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苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡
目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制.方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用.结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L-1)能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖.作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L-1,Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P＜0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升.Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P＜0.05).结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关.
关键词： 苦参碱 结肠癌 凋亡 总蛋白激酶B信号通路 B细胞淋巴瘤-2 Bcl-2相关X蛋白 -
黄芩对血管性痴呆沙土鼠学习记忆及海马神经细胞凋亡的作用研究
目的:探讨中药黄芩乙醇提取物对血管性痴呆(VaD)沙土鼠的保护作用及抑制海马CA1区神经细胞凋亡的研究.方法:以双侧颈总动脉夹闭沙土鼠为研究对象,实验分为正常对照组、VaD组、VaD+黄芩低剂量(25mg/kg)组、VaD+黄芩中剂量(50mg/kg)组、VaD+黄芩高剂量(100mg/kg)组,采用乙醇提取黄芩,腹腔注射给药,2次/d,共14d.采用Morris水迷宫评价沙土鼠的学习记忆能力,Nissl染色观察海马CA1区神经细胞的形态变化,TUNEL染色观察神经细胞的凋亡,Western blotting方法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/Bcl-2相关x蛋白(Bax)凋亡通路变化.结果:黄芩乙醇提取物能够增加提高沙土鼠的学习记忆能力,减少Morris水迷宫中潜伏期时间(P＜0.05,P＜0.01),增加穿梭次数(P＜0.05,P＜0.01);减轻海马组织的病理性改变;降低神经细胞的凋亡数(P＜0.01),并且提高了Bcl-2/Bax的比值(P＜0.05).结论:黄芩乙醇提取物能够改善VaD沙土鼠的学习记忆能力,减轻海马组织的凋亡,其作用机制可能与Bcl-2/Bax凋亡通路相关.
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枸杞多糖对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制
目的 研究枸杞多糖(LBP)对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制.方法 按照体重将ICR小鼠随机分为7组,每组12只:低中高3个剂量实验组(灌胃LBP 10,20,40 mg·kg-1),对照组(灌胃尼莫地平4 mg·kg-1),而正常组、假手术组和模型组均灌胃0.9％NaCl 10 mL·kg-1,1次/天.连续灌服7d后,用Longa法建立脑中动脉栓塞模型.以噻唑蓝染色法(TTc)检测各组小鼠脑梗死体积,以DNA断裂的原位末端标记法检测小鼠缺血侧海马区神经元凋亡率,以免疫印迹法检测脑组织中Bcl-2、Bax的表达.结果 模型组、对照组、低中高3个剂量实验组的脑梗死体积(％)分别为36.64±2.48,13.26±0.29,28.49±0.87,22.15±0.69,17.45±0.56,明显高于正常组和假手术组,差异均有统计学意义(均P＜0.01);与模型组比较,对照组、低中高3个剂量实验组差异均有统计学意义(均P ＜0.01).模型组、对照组、低中高3个剂量实验组的神经元凋亡率(％)分别为78.15±2.65,32.16±2.05,65.48±0.95,40.13±1.21,35.16±1.05,明显高于正常组和假手术组,差异均有统计学意义(均P＜0.01);与模型组比较,对照组、低中高3个剂量实验组差异均有统计学意义(均P＜0.01).假手术组、模型组、对照组、中剂量实验组的Bax蛋白表达量分别为0.02±0.01,0.32,±0.01,0.22±0.01,0.25±0.01;这4组的Bcl-2蛋白表达量分别为34.51±0.01,0.24±0.01,0.37±0.02,0.38±0.01.与假手术组比较,模型组缺血侧大脑皮层Bcl-2蛋白表达量明显降低,Bax表达量明显升高,差异均有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,对照组和中剂量实验组Bcl-2蛋白表达量明显升高,Bax表达量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 LBP可抑制小鼠脑缺血再灌注损伤后促凋亡蛋白Bax的表达,促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制神经元的过度凋亡,对缺血侧脑组织具有神经保护作用.
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慈菇消脂丸对NF-κB介导的非酒精性脂肪肝病大鼠肝细胞凋亡的干预作用
目的 通过观察慈菇消脂丸对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝细胞凋亡相关调控基因核转录因子κB(NF-κB)、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,探讨解毒化痰法治疗NAFLD的作用机制.方法 60只SPF级健康雄性Wistar大鼠,随机分为6组:正常对照组,模型组,慈菇消脂丸高、中、低剂量组,盐酸吡格列酮组,每组10只.采用高脂饮食喂饲大鼠建立NAFLD模型后,连续药物治疗6周.给药结束后,处死全部动物,取肝脏和血清.全自动生化分析仪检测各组大鼠肝功、血脂;HE染色观察肝脏的组织形态学特点;透射电子显微镜观察肝细胞的超微结构;Western Blot技术检测肝组织NF-κB、Bcl-2、Bax的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平升高(P＜0.01);肝组织呈中重度脂肪变性并同时伴有肝细胞凋亡;肝组织中NF-κB、Bax蛋白表达增强(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达减低(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.01).与模型组比较,慈菇消脂丸各剂量组大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平降低(P＜0.01);肝组织NF-κB、Bax蛋白表达减低(P＜0.01),Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05).与盐酸吡格列酮组比较,慈菇消脂丸高剂量下调NF-κB蛋白、上调Bcl-2蛋白表达的作用更显著(P＜0.01).结论 慈菇消脂丸能够明显改善NAFLD大鼠肝功及血脂;上调Bcl-2蛋白表达,降低NF-κB、Bax蛋白表达,使Bcl-2/Bax比值升高,从而抑制肝细胞凋亡,起到防治NAFLD的作用.
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针刺治疗脑梗死对神经元保护作用机制的实验研究
目的 观察针刺治疗大鼠急性脑梗死模型对Bcl-2及Bax表达的影响,探讨针刺对抗细胞凋亡的机制.方法 选用wistar大鼠30只,随机分为假手术组、缺血组和针刺组.线栓法制作大脑中动脉梗死模型;免疫组化法观察大鼠脑梗死24h后针刺足三里、外关两穴位,对细胞凋亡因子bcl-2和Bax表达的影响.结果 在假手术组中,bcl-2和Bax有微量的表达.假手术组与缺血组和针刺组比较,其梗死灶周围组织中bcl-2和Bax的表达存在明显差异(P＜0.05).缺血组和针刺组比较,梗死灶周围组织中Bcl-2和Bax表达也出现明显差异(P＜0.05).Bcl-2在24h后表达增高,而Bax在24h后表达下降,其中都以针刺组变化为明显.结论 早期应用针刺治疗急性脑梗死,其机制是通过影响bcl-2和Bax表达来抑制细胞凋亡,从而保护脑神经细胞.
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吡格列酮联合5－氮杂胞苷干预对大鼠胰岛素瘤细胞增殖、凋亡及功能的影响
目的：观察吡格列酮（ PGZ）联合5－氮杂胞苷（5－AzaC）干预对大鼠胰岛素瘤细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌量的影响。方法2015年6月—2016年6月于河南省平顶山市第二人民医院内分泌科进行实验。将大鼠胰岛素瘤细胞（RIN－m5f）行体外原代及传代培养，将培养好的细胞分为5组：空白组（不加任何试剂）、模型组[白细胞介素－1β（IL－1β）2 ng／ml＋干扰素γ（IFN－γ）100 U／ml]、吡格列酮组（IL－1β2 ng／ml ＋IFN－γ100 U／ml＋PGZ 15μmol／L）、5－AzaC组（IL－1β2 ng／ml ＋IFN－γ100 U／ml ＋5－AzaC 1．5μmol／L）及PGZ＋5－AzaC组（IL－1β2 ng／ml ＋IFN－γ100 U／ml ＋PGZ 15μmol／L ＋5－AzaC 1．5μmol／L）。应用倒置显微镜观察RIN－m5f细胞形态学的变化，流式细胞仪测定RIN－m5f细胞凋亡情况，应用Western blot法检测B细胞淋巴瘤－2（Bcl－2）、多糖聚合酶（PGZRP）表达情况，应用ELISA法检测葡萄糖刺激胰岛素分泌能力。结果 RIN－m5f细胞培养24 h、48 h、72 h后应用流式细胞仪可观察到PGZ组、5－AzaC组、PGZ＋5－AzaC组和RIN－m5f细胞凋亡率低于模型组（ q PGZ组＝12．122、8．452、8．252， P均＜0．05；qt5－AzaC组＝12．252、8．563、7．529， P均＜0．05；q PGZ＋5－AzaC组＝8．563、7．452、8．963， P ＜0．05），PGZ＋5－AzaC组细胞凋亡率低于PGZ组与5－AzaC组（ q PGZ组＝7．022、6．986、8．523， P均＜0．05；q 5－AzaC组＝8．963、9．123、10．523， P均＜0．05），培养48 h、72 h后PGZ＋5－AzaC组细胞凋亡率较培养24 h时显著下降（ q ＝5．996、6．789， P均＜0．05）。 Bcl－2、PG－ZRP表达水平：模型组＞PGZ组＞5－AzaC组＞PGZ＋5－AzaC组（ q ＝7．896、8．233、9．102， P均＜0．05）。 PGZ＋5－AzaC组葡萄糖刺激胰岛素分泌能力大于PGZ组、5－AzaC组（ q ＝8．252、7．896， P均＜0．05），5－AzaC组葡萄糖刺激胰岛素分泌能力大于PGZ组，差异均有统计学意义（q＝8．123， P ＜0．05）。结论 PGZ联合5－AzaC能有效抑制高糖诱导大鼠胰岛素瘤凋亡，恢复胰岛素瘤分泌能力，其作用机制可能与其能下调Bcl－2、PGZRP表达水平有关。
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端粒酶活性与bcl-2蛋白在膀胱癌组织中表达的研究
目的:探讨端粒酶活性与bcl-2蛋白在膀胱癌组织中表达的意义.方法:应用TRAP-银染方法和免疫组化S-P法,分别对36例膀胱癌和12例癌旁组织中的端粒酶活性和bcl-2蛋白进行检测.结果:膀胱癌组织端粒酶阳性29例(80.6%),bcl-2蛋白阳性者13例(36.1%).癌旁组织端粒酶阳性5例(41.7%),bcl-2蛋白则无阳性.二者与膀胱癌分期呈正相关,且在分化不良、复发、多发膀胱癌中阳性率明显高于分化良好、非复发、单发膀胱癌.结论:端粒酶与bcl-2都在膀胱癌的发生、发展中起重要作用,且二者存在紧密联系.
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活动期狼疮肾炎外周血T、B淋巴细胞表面Fas及bcl-2表达的研究
目的: 探讨活动期狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者外周血中T、B凛巴细胞表面Fas及bcl-2表达的变化及其与T、B淋巴细胞凋亡变化的关系,淋巴细胞的凋亡改变对疾病活动度及肾功能的影响.方法:采用流式细胞仪对活动期LN患者外周血中T、B淋巴细胞表面Fas及bcl-2进行检测,同时测定T、B淋巴细胞的凋亡状态,分析其与LN肾功能变化、抗dsDNA疾病活动指标变化的相关性.结果:B淋巴细胞、CD8+T细胞表面bcl-2表达明显高于正常对照组(P均＜0.01),CD4+T细胞表面bcl-2表达降低(P＜0.05).CD4+、CD8+T细胞表面Fas表达高于正常对照组(P＜0.05),B淋巴细胞表面Fas表达降低(P＜0.01);B淋巴细胞凋亡百分率明显下降(P＜0.01),CD4+T细胞百分率下降(P＜0.01),CD8+T细胞百分率增加(P＜0.05);LN肾功能的变化、体内抗dsDNA的增加与B淋巴细胞凋亡的减少、CD4+T细胞的减少、CD8+T细胞的增加均具有明显的相关性.结论:LN患者体内淋巴细胞凋亡的异常变化与淋巴细胞表面凋亡基因的异常表达相关,且在LN发生发展过程中具有重要作用.
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高压氧对大鼠持续性局灶脑缺血后脑中Bcl-2蛋白表达的影响
目的探讨高压氧(HBO)治疗对大鼠局灶性脑缺血的作用及其机制.方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型.70只健康雄性SD 大鼠,随机分为假手术组,缺血对照组,缺血+HBO组,缺血+高压空气组.每大组再各分5小组(n＝4),分别对应6,24,48,72 h及7 d时间点断头取脑.观察各组大鼠梗塞灶体积及Bcl-2蛋白合成,并进行组间比较.结果早期应用HBO能减少梗塞灶体积,提高半暗带内Bcl-2蛋白的合成.结论早期应用HBO可能对治疗急性脑缺血有效.
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乙型肝炎病毒相关性肾炎患者肾小管上皮细胞凋亡的病理学特点
目的 探讨在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肾炎(HBV-GN)中,HBV X (HBx)蛋白与肾小管上皮细胞凋亡之间的关系及其可能的信号机制.方法 采用TUNEL法检测HBV-GN患者肾组织中细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(AI).采用免疫组织化学方法检测肾组织HBx蛋白、信号转导子和转录活化子3(STAT3)和磷酸化STAT3 (p-STAT3)水平,并对肾组织HBx蛋白表达水平及其AI进行相关性分析.结果 86％(19/22)的HBV-GN患者的肾小管上皮细胞内有HBx蛋白表达,而对照组无表达.HBV-GN组HBx蛋白、p-STAT3、STAT3、Bax的表达水平和AI均显著高于对照组(P值均＜0.05),Bcl-2的表达水平和Bcl-2/Bax比值均显著低于对照组(P值均＜0.05),且HBV-GN患者的AI与肾脏HBx蛋白表达(r=0.612,P=0.032)、24 h尿蛋白定量(r=0.824,P=0.020)均呈正相关.结论 肾小管上皮细胞凋亡是HBV-GN肾脏病理的重要病变之一.STAT3信号蛋白活化和Bcl-2/Bax比值降低可能参与其中.
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DNA-PKcs、Bcl-2、Cyclin G在星形细胞瘤中的表达及与肿瘤分化和预后的关系
目的分析DNA-PKcs、bcl-2、cyclin G在星形细胞瘤中的表达与肿瘤分化及预后的关系.方法应用免疫组化S-P法对54例脑原发性星形细胞瘤中DNA-PKcs、bcl-2、cyclin G的表达进行检测,对其中41例取得随访资料的肿瘤患者存活因素进行分析.结果 DNA-PKcs、bcl-2表达在星形细胞瘤,间变型星形细胞瘤和多形性胶质母细胞瘤中有显著性差异.星形细胞瘤中DNA-PKcs、bcl-2、cyclin G表达率分别为90.74%,75.93%,62.96%.DNA-PKcs、bcl-2、cyclin G表达标记指数随着肿瘤恶性程度的增加而逐渐增高.三者标记指数高的肿瘤预后差.结论 DNA-PKcs、bcl-2、cyclin G过度表达与星形细胞瘤分化和预后密切相关,能够客观的反映肿瘤增生分化和恶性程度,可以作为判断星形细胞瘤分化和预后有价值的参考指标.
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内毒素脂多糖诱导人牙髓细胞凋亡的机制
目的 观察内毒素脂多糖(lipopolysaecharide,LPS)时体外培养的人牙髓细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤.2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤相关蛋白X(Bax)活性的影响.方法用不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00、100.00mg/L)的LPS作用于细胞,采用MTT染色法检测LPS对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡;采用免疫组织化学染色技术检测细胞的caspase-3、Bcl-2、Bax表达变化.结杲不同浓度LPS组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P<0.05),细胞增殖抑制率呈剂量依赖关系;流式细胞术检测结果显示,不同浓度的12S作用细胞72 h,细胞的凋亡率分别为3.1%、3.5%、12.1%、14.4%、24.3%、59.7%;免疫组织化学染色显示Bax表达增强,Bcl-2、caspase-3表达减弱.结论LP3可显著地抑制人牙髓细胞增殖.诱导细胞凋亡,降低Bcl-2、caspase-3活性,升高Bax活性,并呈明显的量效关系.
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高压氧辅助治疗新生儿缺血缺氧性脑病后遗症的效果及其机制探讨
目的 探讨高压氧辅助治疗新生儿缺血缺氧性脑病后遗症的疗效,并探讨其机制.方法 将87例新生儿缺血缺氧性脑病患儿随机分为观察组49例和对照组38例,两组均给予营养脑细胞治疗,观察组给予高压氧治疗.观察两组患儿治疗前后神经心理行为评分及血清Bcl-2水平变化.结果 观察组、对照组患儿治疗前发育商分别为81.31±28.28、79.92±27.65,治疗后发育商分别为103.28±29.26、82.53±31.30.两组患儿治疗前发育商相比,P>0.05;观察组患儿治疗后发育商与观察组治疗前、对照组治疗后相比,P均<0.05;对照组患儿治疗前后发育商相比,P>0.05.观察组、对照组患儿治疗前血清Bcl-2水平分别为(16.43±3.21)、(16.12±2.98)U/mL,治疗后血清Bcl-2水平分别为(5.84±1.16)、(13.90±12.35)U/mL.两组患儿治疗前血清Bcl-2水平相比,P>0.05;观察组患儿治疗后血清Bcl-2水平与观察组治疗前、对照组治疗后相比,P均<0.05;对照组患儿治疗前后血清Bcl-2水平相比,P>0.05.直线相关性分析显示,观察组患儿治疗后血清Bcl-2与脑发育商呈负相关,r=-0.623,P<0.001.结论 高压氧辅助治疗新生儿缺血缺氧性脑病后遗症可以明显提高患儿脑发育商,其原因可能与抑制患儿神经细胞凋亡有关.
关键词： 高压氧 新生儿缺血缺氧性脑病后遗症 脑发育商 细胞凋亡 B细胞淋巴瘤-2 -
酶育牛黄对肉瘤S180荷瘤小鼠的抑瘤作用及机制
目的 观察酶育牛黄(CBCG)对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用,并探讨其抑瘤的分子机制.方法 取昆明种小鼠50只,建立肉瘤S180荷瘤模型,随机分为5组,各10只.CBCG高、中、低剂量组分别给予2、1、0.5 g/kg的CBCG灌胃,NCB组给予1 g/kg的天然牛黄灌胃,模型组给予0.1 g/L淀粉溶液灌胃.连续给药10 d后,处死小鼠剥取肿瘤,称重计算除模型组外各组小鼠抑瘤率.提取各组肿瘤组织蛋白,用Western blot法检测PI3K/AKT通路的PTEN、AKT、P-AKT(Thr308)、P-AKT(Ser473)及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达量.结果 随着CBCG剂量增加,抑瘤率逐渐增高(P均<0.05).NCB组抑瘤率与CBCG高剂量组抑瘤率比较差异无统计学意义.与模型组相比,CBCG高、中、低剂量组PTEN、BAX表达增加,P-AKT(Thr308)/AKT、P-AKT(Ser473)/AKT值及Bcl-2表达降低(P均<0.05).结论 CBCG在体内具有抑制肉瘤生长的作用,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路从而促进细胞凋亡有关.
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Bcl-2、AR和MMP-10在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
目的 探讨B细胞淋巴瘤/白血病蛋白-2 (b-cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2)、雄激素受体(androgen receptor,AR)、基质金属蛋白酶-10(matrix metalloproteinase-10,MMP-10)在非小细胞肺癌中的表达及临床意义.方法 用免疫组织化学SP法检测Bcl-2、AR和MMP-10在110例非小细胞肺癌(观察组)及癌旁正常组织(对照组)中的表达情况.结果 观察组的Bcl-2、AR以及MM P-10阳性率均显著地大于对照组(P＜0.05);Bcl-2阳性率与组织学类型、肿瘤TNM分期以及有无淋巴结转移有显著地关系(P＜0.05);AR阳性率与肿瘤TNM分期以及有无淋巴结转移有显著地关系(P＜0.05);MM P-10阳性率与肿瘤分化程度、TNM分期以及有无淋巴结转移有显著地关系(P＜0.05).结论 Bcl-2、AR和MMP-10表达失衡与非小细胞肺癌的发生发展密切相关.
关键词： B细胞淋巴瘤-2 雄激素受体 基质金属蛋白酶-10 非小细胞肺癌 -
非小细胞肺癌患者中B细胞淋巴瘤-2、人体第二表皮生长因子受体蛋白表达的比较研究
目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、人体第二表皮生长因子受体(Her-2)蛋白的表达情况及临床意义.方法 应用组织芯片、免疫组化技术检测208例NSCLC患者的肿瘤组织、150例癌旁组织以及17例良性肺疾病肺组织中的Bcl-2、Her-2蛋白的表达情况.结果 ①NSCLC癌组织中Bcl-2蛋白表达率明显高于癌旁组织及肺良性疾病肺组织( P<0.05)；Bcl-2蛋白表达水平与NSCLC临床分期及淋巴结转移有相关性(P<0．05).②NSCLC癌组织中Her-2蛋白的表达率明显高于癌旁组织及肺良性疾病肺组织(P<0.05)；Her-2蛋白表达水平与NSCLC分化程度差异有统计学意义(P<0．05).结论 ①Bcl-2、Her-2蛋白在NSCLC组织中均高表达,提示Bcl-2及Her-2基因的表达异常与NSCLC的发生发展密切相关；②Bcl-2蛋白表达程度与NSCLC的临床分期及淋巴结转移有关,Her-2蛋白表达程度与NSCLC的分化程度有关,提示两者均与肿瘤恶性生物学行为密切相关.
关键词： 组织芯片 免疫组化 B细胞淋巴瘤-2 人体第二表皮生长因子受体 非小细胞肺癌 -
KSHV RTA介导的宿主细胞Bcl-2表达上调促进病毒的溶解性感染
目的 研究卡泼肉瘤病毒(kaposis's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义.方法 用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(western blotting)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平；采用荧光素酶报告基因技术检测RTA对Bcl-2基因启动子活性的调节.构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,TPA诱导48h后,分别用PCR、PI染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率.结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平显著增高.RTA反式激活Bcl-2基因启动子,这种激活作用具有剂量依赖性.用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,TPA诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少.结论 KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生.
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口腔扁平苔藓患者口腔黏膜组织的细胞凋亡情况及凋亡蛋白的表达
目的 探讨口腔扁平苔藓(OLP)患者口腔黏膜组织的细胞凋亡情况、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)以及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达.方法 选择40例OLP患者作为观察组,并同期选择40例健康志愿者作为对照组,运用免疫组织化学法检测两组口腔黏膜组织的凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达情况,同时运用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测上皮细胞的凋亡情况.结果 OLP患者口腔黏膜凋亡细胞增多,染色质边聚,且可见凋亡小体.观察组口腔黏膜Bcl-2、Bax表达水平及其阳性率、上皮细胞凋亡指数均高于对照组(均P<0.05).结论 OLP患者口腔黏膜组织存在淋巴细胞凋亡异常,细胞凋亡可能与OLP的发病密切相关,口腔黏膜组织中Bcl-2及Bax的表达水平或可作为临床诊断OLP的重要参考指标.
关键词： 口腔扁平苔藓 细胞凋亡 B细胞淋巴瘤-2 B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白 -
半夏泻心汤对胃癌前病变大鼠胃黏膜中B细胞淋巴瘤-2与表皮生长因子受体表达影响
目的:分析半夏泻心汤对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃黏膜中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)与表皮生长因子受体(EGFR)表达影响.方法:选取雄性SD大鼠20只,依据随机数字表法将其分成两组,观察组(10只)与对照组(10只),行适应性喂养一周,使用MNNG结合情志刺激、饥饱失常法造模,从16周(造模成功后)起,观察组大鼠给予半夏泻心汤3g/ml灌胃,对照组使用等剂量生理盐水灌胃,每天1次,连续给予8周,治疗8周以后将大鼠处死,分别取胃大弯、胃体、胃小弯、胃窦及胃底2mm胃黏膜两枚;观察大鼠一般状况、胃黏膜病理状况和EGFR、Bcl-2蛋白表达状况.结果:给药后,观察组大鼠体重高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组大鼠腺体显著萎缩,局部腺上皮出现增生,同时伴随炎性细胞浸润,胃小凹结构模糊、排列发生紊乱,产生淋巴滤泡,有杯状细胞;观察组大鼠机体黏膜没有发现萎缩现象,伴随有少许炎性细胞浸润.观察组大鼠EGFR、Bcl-2蛋白表达量及表达率均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:半夏泻心汤经过调整EGFR、Bcl-2蛋白表达,诱使“病态”细胞凋亡,使细胞增殖和凋亡平衡恢复,从而起到逆转PLGC作用.
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免疫性卵巢早衰小鼠卵巢组织中Cx43、Bcl-2表达的研究
目的:检测免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵巢组织中缝隙链接蛋白43(Cx43)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的mRNA及蛋白水平,以探讨其在免疫性POF发病中的作用.方法:建立免疫性POF小鼠模型并选择同期佐剂对照组及正常对照组,分别于2周、4周、6周观察各组小鼠双侧卵巢组织学变化.ELISA法测定各组小鼠血清FSH水平.免疫组化法检测各组小鼠卵巢组织中Cx43和Bcl-2蛋白相对表达量,PCR法检测Cx43和Bcl-2 mRNA水平.结果:POF组4周及6周Cx43蛋白、Bcl-2蛋白相对表达量显著低于正常对照组和佐剂对照组(P＜0.05);POF组4周及6周Cx43蛋白、Bcl-2蛋白相对表达量较POF组2周降低(P＜0.05).POF组4周及6周Cx43 mRNA、Bcl-2 mRNA表达水平显著低于正常对照组佐剂对照组(P＜0.05);POF组4周及6周Cx43 mRNA、Bcl-2 mRNA表达水平较POF组2周降低(P＜0.05).结论:在免疫性POF小鼠卵巢组织中Cx43和Bcl-2蛋白及mRNA表达均下调,可能与在免疫性POF的发生发展有关.
