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氟对体外培养大鼠成骨细胞中核因子-κB受体活化因子配体/骨保护素表达的影响
目的 探讨氟对体外培养大鼠成骨细胞中骨保护素(OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子-κB受体活化因子(RANK)信号传导通路的影响.方法 取新生24h内SD大鼠仔鼠,应用酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,取第2代成骨细胞,加入不同浓度[0(对照)、1×10-3、1×104、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L]的氟,培养24、48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测成骨细胞RANKL、OPG mRNA表达;蛋白免疫印迹(Westem blot)法检测成骨细胞RANKL、OPG蛋白表达.结果 ①染氟24 h,成骨细胞RANKL、OPGmRNA表达组间比较差异有统计学意义(F值分别为30.95、22.62,P均＜0.01),其中1×10-5 mol/L组成骨细胞RANKL mRNA (5.99±0.39)和1×10-4、1×10-5、1×10-6 mol/L组OPG mRNA(3.52±0.09、4.81±0.15、3.68±0.04)的表达高于对照组(3.20±0.19、3.09±0.58,P均＜0.05),1×10-3 mol/L组RANKL mRNA (2.29±0.18)的表达低于对照组(P均＜0.05);染氟48 h,成骨细胞RANKL、OPG mRNA的表达组间比较差异有统计学意义(F值分别为26.62、5.72,P均＜0.01),其中1×10-5 mol/L组成骨细胞RANKL、OPG mRNA(6.67±0.49、5.05±0.51)的表达高于对照组(4.29±0.07、4.34±0.12,P均＜0.05),1×10-3 mol/L组OPG mRNA (3.63±0.49)的表达低于对照组(P＜0.05).②成骨细胞RANKL蛋白表达在染氟24、48 h后,组间比较差异无统计学意义(F值分别为0.07、0.49,P均＞0.05).成骨细胞OPG蛋白的表达,染氟24h后组间比较差异有统计学意义(F=3.26,P＜0.05),1×10-5 mol/L组(1.45±0.10)高于对照组(1.05±0.06,P＜0.05);染氟48 h,成骨细胞OPG蛋白表达组间比较差异无统计学意义(F=0.44,P＞ 0.05).结论 氟在低浓度时以成骨活动为主;但随着染氟时间和浓度的增加,促进破骨细胞的分化、成熟,以骨吸收为主.
关键词： 氟 成骨细胞 骨保护素 核因子-κB受体活化因子配体 -
淫羊藿甙对大鼠成骨细胞护骨素、RANKL表达的影响
目的 观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响.方法 用酶消化法分离24h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养.在培养液中加入不同浓度的淫羊藿甙(10-10～10-4mol/L),培养48 h后,抽提总RNA,采用半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG和RANKL mRNA表达的变化.结果 淫羊藿甙可明显促进成骨细胞OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达,且呈浓度依赖性,均以10-7mol/L时作用显著(P＜0.05).预先用淫羊藿甙干预成骨细胞,可逆转地塞米松的降低OPG mRNA(O.570±0.093 vs 1.083±0.081)、升高RANKL mRNA(1.079±0.050 vs 0.718±0.082)的作用(均P＜0.05).结论 淫羊藿甙可以上调OPG基因表达,下调RANKL基因表达,从而调节骨吸收,这可能是淫羊藿甙防治骨质疏松症的重要机制之一.
关键词： 淫羊藿甙 地塞米松 成骨细胞 护骨素 核因子-κB受体活化因子配体 -
miR-223调控人牙周膜成纤维细胞中RANKL表达的功能初探
目的：探讨miR?223对人牙周膜成纤维细胞中核因子?κB受体活化因子配体（ RANKL）的调控作用。方法：构建过表达miR?223的人牙周膜成纤维细胞，Western blot及实时定量RT?PCR检测人牙周膜成纤维细胞内RANKL和骨保护素（ OPG）的表达，计算RANKL／OPG比值的改变。结果：过表达miR?223的人牙周膜成纤维细胞，RANKL的表达明显下调，RANKL／OPG比值下降。结论：miR?223可调控RANKL的表达，破坏RANKL／OPG比例的平衡，改变破骨细胞的微环境，影响破骨细胞分化。
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中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞RANKL／OPG表达的影响
目的：探讨中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin，OPG）表达的影响。方法：将系列浓度的中间普氏菌培养上清作用于牙龈成纤维细胞，显微镜下观察细胞的变化。实时定量 RT-PCR法和 Western blot法分别检测 RANKL、OPG mRNA及蛋白水平的表达，并计算 RANKL/OPG的比值。结果：牙龈成纤维细胞的数量随中间普氏菌培养上清浓度的增加而减少，50μg/mL 时，显微镜下没有活细胞存在。在mRNA水平上和蛋白水平上，RANKL/OPG的比值在12．5μg/mL处理组均高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：中间普氏菌培养上清可诱导人牙龈成纤维细胞表达 RANKL 和 OPG，破坏 RANKL/OPG比例的平衡，影响破骨细胞分化的细胞因子微环境，在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用。
关键词： 中间普氏菌 牙龈成纤维细胞 核因子-κB受体活化因子配体 骨保护素 -
实验性大鼠根尖周炎骨质破坏与 RANKL／OPG关系的研究
目的：观察核因子-κB受体活化因子配体（ receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）、骨保护素（ osteoprote-gerin，OPG）在大鼠根尖周炎发展各阶段表达的变化与根尖周病损发展之间的关系。方法：选取8周龄雄性Wistar大鼠，随机一侧下颌第一磨牙为实验组，对侧下颌第一磨牙作为对照组；术后1、3、7、14、21 d处死动物，拍摄颌骨X线片，计算根尖周骨破坏面积；组织切片，免疫组织化学检测根尖周组织中RANKL、OPG的表达。结果：根尖周骨破坏面积自术后3 d开始显著增大，21 d达到峰值，呈时间依赖关系；RANKL的表达量在3 d组明显增高，7 d组表达量到达峰值，14 d组开始下降；OPG的表达量在1 d组即出现有显著性上升，3 d组表达趋于平缓，21 d组达峰值。 RANKL、OPG的变化与根尖周病变发展的变化趋势有着显著相关性。结论：RANKL/OPG系统在根尖周炎炎症性骨质破坏机制中起重要调节作用。
关键词： 根尖周炎 核因子-κB受体活化因子配体 骨保护素 大鼠 -
17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞RANKL、OPG表达影响的研究
目的:探讨17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响.方法:通过酶消化法分离培养SCAPs,将SCAPs分别于对照组(普通培养基+10 μmol/L 无水乙醇)和含0.1 μmol/L 17β-雌二醇的培养基培养3 d和7 d后,实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测RANKL、OPG mRNA和蛋白表达.结果:17β-雌二醇刺激3 d和7 d组,OPG mRNA和蛋白表达均较对照组升高(P<0.01),RANKL mRNA和蛋白表达均较对照组降低(P<0.01).结论:17β-雌二醇可能通过调节RANKL/OPG系统,参与调节SCAPs成牙/骨及破牙/骨活性.
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MTA对牙周膜干细胞RANKL/OPG表达水平的影响
目的：探讨MTA 对人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）核因子－κB 受体活化因子配体（recep-tor activator of NF －κB ligand，RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin，OPG）表达的影响。方法通过酶消化法分离培养PDLSCs，依据碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性筛选佳MTA 刺激浓度，将PDLSCs 分别于对照组（普通培养基）和2 mg ／ mL MTA 条件培养液培养3 d 和7 d 后，蛋白免疫印迹法分别检测RANKL、OPG 蛋白表达。结果 MTA 刺激3 d 和7 d 组，OPG 蛋白表达较对照组升高，RANKL 蛋白表达较对照组降低。结论 MTA 可通过调节RANKL ／ OPG 系统，参与调节PDLSCs 成牙／骨及破牙／骨活性。
关键词： MTA 人牙周膜干细胞 核因子-κB受体活化因子配体 骨保护素 -
高脂饮食诱导肥胖小鼠模型中氧化应激、炎症递质对骨代谢的影响及其可能机制
目的：探讨高脂饮食诱导肥胖小鼠模型中氧化应激和炎症递质对骨代谢的影响及其可能机制。方法：选用5周龄C57BL/6雄性小鼠16只，随机平均分为正常饮食组、高脂饮食组，分别用正常饮食和高脂饮食喂养。于实验16周末，测各组动物体质量，处死后取内脏脂肪并测量内脏脂肪/体质量比值；用ELISA法测量血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、血清骨钙素（OC）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）；分别用硫代巴比妥酸（TBA）法和羟胺法检测胫骨骨组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性；用骨密度仪检测右侧股骨骨密度（BMD）；分别用免疫组织化学技术和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测骨组织骨保护素（OPG）和核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）蛋白及mRNA的表达；HE染色光镜观察左侧股骨组织形态学改变。结果：与正常饮食组相比，高脂饮食组体质量、内脏脂肪/体质量比值、骨组织RANKL mRNA/OPG mRNA比值、血清TRACP-5b、IL-6和TNF-α水平、骨组织RANKL表达及骨组织MDA均明显升高，差异均具统计学意义（P＜0.05）；而血清OC水平、骨组织OPG表达、骨组织SOD及BMD均明显下降，差异均具统计学意义（P＜0.05）。在组织形态学上，发现高脂饮食组股骨干骺端骨小梁分布稀疏，骨小梁变细及断裂，伴骨髓腔中有大量脂肪浸润。各指标的相关分析结果显示：BMD与骨组织SOD呈正相关（r=0.627， P＜0.01），与内脏脂肪/体质量比值（r=-0.858，P＜0.01）、骨组织MDA均呈负相关（r=-0.538，P＜0.01）；SOD与OPG mRNA呈显著正相关（r=0.637，P＜0.01），与TNF-α（r=-0.673，P＜0.01）、IL-6（r=-0.874，P＜0.01）、RANKL mRNA（r=-0.760，P＜0.01）及RANKL/OPG比值（r=-0.768，P＜0.01）呈显著负相关；而MDA与TNF-α、IL-6、OPG mRNA、RANKL mRNA以及RANKL/OPG无显著相关性（P＞0.05）。结论：高脂饮食诱导肥胖能导致骨质疏松病理组织学改变，其机制可能与其上调炎症递质表达和氧化应激增加有关。
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血清RANKL、OPG联合MRI在早期RA诊断与骨关节损伤中的价值
目的 探讨血清核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和护骨素(OPG)水平联合MRI在早期类风湿关节炎(RA)诊断和骨关节损伤中的价值.方法 收集RA患者232例,其中早期RA(病程≤1年)111例,非早期RA(病程＞1年)121例,选择121例正常人为对照组.详细记录RA患者各临床及实验室指标,采用双能X线骨密度仪测定其股骨区和腰椎部位的骨密度(BMD).所有RA患者摄双手X线并进行Sharp评分,早期RA患者行双手MRI检查并进行RAMRIS积分.采用ELISA法检测RA患者和正常人外周血RANKL、OPG水平.结果 ①对照组、早期RA组、非早期RA组血清OPG、RANKL水平差异有统计学意义(P＜0.05);②对照组、早期RA组、非早期RA组在股骨区和腰椎的BMD差异有统计学意义(P ＜0.000 1),3组骨质疏松的发生率分别为13.92％、23.39％、35.69％(x2=42.137,P＜0.0001).③早期RA患者MRI上骨侵蚀、骨髓水肿、滑膜炎、肌腱炎的阳性率分别为89.19％、56.76％、83.78％、29.73％:MRI各指标之间相关分析显示:肌腱炎与骨髓水肿(r =0.391,P＜0.05)、滑膜炎(r=0.330,P＜0.05)呈正相关.④早期RA组MRI各指标与OPG、RANKL、RANKL/OPG比值间无相关性;早期RA组MRI骨侵蚀评分与大转子和总股骨区的BMD呈负相关(P＜0.05),与Sharp评分呈正相关(P＜0.05);MRI肌腱炎评分与关节肿胀数、关节压痛数、C反应蛋白(CRP)呈正相关(P＜0.05).⑤血清OPG水平与多项临床和实验室指标呈正相关(P＜0.05);血清RANKL水平与各部位BMD、临床指标、Sharp评分无相关性.结论 RA中MRI的阳性率高于X线,RAMRIS评分异常在早期RA诊断中具有较好的诊断价值,单项以骨侵蚀阳性率高,且与BMD及Sharp评分有相关性;双手MRI表现联合血清OPG、RANKL异常改变能提高早期RA的诊断率.
关键词： 类风湿关节炎 核因子-κB受体活化因子配体 护骨素 磁共振 骨质疏松 -
近β钛合金对人成骨细胞骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体mRNA表达影响的研究
[目的]探讨近B钛合金Ti-5Zr-3Sn-5Mo-15Nb(TLM)对人成骨样MG63细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)mRNA表达水平的影响.[方法]将人成骨样MG63细胞分别接种于纯钛钛片、TLM及微弧氧化处理的TLM表面,采用荧光实时定量PCR法检测OPG/RANKL mRNA表达水平.[结果]TLM组OPG mRNA表达水平略高于纯钛钛片组,但没有统计学意义(P>0.05),而微弧氧化处理组OPG mRNA水平明显升高,与纯钛钛片组及TLM组相比有显著性差异(P<0.05),三组之间的RANKL mRNA水平没有明显差异(P>0.05).[结论]经过微弧氧化处理的TLM可以上调成骨细胞OPG mRNA水平,从而影响OPG/RANKL mRNA的比值,调节成骨细胞与破骨细胞之间的平衡,进一步促进骨质重建.
关键词： 近β钛合金 成骨细胞 骨保护素 核因子-κB受体活化因子配体 -
ERK5信号通路调控小鼠巨噬细胞破骨分化的实验研究
[目的]探讨ERK5信号通路在RANKL诱导小鼠巨噬细胞分化为破骨细胞过程中的作用.[方法]体外构建RANKL诱导小鼠巨噬细胞分化成破骨细胞的实验模型,采用western blot检测不同时间点p-erk5表达量(0、15、30min,1、2、6 h);免疫荧光观察p-erk5蛋白向细胞核内转位情况;CCK-8确定药物组添加ERK 5抑制剂BIX02189的不同浓度;不同浓度BIX02189(0.3μmol/L、1.0 μmol/L、3.0μmol/L)与RANKL诱导的RAW 264.7细胞共培养6d,采用PCR检测TRAP的基因表达量.[结果]Western blot检测结果:加入RANKL 15 min后p-ERK5表达量开始增加,30 min后达到高峰(P＜0.01),之后慢慢下降,且磷酸化的ERK5蛋白逐渐开始出现向细胞核内转位;CCK-8检测细胞增殖率结果显示,浓度在3.0 μmol/L以下的BIX02189对小鼠巨噬细胞正常增殖不构成影响;不同浓度的BIX02189对破骨细胞特异性基因TRAP表达量,较对照组有较明显抑制作用,且TRAP的基因表达随着浓度的增加有不同程度的减少(P＜0.05).[结论] RANKL能够激活RAW264.7细胞的ERK5信号通路,且抑制ERK5通路后,能够一定程度减少巨噬细胞向破骨细胞分化.
关键词： ERK5 核因子-κB受体活化因子配体 小鼠巨噬细胞 BIX02189 -
促黑素对小鼠成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的影响
目的 探讨原代培养的小鼠成骨细胞黑皮质素受体(MCR)表达的种类及促黑素(α-MSH)对其骨保护素(OPG)和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL) mRNA表达的影响.方法 酶消化法分离3d内新生C57BL/6小鼠原代成骨细胞,培养液中分别加入10-7、10-8和10-9mol/L的α-MSH培养12h,作为A、B、C组;培养液中加入10-7mol/L α-MSH,分别培养6、12、24h,作为D、E、F组.对照组正常培养.采用实时定量PCR方法分析α-MSH对成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的影响.利用RT-PCR法测定原代成骨细胞MCR的表达.结果 小鼠原代成骨细胞表达MC1R、MC2R、MC4R和MC5R;与对照组相比,α-MSH促进OPG/RANKL mRNA的表达(P＜0.05).结论 α-MSH可能通过MCR系统促进小鼠原代成骨细胞OPG/RANKL mRNA的表达.
关键词： 促黑素 骨保护素 核因子-κB受体活化因子配体 黑皮质素受体 -
骨质疏松患者外周血Th17细胞比例变化及其与血清IL-17、IL-23、IL-6、RANKL水平的相关性
目的：观察骨质疏松（OP）患者外周血辅助性T细胞（Th）中辅助性T细胞17（Th17）比例变化，并分析其与血清白介素17（IL-17）、白介素23（IL-23）、白介素6（IL-6）、核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）水平的相关性。方法选择52例OP患者为观察组，56例健康体检者为对照组，抽取两组空腹外周静脉血，采用流式细胞术测算两组外周血Th（CD4＋T细胞）中Th17比例，采用ELISA法检测两组血清IL-17、IL-23、IL-6、RANKL。采用Spearman相关性分析法分析外周血Th17细胞比例与IL-17、IL-23、IL-6、RANKL的相关性。结果观察组、对照组外周血Th中Th17比例分别为2．77％±0．93％、1．32％±0．42％，两组比较，P＜0．05。观察组、对照组血清IL-17分别为（145．89±44．23）、（108．99±32．83）pg／mL ，两组比较，P＜0．05。观察组、对照组血清IL-23分别为（33．98±12．33）、（16．55±6．78）pg／mL，两组比较，P＜0．05。观察组、对照组血清IL-6分别为（84．98±45．98）、（23．98±9．88）pg／mL，两组比较，P＜0．05。观察组、对照组血清RANKL分别为（0．16±0．05）、（0．12±0．04）μg／L，两组比较，P＜0．05。Spearman相关性分析发现，OP患者外周血Th中Th17比例与IL-17、IL-23、IL-6、RANKL均呈正相关（r分别为0．362、0．347、0．122、0．875，P均＜0．05）。结论 OP患者外周血Th中Th17比例升高，血清IL-17、IL-23、IL-6、RANKL水平升高。Th17可能通过升高IL-17、IL-23、IL-6、RANKL参与OP的骨代谢失衡过程。
关键词： 骨质疏松 辅助性T细胞 白细胞介素 核因子-κB受体活化因子配体 -
MEK/ERK信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用及机制探讨
目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞MCF-7迁移中的作用.方法 流式细胞术检测MCF-7细胞表面核因子-κB受体活化因子(RANK)蛋白的表达；Western blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(p-ERK)及ERK的表达；Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果 MCF-7细胞表面表达RANK蛋白,RANKL(2μg/mL)显著诱导MCF-7细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MCF-7细胞p-ERK表达逐渐升高,MEK抑制剂PD98059显著抑制RANKL诱导的MCF-7细胞迁移.结论 ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MCF-7迁移.
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OPG/RANKLlRANK信号通路在骨质疏松症患者骨重建中作用机制的研究进展
骨质疏松症(OP)是常见的骨代谢性疾病.骨重建受破骨细胞和成骨细胞间的活动受成骨细胞和破骨细胞之间的直接作用、骨代谢的神经内分泌系统以及免疫系统和骨细胞的局部相互作用调控.骨保护素(OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子-κB受体活化因子(RANK)信号通路可通过骨重建三个途径参与OP的发生发展.RANK可激活NF-κB通路N、MAPK通路、Akt/PKB通路等信号通路,与RANK结合,RANK信号通路活化,能维持破骨细胞活性,抑制破骨细胞凋亡,刺激成骨细胞生长.OPG/RANKL/RANK信号通路可影响雌激素与破骨细胞表面上雌激素受体的结合,促进雌激素与成骨细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞间的相互作用,抑制破骨细胞凋亡.T细胞通过直接表达RANKL或间接通过TNF-α、IL-1和IL-6等促炎细胞因子介导非T细胞中RANKL表达,介导骨损失和关节破坏.B细胞表达OPG降低、RANKL增加,导致RANKL/OPG比例失衡,造成骨质流失和骨折风险增加.
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RANKL/OPG系统及白细胞介素8在炎症性肠病中的表达及作用研究
目的 探讨炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)患者核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)的肠黏膜表达情况及相关促炎因子白细胞介素-8(IL-8)的血清水平变化,并分析与炎症标志物C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)的相关性.方法 收集2016年9月至2018年4月郑州大学第二附属医院38例IBD患者结肠镜活检组织、血清标本及同期检查的CRP、ESR值,其中溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者28例、克罗恩病(Crhon's disease,CD)患者10例;同期20名健康体检者血清为对照组,24例同期于我院结肠癌手术切除癌旁正常组织作为癌旁组.应用免疫组织化学染色检测结肠黏膜组织中RANKL及OPG的表达;应用双抗体夹心ELISA法检测外周血中IL-8的水平变化.结果 UC组和CD组结肠黏膜组织中RANKL及OPG的表达高于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05),UC组与CD组比较,差异无统计学意义(P>0.05);UC组和CD组血清中IL-8的水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),UC组与CD组比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-8与UC患者CRP、ESR及CD患者ESR呈显著正相关,IL-8与CD患者CRP无显著相关性.结论 RANKL及OPG多在IBD患者的结肠黏膜固有层中表达;相关促炎因子IL-8在IBD患者血清中处于升高状态;IL-8有望成为IBD的新型炎症标志物.
关键词： 炎症性肠病 核因子-κB受体活化因子配体 骨保护素 白细胞介素-8 炎症标志物 -
色素上皮衍生因子对高剂量地塞米松作用下MC3T3-E1细胞成脂转分化及骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体表达的影响
目的 观察色素上皮衍生因子(PEDF)对高剂量地塞米松(DEX)作用下MC3T3-E1细胞成脂转分化及骨保护素(OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法 将体外培养的MC3T3-E1细胞分为5组,分别为对照组、DEX(10-6mol/L)组、PEDF干预DEX组,PEDF干预DEX组又按照加入的PEDF分为3个浓度组,依次为2、10、50nmol/L组.各组细胞培养14d时采用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,进行细胞染色[碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色]及通过免疫荧光法检测OPG及RANKL的表达,并运用Western blot检测细胞OPG及RANKL蛋白的表达.结果 成骨细胞 ALP染色呈阳性,免疫荧光化学检测RANKL、OPG表达阳性.在高剂量DEX作用下,MC3T3-E1细胞发生明显成脂转分化,而PEDF的干预明显地抑制了这种转分化.与对照组(0.790±0.020)比较,高剂量DEX组(0.910±0.015)明显地上调了RANKL的表达水平(P=0.008).加入PEDF后,RANKL的表达水平随着PEDF呈剂量依赖性下调.而OPG的表达水平随着PEDF呈剂量依赖性地增高.对比各组OPG/RANKL的表达水平,与 DEX组(0.560±0.012)比较,PEDF干预DEX各亚组的OPG/RANKL的表达水平(0.821±0.025、1.290±0.018及1.405±0.120)随着PEDF的加入出现显著上调(P=0.003、0.000、0.019).结论 PEDF可有效地逆转高剂量DEX导致的成骨细胞成脂转分化,并且上调成骨细胞的OPG/RANKL的表达水平,从而保护成骨功能.
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RANKL和OPG在中耳胆脂瘤中的表达
目的:通过观察核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)在胆脂瘤中的分布和表达水平,探讨两者在胆脂瘤骨质破坏中的作用,以及破骨细胞在其中所起的作用.方法:通过免疫组织化学技术和计算机图像定量分析法,检测RANKL和OPG在27例胆脂瘤和11例外耳道正常皮肤中的表达.结果:RANKL主要表达于胆脂瘤上皮层下的成纤维细胞和泡沫细胞的细胞质中;OPG表达于胆脂瘤的上皮层细胞和上皮层下的炎性细胞细胞质中.RANKL和RANKL/OPG比值在胆脂瘤中的表达量明显高于外耳道正常皮肤,差异有统计学意义(P＜0.05);OPG在胆脂瘤中的表达量与外耳道正常皮肤之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:RANKL和RANKL/OPG比值的增高与胆脂瘤的骨质破坏有关,破骨细胞在胆脂瘤的骨质破坏中发挥一定的作用.
关键词： 胆脂瘤 中耳 核因子-κB受体活化因子配体 骨保护素 -
重楼皂苷促大鼠成骨细胞增殖的作用及其机制研究
目的 观察重楼皂苷对骨质疏松大鼠及其成骨细胞的作用并探索其可能作用机制.方法 采用摘除卵巢(ovariectomy,OVX)的方法建立大鼠骨质疏松模型,观察重楼皂苷对该模型的骨质疏松保护作用;使用多次酶消化法分离培养大鼠原代成骨细胞,加入不同浓度的重楼皂苷(3、10、30、100 μg /ml),采用CCK-8试剂盒、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测法观察成骨细胞的增殖及分化情况,Western blot方法观察不同浓度重楼皂苷对大鼠成骨细胞中骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表达的影响.结果 重楼皂苷可以有效地改善骨质疏松大鼠股骨干骺端骨小梁的微结构特性;可有效促进大鼠原代成骨细胞的增殖,浓度依赖性地上调OPG的表达,下调RANKL的表达.结论 重楼皂苷可通过调节OPG/RANKL信号通路促进大鼠原代成骨细胞增殖与分化.
关键词： 骨质疏松 重楼皂苷 成骨细胞 骨保护蛋白 核因子-κB受体活化因子配体 -
高甘油三酯对去卵巢大鼠股骨RANKL/OPG mRNA表达的影响
目的:探讨高甘油三酯(TG)对去卵巢大鼠股骨核因子-κB受体活化因子配体/护骨素 (RANKL/OPG) mRNA表达的影响及非诺贝特的作用.方法:将3月龄雌性SD大鼠40只,用果糖饲养复制高TG模型,大鼠分为4组:(1)去卵巢+果糖组;(2)去卵巢+果糖+非诺贝特(FF)组;(3)去卵巢+普食组;(4)假手术+果糖组.12周后取股骨检测RANKL/OPG mRNA表达水平.结果:(1)去卵巢+果糖组的TG水平高于去卵巢+普食组(P<0.01),也高于去卵巢+果糖+FF组(P<0.01);(2)去卵巢+果糖组RANKL/OPG mRNA水平,均高于去卵巢+果糖+FF组、去卵巢+普食组和假手术+果糖组(P<0.01或P<0.05).结论:高果糖饮食可以诱导去卵巢大鼠形成高甘油三酯血症,后者使股骨组织中RANKL/OPG mRNA增加;非诺贝特可降低TG,保持RANKL/OPG mRNA的平衡.
关键词： 高甘油三酯 去卵巢大鼠 护骨素 核因子-κB受体活化因子配体 非诺贝特
