gelsolin蛋白在NSCLC患者中的阳性表达率为31.7%,P-gp为38.1%,TopoⅡ为52.4%,GST-π为85.7%.Kaplan-Meier生存分析显示,Gelsolin蛋白及P-gp阳性患者生存率较Gelsolin蛋白阴性患者为低(P＜ 0.05),Cox风险比例模型显示淋巴结转移、Gelsolin蛋白及P-gp阳性可显著增加NSCLC患者的死亡风险(P＜ 0.05).结论:Gelsolin蛋白与P-gp表达增加与NSCLC淋巴结转移及肿瘤进展相关,联合检测Gelsolin、P-gp、TopoⅡ、GST-π,可作为临床早期发现NSCLC转移及预测预后的指标.
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地塞米松对肺癌细胞株A549生长及化疗作用
[目的]观察地塞米松对肺腺癌细胞生长及与化疗作用的影响并探讨其与凋亡相关基因突变型p53及耐药P糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)表达相关性.[方法]将不同浓度的地塞米松单独或与长春新碱(VCR)联合作用于肺腺癌细胞株A549.四唑盐(MTT)试验测定药物对肺腺癌细胞A549的抑制率,筛选出药物的IC50浓度.免疫组化法测定IC50浓度各药物应用对p53、P糖蛋白(P-gp)表达的影响,比较二者的相关性.[结果]不同浓度的地塞米松对肿瘤的生长及化疗有影响,且上述药物与IG50浓度的VCR联合应用时能增加VCR的抑制率,用药后各组p503、P-gp表达均减少(P<0.01),且二者表达呈正相关.[结论]地塞米松对A549细胞的生长及化疗有影响,其机制可能与凋亡相关基因p53及P-gp介导的肺癌耐药机制有关.
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来源于干细胞的树突细胞激活免疫细胞对同源白血病干细胞的杀伤作用
目的:探讨白血病干细胞(LSC)来源的树突细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养对自身LSC的杀伤作用.方法:提取慢性粒细胞白血病加速期(CML-AP)患者的骨髓单个核细胞(BMMC),再应用CD34+CD38CD44+标记BMMC,流式分选仪分选出LSC并扩增、诱导出DC.取同源的单个核细胞诱导出CIK.用流式细胞技术检测DC和CIK细胞免疫表型、DC的p-糖蛋白(P-gp)耐药蛋白表达.荧光原位杂交(FISH)技术检测BCR/ABL融合基因在LSC及DC中的表达,乳酸脱氢酶释放法测定效应细胞对靶细胞的杀伤效应.结果:CIK与DC共培养后,CD40、CD80、CD83及人类白细胞抗原(HLA-DR)的构成均高于共培养前；CD3、CD3CD8、CD3CD56的成熟表型表达率高于共培养前,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).干细胞来源DC的P-gp表达阳性率为(60.61±12.38)％.3种效靶比对应的杀伤率差异有统计学意义(P＜0.01),随着效靶比的增加,细胞杀伤作用增强.结论:白血病干细胞来源DC功能正常,与CIK共培养对自身LSC有杀伤作用.
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干细胞来源DC与CIK共培养抗K562/A02干细胞的体外研究
目的 研究慢性粒细胞白血病(CML)源干细胞体外诱导生成树突细胞(DC)与同来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养,对白血病耐药株K562/A02干细胞(LSC)的杀伤作用.方法 提取BCR/ABL阳性CML患者骨髓单个核细胞(BMMC),流式分选技术分离纯化CD34+CD38-干细胞,体外扩增诱导生成DC.取同来源的CML患者BMMC诱导出CIK.DC与CIK共培养,流式细胞术(FCM)检测其对K562/A02干细胞的凋亡及杀伤情况.光镜下观察细胞形态,FCM分析DC和CIK免疫表型、K562/A02及DC的p-糖蛋白(P-gp)表达情况,荧光原位杂交(FISH)检测BCR/ABL融合基因在LSC及DC中的表达.结果 LSC能成功诱导为成熟DC,且LSC来源DC的P-gp阳性表达率约为51.8％.DC免疫表型CD40、CD80、CD83、CD86以及HLA-DR的表达率均高于共培养前；共培养后CIK免疫表型CD3、CD8、CD56的表达率高于单独培养的CIK,差异均有统计学意义(P＜0.01).DC与CIK共培养后对CD34+CD38干细胞的杀伤效应明显高于单独培养的CIK.CIK、DC-CIK均可诱导K562/A02细胞凋亡,凋亡率分别为(32.56±3.20)％、(40.21±3.09)％,且2组比较差异有统计学意义(P＜0.01),但对CD34+CD38干细胞无明显的诱导凋亡作用.结论 来源LSC的DC功能正常,同时该来源DC联合CIK能杀伤K562/A02干细胞,但对其无明显凋亡作用.
