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黄原胶对前交叉韧带切断术所致骨关节炎的疗效及其机制
本研究评价黄原胶(xanthan gum,XG)对前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transaction,ACLT)所致的兔膝关节骨关节炎(osteoarthritis,OA)模型中软骨损伤的保护作用,并探讨XG对OA软骨中caspase-3、Bax蛋白表达的影响.将60只雄性新西兰大耳白兔按随机数字表法分为6组,每组10只,随机选取1组为正常对照组(control组),剩余5组右膝采用ACLT建立OA模型,并根据药物干预不同分为模型组(model 组)、XG-0.6 mg·kg-1、XG-1.2 mg·kg-1、XG-2.4 mg·kg 1治疗组和玻璃酸钠(sodium hyaluronate,SH-1.2 mg·kg-1)治疗组.测量治疗过程中各组兔膝关节局部温度和膝关节宽度;治疗结束后,对各组兔关节进行大体形态学观察;通过HE染色对各组兔关节软骨组织病理学形态进行观察;Western blot法检测各组家兔软骨细胞中Bax和caspase-3的激活态cleaved caspase-3含量.实验结果表明,XG可抑制OA所致的膝关节局部温度的上升和膝关节宽度的增加,且具有剂量依赖性;XG具有改善由OA所致的股骨髁和胫骨平台形态学异常和组织损伤的作用;Westem blot结果表明:与control组相比,model组和XG-0.6 mg·kg-1组家兔膝关节软骨细胞中Bax和cleaved caspase-3水平显著增加(P＜0.01),model组和XG-0.6 mg·kg-1组间兔膝关节软骨细胞中Bax和cleaved caspase-3 水平无显著性差别(P＞0.05),且明显高于XG-1.2 mg·kg-1和XG-2.4 mg·kg-1组(P＜0.01),XG-2.4 mg·kg-1和XG-1.2 mg·kg-1组间兔骨关节软骨细胞中cleaved caspase-3水平无显著性差别(P＞0.05),XG-2.4 mg·kg-1组兔骨关节软骨细胞中Bax水平低于XG-1.2 mg·kg-1组(P＜0.05).综上所述,XG能够有效地保护OA中的软骨损伤,并能够抑制OA软骨中Bax和caspase-3蛋白的表达.
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左乙拉西坦对小鼠急性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制
目的 研究左乙拉西坦(LEV)对小鼠急性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,并对其相关作用机制进行初步探讨.方法 将30只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(n=6)、对照组(n=6)和实验组(n=18).各组大鼠用改良Longa法建立小鼠脑中动脉栓塞模型;假手术组不阻塞大脑中动脉供血;实验组分别于建模后0,3,6h通过给予左乙拉西坦10 mg·kg-1,尾静脉注射,每次6只;假手术组和对照组给予等量生理盐水.用Longa评分标准进行神经功能评分;用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死体积;用转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)法检测海马区神经元凋亡情况,并计算凋亡指数(AI);用免疫组化法检测B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)阳性表达情况.结果 小鼠脑缺血再灌注24h后,假手术组、对照组和0,3,6h实验组Longa评分分别为0,(2.88±1.03),(1.77±0.56),(2.21±0.96),(2.66±1.03)分;与对照组比较,0h实验组Longa评分明显降低(P＜0.05),但实验组组间比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).假手术组、对照组和0,3,6h实验组梗死面积分别为0,(21.03 ±0.25),(13.14±0.44),(13.21±0.53),(16.86±0.65) mm3;AI分别为1.16±0.32,36.51±2.44,18.45±0.46,20.15±0.69,26.49±0.77,与对照组比较,实验组脑梗死体积及AI指数显著降低(P＜0.01),0,3h实验组脑梗死体积明显小于6h实验组(P＜0.01);随着左乙拉西坦作用时间的延长,小鼠AI逐渐升高,且3组间两两比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.01).假手术组、对照组和0,3,6h实验组Bax分别为2.63±1.04,20.76±1.75,18.13±0.42,19.05±0.71,19.25±1.32;caspase-3分别为5.15±2.02,60.13±2.41,34.31±2.36,36.25±2.01,52.13±2.23.与对照组相比,实验组caspase-3明显降低(P＜0.05或P＜0.01);随着左乙拉西坦作用时间的延长,小鼠caspase-3表达量逐渐升高,但Bax表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 左乙拉西坦抑制脑缺血再灌注损伤后促凋亡蛋白Bax、caspase-3的表达,从而抑制神经细胞凋亡,发挥脑保护作用.
关键词： 脑血管疾病 左乙拉西坦 再灌注损伤 B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白 -
枸杞多糖对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制
目的 研究枸杞多糖(LBP)对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制.方法 按照体重将ICR小鼠随机分为7组,每组12只:低中高3个剂量实验组(灌胃LBP 10,20,40 mg·kg-1),对照组(灌胃尼莫地平4 mg·kg-1),而正常组、假手术组和模型组均灌胃0.9％NaCl 10 mL·kg-1,1次/天.连续灌服7d后,用Longa法建立脑中动脉栓塞模型.以噻唑蓝染色法(TTc)检测各组小鼠脑梗死体积,以DNA断裂的原位末端标记法检测小鼠缺血侧海马区神经元凋亡率,以免疫印迹法检测脑组织中Bcl-2、Bax的表达.结果 模型组、对照组、低中高3个剂量实验组的脑梗死体积(％)分别为36.64±2.48,13.26±0.29,28.49±0.87,22.15±0.69,17.45±0.56,明显高于正常组和假手术组,差异均有统计学意义(均P＜0.01);与模型组比较,对照组、低中高3个剂量实验组差异均有统计学意义(均P ＜0.01).模型组、对照组、低中高3个剂量实验组的神经元凋亡率(％)分别为78.15±2.65,32.16±2.05,65.48±0.95,40.13±1.21,35.16±1.05,明显高于正常组和假手术组,差异均有统计学意义(均P＜0.01);与模型组比较,对照组、低中高3个剂量实验组差异均有统计学意义(均P＜0.01).假手术组、模型组、对照组、中剂量实验组的Bax蛋白表达量分别为0.02±0.01,0.32,±0.01,0.22±0.01,0.25±0.01;这4组的Bcl-2蛋白表达量分别为34.51±0.01,0.24±0.01,0.37±0.02,0.38±0.01.与假手术组比较,模型组缺血侧大脑皮层Bcl-2蛋白表达量明显降低,Bax表达量明显升高,差异均有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,对照组和中剂量实验组Bcl-2蛋白表达量明显升高,Bax表达量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 LBP可抑制小鼠脑缺血再灌注损伤后促凋亡蛋白Bax的表达,促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制神经元的过度凋亡,对缺血侧脑组织具有神经保护作用.
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色素上皮衍生因子通过调节Bcl-2的表达参与砷致人肝细胞线粒体凋亡
目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)在砷诱导人正常肝细胞线粒体凋亡中的作用机制.方法 体外培养人正常肝细胞系HHL-5,亚砷酸钠处理24 h,分别为0(对照)、2、5、8、10μmol/L组,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,实时荧光定量PCR检测PEDF、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bax)mRNA表达水平.结果 与对照组(688.67±47.50)比较,10μmol/L组(562.33±31.50)线粒体膜电位显著降低(P<0.01),5μmol/L组(634.50±49.03)、8μmol/L组(655.67±13.65)未见明显变化(P均>0.05).与对照组[(86.69±12.19)％]比较,2μmol/L组PEDF mRNA表达水平[(81.52±13.93)％]未发生明显变化(P>0.05);5、8、10μmol/L组PEDF mRNA表达水平[(59.35±11.21)％、(58.46±8.69)％、(51.57±7.58)％]均显著降低(P均<0.01),其中10μmol/L组PEDF mRNA表达量低.与对照组[(96.48±31.14)％]比较,10μmol/L组Bcl-2 mRNA表达水平[(53.53±21.49)％]明显降低(P<0.05);与对照组[(84.47±35.38)％]比较,5、8、10μmol/L组Bax mRNA表达水平[(65.14±32.34)％、(71.81±12.61)％、(72.22±28.40)％]未发生明显变化(P均>0.05).结论 PEDF可能通过调节Bcl-2表达水平,参与砷致人肝细胞线粒体凋亡.
