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卡泼肉瘤病毒复制转录激活因子调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义
目的 研究卡泼肉瘤病毒(Kaposis′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义.方法 突变Bcl-2启动子第1个与第2个CCN9GG 样序列,构建了新的报告质粒(命名为pGL3-△RRE1,2),用荧光素酶试验和染色质免疫共沉淀进一步验证CCN9GG样RTA反应元件的功能.构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,佛波酯诱导48 h后,分别用PCR、PI(碘化吡啶)染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率.结果 突变第1个与第2个CCN9GG序列导致启动子活性显著降低;染色质免疫共沉淀试验证实RTA蛋白与CCN9GG序列存在直接相互作用.用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,佛波酯诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少.结论 KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生.
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KSHV RTA介导的宿主细胞Bcl-2表达上调促进病毒的溶解性感染
目的 研究卡泼肉瘤病毒(kaposis's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义.方法 用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(western blotting)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平；采用荧光素酶报告基因技术检测RTA对Bcl-2基因启动子活性的调节.构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,TPA诱导48h后,分别用PCR、PI染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率.结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平显著增高.RTA反式激活Bcl-2基因启动子,这种激活作用具有剂量依赖性.用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,TPA诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少.结论 KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生.
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中国南方鼻咽鳞状细胞癌与EB病毒感染的关系
目的:探讨中国南方鼻咽癌高发区鼻咽鳞状细胞癌或称角化性鳞状细胞癌(Keratinizing squamous cell carcinoma,KSCC)是否也如非角化性癌那样与EB病毒感染有密切的关系.方法:应用PCRSouthernblotting、原位分子杂交和免疫组化法检测38例鼻咽鳞状细胞癌组织中EB病毒DNA及其产物EBNA-1,EBNA-2,EBERs,LMP-1,ZEBRA,EA-D,VCA和MA的表达.结果:(1)37例鳞状细胞癌组织中有EBERs阳性癌细胞出现,阳性率达97.4%(37/38);(2)在37例鳞状细胞癌中的大部分未分化和低分化癌细胞表达EBNA-1和EBERs,21例(56.8%,21/37)组织内有LMP-1表达;(3)其中23例(62.2%,23/37)组织中只有少数癌细胞表达ZEBRA或/和EA-D;(4)22例(59.5%,22/37)组织中分化较好的或角化性癌细胞表达VCA或/和MA.结论:(1)中国南方地区鼻咽鳞状细胞癌与非角化性癌一样与EB病毒的感染有着较恒定而非偶然的关系;(2)鳞状细胞癌组织中大多数未分化和低分化癌细胞均以II型潜伏状态感染EB病毒,主要表达EBNA-1、EBERs和LMP-1,其中一小部分癌细胞也表达溶解期流产型蛋白ZEBRA和EA-D;(3)EB病毒在大部分分化好的和角化性癌细胞中则能够完成其复制周期并表达溶解晚期蛋白VCA或/和MA.
关键词： 鼻咽肿瘤 Epstein-Barr病毒 鳞状细胞癌 溶解性感染
