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门静脉注射D-氨基半乳糖和脂多糖建立猪急性肝功能衰竭模型
目的通过门静脉注射D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖的方法建立一种接近临床条件的猪急性肝功能衰竭(AHF)模型.方法 22头健康家猪随机分为5组.组Ⅰ:门静脉注射生理盐水(3头);组Ⅱ:门静脉注射1 μg/kg脂多糖(5例);组Ⅲ:门静脉注射0.5 g/kg D-Gal(5例);组Ⅳ:门静脉注射0.5 g/kg D-Gal+1 μg/kg 脂多糖(6例);组Ⅴ:门静脉注射0.5 g/kg D-Gal+1 μg/kg脂多糖,接受辅助性部分原位肝移植术(APOLT)(3例).观察各组动物的临床表现、生化指标和病理改变.结果组Ⅰ和组Ⅱ动物全部存活,生化指标轻度改变.组Ⅲ动物1周内死亡率为40%(2/5).组Ⅳ中5例(5/6,83%)在120 h内死亡,注药后48 h血清天冬氨酸氨基转移酶达高峰(4912 U/L±759 U/L),同时伴有总胆红素、乳酸、血氨明显升高和凝血酶原时间延长.组Ⅴ动物行APOLT治疗后AHF逆转,第3天起各生化指标开始恢复,至第7天基本恢复正常,病理结果显示原肝得到部分再生.结论通过门静脉注射0.5 g/kg D-Gal和1 μg/kg脂多糖的方法可建立一种理想的猪急性肝功能衰竭模型.该模型可用于辅助性部分原位肝移植治疗急性肝功能衰竭的研究.
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疏风解毒胶囊对D-氨基半乳糖/脂多糖诱导大鼠急性肝损伤保护作用
目的 探讨疏风解毒胶囊对D-氨基半乳糖/脂多糖致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法 SD大鼠80只,随机分为对照组、模型组、疏风解毒胶囊组、地塞米松组,每组20只.对照组大鼠ip生理盐水0.5 mL,其他各组ip D-氨基半乳糖(D-GalN) 700 mg/kg和脂多糖(LPS) 10 μg/kg制备急性肝损伤模型.地塞米松组每天ip地塞米松5 mg/kg、疏风解毒胶囊组每天ig疏风解毒胶囊100 mg/kg,每天1次,连续给药7d.取各组大鼠肝组织进行HE染色观察病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清相关指标:丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转氨酶(AST)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)、高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1)、谷胱甘肽转移酶(GST)水平.结果 与模型组比较,疏风解毒胶囊组大鼠肝组织的病变程度较轻,大鼠血清ALT、AST、IL-1β、TNF-α、OCT、HMGB-1及GST水平明显下降(P＜0.05),疏风解毒胶囊组与地塞米松组比较,各项指标差异不显著(P＞0.05).结论 疏风解毒胶囊可通过降低IL-1β及TNF-α水平抑制D-GalN/LPS诱导大鼠急性肝脏炎症反应,起到减轻D-GalN/LPS导致的急性肝损伤作用.
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沙苑子黄酮对CCl4及D-氨基半乳糖致急性肝损伤的保护作用
目的探讨沙苑子黄酮(FAC)对肝损伤的保护作用.方法采用0.1%CCl4(10 mL/kg)、D-氨基半乳糖(D-Gal,700 mg/kg)分别ip造成小鼠急性肝损伤模型,并ig不同剂量的FAC,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,观察肝组织病理改变;用CCl4损伤原代培养大鼠肝细胞,测定细胞培养液ALT、AST活性,MTT法测定肝细胞增殖活性.结果 FAC能显著降低小鼠CCl4和D-Gal损伤原代培养大鼠肝细胞模型ALT和AST活性(P＜0.01),病理学观察显示,FAC明显减轻肝组织损伤程度(P＜0.01).FAC显著提高肝细胞活性,促进肝细胞增殖.结论 FAC具有显著的保肝作用.
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山楂酸降低小鼠急性肝损伤炎症反应和氧化应激水平机制的研究
目的 研究山楂酸对大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及相关机制.方法 将50只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组及山楂酸低、中、高剂量组(12.5、25.0、50.0 mg/kg),每组10只.对照组腹腔注射生理盐水,其他各组腹腔注射脂多糖(LPS) 50 mg/kg联合D-氨基半乳糖(D-Gal N)500 mg/kg制备小鼠ALI模型.山楂酸低、中、高剂量组在造模前1h分别给予12.5、25.0、50.0 mg/kg山楂酸灌喂,造模6h后处死小鼠,留取血清和肝组织.测定血清中谷丙转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,苏木精-伊红染色观察肝组织病理学变化,硫代巴比妥酸法测定肝组织中的丙二醛(MDA)含量,H2O2反应产物比色法测定肝组织中的髓过氧化物酶(MPO)含量,酶联免疫吸附实验法分别检测血清及肝组织中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量,蛋白质印迹法(Western Blot)检测肝组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达及核因子κB(NF-κB)通路的活化情况.结果 与模型组比较,山楂酸低、中、高剂量组小鼠的肝组织病理学有明显改善;血清ALT和AST水平均降低,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);肝组织中的MDA和MPO含量均降低,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);Nrf2和HO-1蛋白含量均升高,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);NF-κB通路受到抑制,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);血清和肝组织中的TNF-α、IL-6含量均降低,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论 山楂酸对LPS/D-Gal N诱导的小鼠ALI模型具有保护作用,其机制与抑制NF-κB通路、激活Nrf2/HO-1通路有关.
关键词： 山楂酸 急性肝损伤 脂多糖 D-氨基半乳糖 核因子E2相关因子2 -
肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的研究
目的:探讨同种异体肝细胞经腹腔、脾腔移植对D-氨基半乳糖(D-gal)诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用.方法:采用D-gal诱导大鼠急性肝衰竭,诱导后60小时,分4组进行治疗实验,Ⅰ组:脾内移植2×107肝细胞,同时肌肉注射环孢霉素A(CsA)10 mg/kg;Ⅱ组:脾内注射生理盐水1 ml,同时肌注CsA10 mg/kg;Ⅲ组:经腹腔移植2×107肝细胞,Ⅳ组:经腹腔注射生理盐水1 ml,观察大鼠的存活率、肝脏功能、肝脏病理变化情况.结果:Ⅰ组大鼠存活率与Ⅱ组有明显差异(46.7%对13.3%P<0.05),肝脏功能及肝脏病理亦有改善,Ⅲ组大鼠存活率显著高于Ⅳ组(60%对13.3%P<0.01),肝脏功能及肝脏病理均有部分改善.结果:经腹腔、脾脏移植同种异体肝细胞可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,部分改善肝功能及肝脏病理.
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水飞蓟宾对急性肝损伤中肝细胞胀亡的影响及其机制
目的:探讨水飞蓟宾(SIL)在急性肝损伤中对肝细胞胀亡的影响及其机制.方法:用D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导大鼠急性肝损伤模型,用SIL进行干预,于不同时间点检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性及肝组织核转录因子-κB(NF-κB)活性,观察肝组织病理及肝细胞胀亡情况,并计算胀亡指数(OI).结果:SIL能明显降低急性肝损伤模型大鼠血清ALT、AST活性(P均＜0.05),抑制NF-κB活性(P＜0.05),镜下显示肝组织损伤减轻程度,减少肝细胞胀亡,降低OI(P均＜0.05).结论:SIL可减少D-GalN所致大鼠肝细胞胀亡,其机制可能与抑制NF-κB活性有关.
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暴发性肝功能衰竭小鼠模型的建立及其治疗研究
目的:建立暴发性肝功能衰竭(FLF)小鼠模型并探讨复方甘草酸苷(SNMC)的保护作用及可能的作用机制.方法:采用D-氨基半乳糖(D-Galn)和脂多糖(LPS)一次性腹腔注射构建FLF小鼠模型.利用光镜、电镜观察小鼠肝损伤情况;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肝细胞原位凋亡情况;应用免疫组化法分别检测肝组织中细胞色素C和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达.结果:D-Galn加LPS可成功构建FLF小鼠模型.光镜及电镜可见肝细胞大量凋亡,且凋亡情况随治疗时间的延长明显改善.TUNEL检测结果表明,随着SNMC治疗时间的延长,凋亡指数逐渐降低.细胞色素C和caspase-3在模型组细胞阳性表达明显增加,随SNMC治疗时间延长表达逐渐减少.结论:利用D-Galn和LPS可以构建理想的FLF小鼠模型.SNMC能有效抑制小鼠FLF模型中的肝细胞凋亡.SNMC可能通过稳定线粒体膜抑制细胞色素C释放及其随后caspase-3活化,从而阻断肝细胞凋亡的进行.
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护肝宝对D-氨基半乳糖所致大鼠急性肝损伤的保护作用
目的:研究护肝宝对大鼠急性肝损伤的保护作用.方法:用D-氨基半乳糖制作大鼠急性肝细胞坏死模型,用全自动生物化学分析仪测定大鼠血清天冬氨酸转氨酶(ALT)及丙氨酸转氨酶(AST)的含量,用比色分析法测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及丙二醛(MDA)的含量,并通过光镜从肝脏形态学的改变,客观评价护肝宝对化学性肝损伤的防治作用.结果:护肝宝能明显抑制由D-氨基半乳糖所致急性肝细胞坏死大鼠血清中ALT及ASr含量的升高,提高血清中SOD和GSH-PX的含量,降低MDA的含量,改善肝脏组织病理.结论:护肝宝对D-氨基半乳糖所致大鼠急性肝损伤具有保护作用.
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桔梗提取物对D-氨基半乳糖/内毒素诱导暴发性肝衰竭的影响
目的 探讨桔梗提取物对D-氨基半乳糖/内毒素诱导的小鼠暴发性肝衰竭的预防作用.方法 采用D-氨基半乳糖/内毒素诱导的小鼠暴发性肝衰竭模型,桔梗提取物小剂量组给予桔梗提取物150 mg/kg,桔梗提取物大剂量组给予桔梗提取物300 mg/kg,阳性对照组给予谷胱甘肽300 mg/kg,给药2次.末次给药1 h后除正常组外各组均腹腔注射D-氨基半乳糖(700 mg/kg)和内毒素(10μg/kg),8 h后,颈动脉取血,测定血清中丙氨酸氨基转肽酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,取肝脏,液氮保存.结果 模型组小鼠肝损伤严重,ALT、AST较高,给药组AST及ALT降低.结论 桔梗提取物能够减轻D-氨基半乳糖/内毒素诱导的小鼠暴发性肝衰竭,对肝脏起到保护作用.
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降脂宁肝胶囊对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用
降脂宁肝胶囊是脂肪肝临床治疗的重要药物,本文研究了此种药物应用于D-氨基半乳糖引起的急性肝损伤控制效果进行了临床研究分析,结果显示合理范围内用药量越大,越能有效降低小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及丙二醛(MDA)水平,对因D-氨基半乳糖引起的急性肝损伤有较好的保护作用.
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D-氨基半乳糖/内毒素所致急性肝衰竭模型研究进展
D-氨基半乳糖/内毒素所致大鼠急性肝衰竭是国内外学者普遍认可和使用的动物模型.在肝损伤病理过程中出现门静脉内毒素血症是这一动物模型的重要特征之一.以往的研究对D-氨基半乳糖通过影响肝细胞代谢,诱导对内毒素敏感性的致损伤作用进行了广泛的研究.近年来,人们对此动物模型所引发的门脉内毒素血症,进入肝脏使Kupffer cells(KCs)过度激活,KCs释放细胞因子,介导炎症级联反应(Inflammatory cascade ),在急性肝衰竭模型的形成过程中所起的重要作用特别关注.现将有关研究进展综述如下.
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D-氨基半乳糖/内毒素诱导的急性肝衰竭与Th1/Th2失衡
目的:研究Th1/Th2失衡与D-氨基半乳糖/内毒素所致大鼠急性肝衰竭的关系.方法:30只Wistar大鼠腹腔内注射D-氨基半乳糖/内毒素诱导大鼠急性肝衰竭模型(AHF组),另取30只腹腔内注射等量生理盐水为正常对照(N组).两组动物于建模后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h各取5只动物检测其血清丙氨酸转氨酶(ALT)与肝组织的病理形态学变化;ELISA检测不同时间点动物血清中Th1/Th2型细胞因子(IFN-γ/IL-4)水平的变化.结果:AHF组肝组织显示炎细胞浸润和明显坏死的急性肝衰竭特征,且各时间点血清ALT值均明显高于N组(P＜0.05);AHF组与N组相比血清内Th1型细胞因子(IFN-γ)的增高在3 h(P＜0.01)、6 h(P＜0.01);Th2型细胞因子(IL-4)水平在各时间点无明显变化(P＞0.05).结论:在D-氨基半乳糖/内毒素所致大鼠急性肝衰竭模型中,存在Th1/Th2失衡,机体内发生了促炎反应,对此急性肝衰竭早期损伤起重要作用.
关键词： D-氨基半乳糖 内毒素 急性肝衰竭 Th1/Th2 IFN-γ/IL-4 -
急性肝衰竭大鼠血清TNF-α和IFN-γ/IL-4表达
目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ-干扰素/白细胞介素4(IFN-γ/IL-4)在D-氨基半乳糖/内毒素所致大鼠急性肝衰竭中的表达.方法 取30只Wistar大鼠,腹腔内注射D-氨基半乳糖/内毒素诱导大鼠急性肝衰竭模型(AHF组);另取30只腹腔内注射等量生理盐水为正常对照组(N).2组动物于建模后3,6,12,24,48,72 h各取5只动物检测其血清丙氨酸转氨酶(ALT)并观察肝组织的病理形态学变化.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同时间点动物血清中TNF-α和IFN-γ/IL-4水平的变化.结果 结果显示,AHF组肝组织炎性细胞浸润和明显坏死的急性肝衰竭特征,且各时间点血清ALT值均明显高于对照组(P＜0.05);AHF组与对照组比较,血清内TNF-α在3 h(P＜0.01)、6 h(P＜0.05)增高;IFN-γ在3 h(P＜0.01)、6 h(P＜0.01)增高;IL-4水平在各时间点无明显变化(P＞0.05).结论 在D-氨基半乳糖/内毒素所致大鼠急性肝衰竭模型中,TNF-α和IFN-γ对急性肝衰竭早期损伤起重要作用;IL-4可能不参与此种动物模型的病理过程.
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门静脉动脉化治疗大鼠急性肝衰竭
背景:部分门静脉动脉化可通过增加肝脏血供的方式减缓急性肝衰竭的发展.目的:观察部分门静脉动脉化对肝衰竭模型大鼠肝脏功能及病理学变化的影响.方法:将130只SD大鼠随机分为3组,动脉化组(n=50)切除左肾,以同种异体腹主动脉血管为移植材料,采用套入式缝合及袖套法建立门静脉动脉化模型,造模成功后一次性腹腔注射D-氨基半乳糖1300 mg/kg,诱导急性肝功能衰竭;肝衰竭组(n=50)切除左肾,游离门静脉,阻断门静脉16 min后开放,关闭腹腔后一次性腹腔注射 D-氨基半乳糖1300 mg/kg,诱导急性肝功能衰竭;对照组(n=30)切除左肾,阻断门静脉16 min后开放,关闭腹腔后一次性腹腔注射生理盐水1300 mg/kg.术后12,24,36,48,72 h,观察各组血清学及肝脏组织病理变化.结果与结论:①动脉化组与肝衰竭组均造模成功30只,术后72 h成活率分别为70%、53%,组间比较差异有显著性意义(P < 0.05);对照组术后72 h存活率为100%;②对照组不同时间点的血清门冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、白细胞介素6、肿瘤坏死因子水平α及门静脉内毒素水平均低于其余两组(P < 0.05);动脉化组术后不同时间点的血清门冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶低于肝衰竭组(P < 0.05),术后24-72 h的总胆红素、白细胞介素6、肿瘤坏死因子水平α及门静脉内毒素水平均低于肝衰竭组(P < 0.05),36-72 h的白蛋白低于肝衰竭组(P < 0.05);③术后72 h,对照组肝脏结构完整;肝衰竭组正常肝小叶结构已破坏,大量炎细胞浸润;动脉化组病变清于肝衰竭组;④结果表明,门静脉动脉化可在一定程度上上改善肝脏功能,减缓肝衰竭的发展.
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四君子汤对急性肝损伤伴发菌群失调及内毒素血症的保护作用
目的观察急性肝损伤时肠道微生态学、血内毒素含量变化及四君子汤的保护作用.方法小白鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GaLN),制备肝损伤模型,观察中药对肠道正常细菌,组织二胺氧化酶(DAO)活性,血内毒素(LPS)含量的影响及肝脏病理学影响.结果急性肝损伤时肠杆菌、肠球菌数量明显上升,乳酸杆菌、双歧杆菌数量显著下降,DAO活性下降,LPS含量明显上升,病理学显示,肝细胞大片状、多灶性坏死,大量炎细胞浸润.而中药治疗组上述指标得到明显改善,差异有非常显著性(P＜0.001).结论中药四君子汤对肠道微生态失衡有调整作用,能够减少内毒素的产生和吸收,对肝脏具有保护作用.
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动态监测Toll样受体4 CD14在大鼠急性肝衰竭中的变化
目的 观察toll样受体4(toll like receptor4,TLR4),CD14在D-氨基半乳糖介导的急性肝衰竭模型中的动态变化律规.方法 用D-氨基半乳糖剂量造成大鼠急性肝衰竭模型,用RT-PCR方法检测toll样受体,CD14 Mrna在D-氨基半乳糖介导的大鼠急性肝衰竭6、12、24、48、72、120和148 h的表达.结果 Toll样受体4mRNA在急性肝衰竭的12 h有显著升高,与正常组差异有显著性(P＜0.05),CD14 Mrna在6 h与正常组差异有非常显著性(P＜0.01),两者均在48 h达到高峰,72、120和148 h逐渐下降.LPS、ALT和AST在6 h有轻度升高,至24 h与正常组差异有显著性(P＜0.05),48 h(P＜0.01)达高峰,72 h(P＜0.01)、120 h和148 h逐渐下降.结论 Toll样受体4,CD14与LPS、ALT和AST有显著正相关.Toll样受体4,CD14与D-氨基半乳糖介导的急性肝衰竭有着密切的联系,可能成为临床上治疗急性肝衰竭的新靶点.
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补体活化在D-氨基半乳糖/内毒素诱导的大鼠实验性肝坏死中的作用
目的:探讨补体系统活化在大鼠实验性肝坏死中的作用.方法:应用D-氨基半乳糖/内毒素(Ga1N/LPS)诱导大鼠肝坏死,用血清50%补体溶解法作为评价血清经典途径补体溶血活性而检测血清CH50、光镜下观察肝组织形态学改变和免疫组化法检测肝组织内补体C3沉积.结果:各组大鼠在用药后随着时间延长血清CH50呈不同程度下降,与对照组比较,单用Ga1N后第4小时血清CH50显著下降(71.43%,P＜0.05),2、6、8、10、12和14小时血清CH50降低更显著(P＜0.01),低为30.5%;单用LPS后2小时的血清CH50下降至正常水平的69.31%(P＜0.01);用药后4～6小时,血清CH50有回升趋势,但仍低于正常水平,差异显著(P＜0.05);Ga1N/LPS组血清CH50的变化与Ga1N组相似,用药后2～14小时血清CH50下降均非常显著(P＜0.01);应用Ga1N/LPS后2～4小时的血清CH50与LPS组比较差异不显著(P＞0.05),但在用药后6～14小时血清的CH50在两组间差异非常显著(P＜0.01).联合注射Ga1N/LPS后可见肝组织呈亚大块坏死,并观察到C3沉积于Kupffer细胞、肝细胞膜及坏死区;单用Ga1N组可见肝组织损伤轻微,并观察到有单核细胞浸润、肝细胞气球样变及灶性坏死,但未见C3在肝内沉积;单用LPS组的肝组织形态学改变与GaIN组类似,C3沉积在内皮细胞和Kupffer细胞.结论:血清补体活化和肝内局部补体活化在GaIN/LPS大鼠急性肝坏死中起重要作用.外源性LPS可引起大鼠血清补体系统经典途径的活化,但其所致的肝损伤可能与肝组织中补体C3的局部沉积有关.GalN所致肝损伤可能与血清补体活化无明显关系.
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18α甘草酸对D-氨基半乳糖引起的大鼠急性肝损伤治疗作用
目的 观察18α甘草酸(18d - GA)对D-氨基半乳糖(GalN)引起大鼠急性肝损伤的治疗作用.方法 SD大鼠60只,随机分为6组,除阴性对照组外,所有动物同时腹腔注射10％ GalN溶液500mg/kg,给药组于GalN处理前3d分别腹腔注射18α - GA 15、30、60mg/kg,每日一次,GaIN处理30 h后取血测定血清ALT、AST,并取肝左叶作病理组织学观察.结果 18α-GA能明显抑制急性肝损伤大鼠血清转氨酶的活力,并减轻肝脏病理损伤.结论 18α - GA对GalN引起大鼠急性肝损伤具有防治效果.
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降酶口服液对鼠降血清转氨酶的实验研究
目的：观察降酶口服液对D-氨基半乳糖(D-Gal)及四氯化碳(CCl4)引起小鼠及大鼠血清转氨酶升高的影响。方法：用动物随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组和高、低剂量给药组，观察D-Gal及CCl4所致小鼠及大鼠血清转氨酶(ALT及AST)的变化。结果：与模型组相比用药各组的血清转氨酶升高不明显。结论：降酶口服液能阻止D-Gal及CCl4造成的血清转氨酶升高。
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花脸蘑多糖水提取物对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用
[目的]观察花脸蘑多糖水提取物对D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用.[方法]用D-Galn诱导建立小鼠急性化学性肝损伤模型,观察花脸蘑多糖水提取物对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)值的变化.[结果]花脸蘑多糖水提取物降低急性肝损伤小鼠ALT,AST和GST活性,提高SOD,GSH-Px活性和ALB含量,并显著降低MDA含量.[结论]花脸蘑多糖水提取物对肝脏具有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化作用有关.
