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KSHV RTA上调宿主细胞Bcl-2表达的分子机制研究
目的 研究卡波氏肉瘤病毒(Kaposis's Sarcoma-Associated Herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制.方法用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平;采用PCR定点突变和荧光素酶报告基因技术,检测RTA对Bcl-2基因启动子活性的调节,并鉴定启动子序列中对RTA调控具有重要作用的顺式反应元件.结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平显著增高.RTA通过与Bcl-2基因启动子中CCN9GG反应元件结合激活Bcl-2的转录,这种激活作用呈剂量依赖性,并且P2启动子对RTA反式激活Bcl-2基因不可或缺.结论 KSHV RTA能够上调宿主细胞Bcl-2表达,CCN9GG样RTA反应元件和P2启动子对RTA调控Bcl-2表达具有重要作用.
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卡泼肉瘤病毒复制转录激活因子调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义
目的 研究卡泼肉瘤病毒(Kaposis′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义.方法 突变Bcl-2启动子第1个与第2个CCN9GG 样序列,构建了新的报告质粒(命名为pGL3-△RRE1,2),用荧光素酶试验和染色质免疫共沉淀进一步验证CCN9GG样RTA反应元件的功能.构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,佛波酯诱导48 h后,分别用PCR、PI(碘化吡啶)染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率.结果 突变第1个与第2个CCN9GG序列导致启动子活性显著降低;染色质免疫共沉淀试验证实RTA蛋白与CCN9GG序列存在直接相互作用.用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,佛波酯诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少.结论 KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生.
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卡泼氏肉瘤病毒复制转录激活因子上调宿主细胞 survivin 表达的机制
目的：研究卡泼肉瘤病毒（KSHV ）编码的复制转录激活因子（ RTA）对宿主细胞survivin表达的调控及机制。方法用实时聚合酶链反应（RT－PCR）、蛋白质印迹（Western blot）技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞survivin mRNA和蛋白质表达水平；采用荧光素酶报告基因技术，检测RTA对survivin基因启动子活性的调节。结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞survivin mRNA和蛋白质表达水平显著增高。RTA通过增强survivin基因启动子活性反式激活survivin表达。结论 KSHV RTA能够特异性地增强survivin基因启动子活性，上调宿主细胞survivin表达。
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KSHV RTA介导的宿主细胞Bcl-2表达上调促进病毒的溶解性感染
目的 研究卡泼肉瘤病毒(kaposis's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义.方法 用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(western blotting)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平；采用荧光素酶报告基因技术检测RTA对Bcl-2基因启动子活性的调节.构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,TPA诱导48h后,分别用PCR、PI染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率.结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平显著增高.RTA反式激活Bcl-2基因启动子,这种激活作用具有剂量依赖性.用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,TPA诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少.结论 KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生.
