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大鼠肝细胞浆一氧化氮合酶活性的简易测定法
一氧化氮合酶(NOS)主要有结构型一氧化氮合酶(cNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)两类.NOS在体内催化左旋精氨酸生成了一氧化氮(NO).NO的主要稳定代谢产物有NO2-和NO3-;,NO3-;浓度远远大于NO2-浓度[1],目前,NOS活性测定大多采用放射强度测定法[2],尽管此种方法灵敏度高,但测定过程复杂,需要比较昂贵的仪器,限制了方法的普及,目前亦有通过测定NO稳定代谢产物NO2-浓度测定NOS活性的方法[2],虽然该方法简便,但测定NO2-浓度的试剂具有毒性和腐蚀性,且试剂来源不便和不稳定.故本实验室参考有关文献[2-4],通过测定酶反应体系NO稳定代谢产物NO3-浓度的变化,建立了一种简便易行的NOS活性测定法.
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辛伐他汀对SHR心肌组织SOD、MDA、NOS、NO及心肌间质胶原含量的影响
目的观察辛伐他汀对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响.方法 20只16周龄雄性SHR大鼠,随机分成2组:(1)辛伐他汀组(n=10辛伐他汀2 mg/kg*d);(2)SHR空白对照组(n=10);(3)同龄雄性正常血压WKY大鼠对照组(n=10).给药12周后称量大鼠左室重量并计算大鼠左室重量指数;测定心肌组织丙二醛、超氧歧化酶、一氧化氮及一氧化氮合酶;用改良VG染色法使胶原特殊染色,计算机图像分析测量心肌间质及心肌小动脉周围胶原的胶原容积分数对心肌纤维化程度进行比较.结果辛伐他汀组与SHR组相比心肌超氧歧化酶无明显改变、丙二醛明显减少而心肌一氧化氮及结构型一氧化氮合酶(cNOS)活性明显升高;辛伐他汀组均未能有效降低SHR血压和左心室肥厚(P<0.05)但能使心室内、外膜及心肌小动脉周围的胶原减少.结论一氧化氮/活性氧平衡失调可能是导致高血压心肌纤维化的又一个重要因素;辛伐他汀抗纤维化作用可能与其抗氧化作用及改善心肌cNOS活性密切相关.
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桥本甲状腺炎组织血管形成与血管内皮生长因子和结构型一氧化氮合酶mRNA的关系
血管形成是桥本甲状腺炎(HT)重要的病理特征之一.研究发现血管内皮生长因子(VEGF)和一氧化氮(NO)参与血管形成,但其与桥本甲状腺炎血管形成的关系尚少见报道.本研究检测HT甲状腺组织中VEGF、结构型一氧化氮合酶(cNOS)mRNA的表达,及微血管密度(MVD),分析VEGF和cNOS mRNA的表达与HT血管形成的关系.
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不对称二甲基精氨酸与动脉粥样硬化
血管内皮在维持血管张力和血管结构以及血压调节中起决定性作用.由内皮衍生的主要血管活性介质是一氧化氮(NO).在生理情况下,NO主要由内皮结构型一氧化氮合酶(eNOS)合成.内皮在切应力和内源性血管活性物质刺激下,由eNOS不断产生小量的NO[1,2].
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iNOS、NO与卵巢癌的关系分析
一氧化氮(nitric oxide,NO)参与血管、神经系统功能等生理和病理生理过程的调节,并在较高浓度时具有细胞毒性作用.在哺乳动物体内,NO由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)催化合成,NOS分为神经型一氧化氮合酶(neuronal nitricoxide synthase,nNOS)、血管型一氧化氮合酶(en-dothelial nitric oxide synthase,eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)3种亚型,其中nNOS和eNOS合称为结构型一氧化氮合酶,主要在神经和血管内皮细胞中表达,在生理状态下产生低浓度和中等浓度水平的NO.iN-OS主要由巨噬细胞产生并能够产生高浓度的NO[1].iNOS的表达和NO的产生在卵巢癌的发生、发展和转移中发挥着重要的作用,本文就目前的相关研究进展作一综述.
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慢性缺氧高二氧化碳大鼠支气管中结构型一氧化氮合酶的分布
目的:研究结构型一氧化氮合酶(cNOS) 在慢性缺氧高二氧化碳的大鼠支气管中的表达及分布.方法:用原位杂交技术,对慢性缺氧高二氧化碳的大鼠支气管中cNOS的表达进行定位研究.结果:慢性缺氧高二氧化碳大鼠的各级支气管平滑肌细胞呈cNOS阳性染色反应,上皮细胞呈cNOS弱阳性染色反应.结论:慢性缺氧高二氧化碳时,cNOS在支气管上皮细胞中的表达被抑制.
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知母宁对慢性低O2高CO2大鼠肺小动脉结构型和诱导型NOS基因表达的影响
目的:研究知母宁对慢性低O2高CO2大鼠肺小动脉结构型一氧化氮合酶(cNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响,进而了解其对肺动脉高压的防治机制.方法:将SD大鼠分为正常对照组、低O2高CO2组、知母宁组.采用图像分析、免疫组化、组织原位杂交、酶动力学等方法,测定各组大鼠动脉血、肺组织NO含量、NOS活性、肺细小动脉iNOS、cNOS及其基因表达的变化.结果:(1)低O2高CO2组mPAP、RV/(LV+S)显著高于其他组(P＜0.01),3组间mCAP比较差异无显著性;(2)血、肺组织匀浆NO含量低O2高CO2组显著低于正常对照组,知母宁组显著高于低O2高CO2组(P＜0.01);(3)低O2高CO2组血浆及肺组织匀浆cNOS活性显著低于正常对照组(P＜0.01),iNOS活性均显著高于正常对照组(P＜0.01);知母宁组大鼠血浆及肺组织匀浆cNOS活性均显著高于低O2高CO2组(P＜0.01),血浆iNOS活性无明显差异,肺组织匀浆iNOS活性略高于低O2高CO2组(P<0.05);(4)低O2高CO2组肺细小动脉iNOS及其mRNA表达显著高于正常对照组(P＜0.01),cNOS及其mRNA表达显著低于正常对照组(P＜0.01),知母宁组大鼠肺细小动脉iNOS、cNOS及其mRNA表达均显著高于低O2高CO2组(P＜0.01).(5)光、电镜下低O2高CO2组肺血管结构重建,知母宁组肺血管结构重建明显减轻.结论:知母宁能促进低O2高CO2大鼠肺小动脉iNOS及cNOS基因表达,上调NO/NOS体系,使NO合成增多可能为其抑制慢性低O2高CO2肺动脉高压和肺血管结构重建的作用的重要作用机制之一.
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益肾降压方对RPH大鼠内皮由来因子的调控作用
目的研究中药经验方"YSJY"对RPH大鼠肾组织cNOS与ET-1蛋白及基因表达的作用,初步探讨其可能的作用机制.方法通过大鼠肾次全切除法制备RPH动物模型,采用免疫组化及RT-PCR法检测肾组织cNOS与ET-1蛋白及基因表达变化.结果 YSJY治疗8wk后:① 免疫组化显示模型组近曲小管cNOS呈弱阳性表达、ET-1呈强阳性表达,而YSJY组近曲小管cNOS表达呈强阳性,ET-1阳性表达明显减弱,且其近曲小管、肾小球已经接近正常组.② 与模型组比较,YSJY组肾组织ET-1mRNA表达减弱(P＜0.01), cNOSmRNA表达上调(P＜0.05).结论 YSJY可通过抑制肾组织ET-1mRNA表达、促进cNOSmRNA表达,使肾组织局部ET-1含量减少、NO含量增加,从而实现其降压、保护肾功能的作用.
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一氧化氮合酶在肝癌血管生成和转移中的作用
目的观察结构型一氧化氮合酶(cNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR,肥胖抑素(Leptin)及其受体ob-R在正常肝组织、肝硬化和原发性肝癌中表达的不同情况,分析它们与微血管密度(MVD)、Ki-67及其相互之间的关系,探讨cNOS及血管生长因子在原发性肝细胞癌血管生成、肿瘤细胞增殖和转移过程中的调节作用. 方法运用原位杂交技术,检测cNOS mRNA在20例正常肝组织\,40例肝硬化、80例肝癌标本中的表达分布和定位情况;采用SP免疫组织化学方法,检测VEGF及其受体KDR、Leptin及其受体ob-R在40例正常肝组织、60例肝硬化、95例肝癌标本中的表达变化. 结果 (1)肝细胞癌及非癌性肝组织中血管内皮细胞、肝癌细胞及单核/吞噬细胞上均可见有cNOS mRNA的表达;肝细胞癌、肝硬化中内皮细胞cNOS mRNA阳性表达率明显高于正常肝组织,肝细胞癌中癌细胞cNOS mRNA阳性表达率>肝硬化组织中的肝细胞>正常肝组织中的肝细胞;肝癌组织中内皮细胞cNOS mRNA阳性表达者的MVD、细胞增殖指数明显高于阴性表达者;肝癌中细胞增殖指数随着MVD的增大而增高,且有转移倾向的肝癌MVD和细胞增殖指数明显高于无转移倾向的肝癌.(2)VEGF及其受体KDR与肝癌MVD、细胞增殖指数及转移发生率密切相关;肝癌血管内皮细胞cNOS的表达和癌细胞VEGF的表达密切相关,两项均阳性者MVD明显高于cNOS阴性VEGF阳性者,VEGF阴性表达时,cNOS的表达情况对肝癌MVD没有影响.(3)Leptin在肝细胞癌中的表达明显高于肝硬化和正常肝组织,且Leptin强阳性表达者的MVD明显较高,Leptin在肝癌血管内皮细胞上也有表达,而且阳性表达者的MVD及转移发生率显著高于阴性者;肝癌组织中癌细胞Ob-R的表达与MVD之间未见明显相关,血管内皮细胞上可见少量Ob-R的表达;肝癌细胞VEGF的表达和血管内皮细胞Leptin的表达呈正相关关系,两项均阳性表达者MVD和转移发生率明显增高;肝癌cNOS与Leptin的表达之间未见明显相关. 结论 (1)肝癌细胞cNOS的表达可能参与肝癌发生过程;(2)肝癌血管内皮细胞cNOS的表达在肝癌的血管生成和肿瘤细胞增殖过程中起着重要的作用;(3)cNOS和VEGF在肝癌血管生成中相互关联、共同作用,cNOS可能主要在VEGF介导的肿瘤血管生成过程中发挥促血管生成作用;(4)VEGF和Leptin在肝癌的血管生成和转移过程中互相关联、共同作用;(5)cNOS和Leptin在肝癌血管生成方面的作用仅是简单的叠加作用.
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参麦注射液对心肌缺血-再灌注大鼠一氧化氮合酶系统的影响
目的:探讨参麦注射液(SM)对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的防治作用及机制.方法:结扎冠状动脉前降支复制大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型,描记标准肢体II导联,测定心肌组织中丙二醛含量及结构型、诱导型一氧化氮合酶(cNOS,iNOS)活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测其cNOS mRNA、iNOS mRNA表达.结果:SM组心律失常发生率明显低于其他各组;cNOS活性及其mRNA表达显著增高(P<0.01),iNOS活性及其mRNA表达显著降低(P<0.01).结论:SM能减轻缺血-再灌注引发的损伤,其作用机制可能与增加cNOS活性,促进cNOS mRNA表达,抑制iNOS活性,降低iNOS mRNA表达有关.
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柴胡止血液对人子宫内膜螺旋动脉内皮细胞结构型一氧化氮合酶的影响
目的:探讨柴胡止血液对人子宫螺旋动脉内皮细胞的影响机制.方法:采用显微解剖技术分离出人子宫螺旋动脉,用酶消化法进行分离培养内皮细胞并测定其分泌的结构型一氧化氮合酶(cNOS)的含量.结果:柴胡止血液大、中剂量组分别较自然生长组、消炎痛组和归脾丸组降低了cNOS的含量(P＜0.05).结论:柴胡止血液能够通过降低cNOS的含量来抑制NO的产生,从而减轻对血管舒张的作用,达到治疗置放宫内节育器后导致的异常出血的目的.
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吸入性过敏患者血清中一氧化氮合酶及其亚型的测定及意义
目的 探讨吸入性过敏患者血清中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及其亚型包括诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和结构型一氧化氮合酶(construtive NOS,cNOS)的表达及意义.方法 化学比色法测定36例吸入性过敏患者及30例健康人血清中NOS及iNOS的水平并比较二者之间的差异.结果 NOS在吸入性过敏患者为38.30±6.31 U/ml,高于健康人27.65±4.35 U/ml(P<0.05),cNOS在两组(分别为22.99±5.34 U/ml,14.10±3.19 U/ml)间有显著性差异(P<0.05),iNOS则在两组(分别为14.50±3.77 U/ml,14.34±2.02 U/ml)比较无显著性差异(P>0.05).结论 吸入性过敏患者血清中NOS表达增加,且主要是cNOS,提示cNOS-NO通路在吸入性过敏病变过程中有一定的意义.
