084吉林延龄草地下部分的甾类成分

延龄草无菌培养体系的建立及防褐变措施

目的:对延龄草外植体的筛选及灭菌条件和培养基进行优化,降低污染率和褐变率,建立延龄草根茎无菌组织培养体系.方法:从延龄草子房、叶、茎、地下根茎、根尖5种材料中筛选出适宜的外植体,考察多种药液交替灭菌和培养基中添加抗生素对降低组培污染率的影响,研究培养基中添加抗坏血酸(VC),聚乙烯吡咯烷酮(PVP),活性炭对降低褐变率的效果.结果:地下根茎为延龄草组织培养适宜的外植体,可采用紫外线照射30 min,800倍多菌灵浸泡30 min和0.2％ HgCl2处理20 min交替灭菌,培养基中添加100 mg·L-1氨苄青霉素和1.0g·L-1活性炭可降低根茎组培污染率和褐变率.结论:建立了低污染率和褐变率的延龄草根茎无菌培养体系,为其他根茎类植物组织培养提供参考.

土家药延龄草抗SH-SY5Y细胞谷氨酸损伤有效部位筛选研究

目的:筛选土家药延龄草中抗SH-SY5Y细胞谷氨酸(Glu)损伤的有效部位.方法:Bliss法测定延龄草不同部位提取物的1％致死量(LD1)和半数致死量(LD50),建立Glu损伤SH-SY5Y细胞模型,筛选延龄草中抗SH-SY5Y细胞Glu损伤的有效部位,以形态学、细胞存活率和LDH漏出率为指标评价延龄草有效部位对Glu损伤细胞的保护作用.结果:TTM1为抗SH-SY5Y细胞Glu损伤的有效部位,能显著改善Glu损伤细胞的形态,5.0、10.0、20.0μg/mL的TTM1提高损伤细胞的存活率(P＜0.05,P＜0.001),2.5、5.0、10.0、20.0μg/mL的TTM1可显著降低损伤细胞的LDH漏出率(P＜0.05,P＜0.001).结论:延龄草TTM1对Glu损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用.

重楼属3种植物花粉活力及柱头可授性研究

重楼是延龄草科重楼属植物的统称.本属植物形态独特,都是1株植物1个茎,茎上只生1轮叶,顶端生1枝花,花萼叶状,看似2轮绿叶,形如楼台重叠,故称"重楼"[1].

川滇地区重楼属药用植物资源质量初评

中药重楼,又名七叶一枝花,为延龄草科重楼属Paris植物华重楼P.polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara和滇重楼P.polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz的干燥根茎[1].

头顶一颗珠提取液对大鼠脊髓损伤后CNTF及CNTFRα表达的影响

目的 观察百合科延龄草属植物头顶一颗珠干燥根茎提取液对大鼠急性脊髓损伤模型睫状神经营养因子(CNTF)及其受体(CNTFRα)表达的影响.方法 健康成年Wistar大鼠45只,随机分为对照组、模型组及实验组(n＝15),模型组及实验组参照Allen's法建立脊髓损伤模型,对照组不损伤脊髓.实验组于术前2周开始给予头顶一颗珠提取液灌胃,模型组和对照组给予同剂量蒸馏水灌胃.分别于伤后1d、7d,14d处死动物,取脊髓组织行HE染色观察组织病理学改变,Nissl染色观察Nissl小体的变化,并通过免疫组化染色、Western-blotting及RT-PCR检测观察CNTF、CNTFRα mRNA及蛋白的表达情况.结果 HE染色显示实验组脊髓结构比较清晰,神经细胞水肿、坏死较模型组减轻;Nissl染色见模型组和实验组损伤后各时相点脊髓前角运动神经元尼氏小体减少或消失,实验组尼氏小体减少程度较模型组明显减轻;免疫组化染色显示各组脊髓均有CNTF、CNTFRα蛋白表达.RT-PCR检测显示伤后7、14d模型组及实验组脊髓组织中CNTF、CNTFRα mRNA表达水平均明显高于对照组,且实验组明显高于模型组.Western blotting检测显示模型组伤后14d及实验组伤后7、14d脊髓组织中CNTF、CNTFRα蛋白表达水平明显高于对照组,且实验组伤后14d的表达水平均明显高于模型组.结论 头顶一颗珠能上调脊髓组织中CNTF、CNTFRα的表达,对脊髓损伤有一定的保护作用.

延龄草正丁醇萃取物对大鼠非酒精性脂肪性肝病的改善作用及对抗氧化酶活性和肝内质网应激的影响

目的 探讨延龄草(TTM)正丁醇萃取物对非酒精性脂肪肝的治疗作用,并探讨其可能的作用机制.方法 50只Wistar大鼠分成5组,正常对照组、高脂模型组、模型+TTM正丁醇萃取物50,100和200mg· kg-1组.高脂模型组喂高脂饲料;给药组喂高脂饲料4周后ig给予TTM正丁醇萃取物,每天1次,共6周.取大鼠肝组织HE常规染色及苏丹Ⅲ染色观察肝组织病理变化和肝脂肪变性程度.用全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平及肝匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量的变化.免疫组织化学法和RT-PCR测定肝组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白和mRNA表达.结果 模型组肝脂肪变性程度、血清GPT和GOT活性、TC和TG水平及肝组织MDA含量均高于正常对照组(P＜0.05),肝组织GSH-Px含量明显低于正常对照组(P＜0.05).TTM正丁醇萃取物50,100和200 mg· kg-1组肝组织脂肪变性程度、血清GPT和GOT活性和MDA含量均低于模型组(P＜0.05),各剂量组间无明显差异.与正常对照组相比,模型组肝组织GRP78 mRNA和蛋白表达增加(P＜0.01).与模型组相比,TTM正丁醇萃取物50,100和200 mg· kg-1组肝组织GRP78mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.05),不同剂量组间无明显差异.结论 TTM正丁醇萃取物能有效减轻非酒精性脂肪肝大鼠肝损伤和脂肪变性程度,该作用可能与其提高非酒精性脂肪肝的抗氧化酶活性及降低肝组织内质网应激作用有关.

延龄草药材质量评价方法的研究

目的 建立延龄草(Trillium tschonoskii Maxim.)药材质量评价的方法.方法 采用3种偏诺皂苷作为指标,建立薄层色谱鉴别药材,Rp-HPLC测定含量的质量评价方法.结果 ParisⅧ(1)、偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、ParisⅥ(3)在薄层色谱(三氯甲烷-甲醇-甲酸-水=6.5∶3.5∶0.5∶1)下层液中展开,斑点清晰可见、分离度好;在Rp-HPLC(乙腈-水,42∶58)中的分离度良好,分别在0.115 ～ 0.690 mg·mL-1(r=0.999 8),0.135 ～0.810 mg·mL-1(r =0.999 6),0.225 ～1.350 mg· mL-1(r=0.9999)内峰面积与进样量呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.3％,98.3％,97.7％.结论 该方法快速、准确、重现性好,可作为延龄草质量标准制定的依据.

延龄草根及根茎的化学成分研究

目的:研究延龄草Trilliumtschonoskii根及根茎中的化学成分.方法:采用硅胶、聚酰胺、反相硅胶C18和SephadexLH-20柱色谱对延龄草70%乙醇提取物进行了分离纯化.用质谱、一维及二维核磁等波谱学方法确定了化合物结构.结果:从延龄草醋酸乙酯和正丁醇部位分离鉴定得到8个化合物,分别鉴定为偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(1)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(2)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-α-L吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]β-D-葡萄糖苷(3)、偏诺皂苷元(4)、薯蓣皂苷元(5)、7,11-dimethyl-3-methylene-1,6-dodecadien-10,11-dihdroxyl-10-O-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranoside(6)、7,11-dimethyl-3-methylene-1,6-dodecadien-10,11-dihdroxyl-10-O-β-D-glucopymnoside(7)、紫云英苷(8).结论:所有化合物均为首次从该种植物中分离得到.

延龄草对LPS诱导大鼠肝损伤的保护作用及机制

目的:研究延龄草(TTM)对脂多糖(LPS)诱导大鼠氧化应激与肝损伤的保护作用.方法:SD大鼠60只,按体重随机分成TTM高、中、低剂量组、模型组、地塞米松磷酸钠(DEX)对照组及空白对照组(n=10).TTM高、中及低剂量组按(8、4、2) g/(kg· d)TTM灌胃,模型组、DEX对照组及空白对照组灌胃等量蒸馏水,每隔5d,TTM高、中、低剂量组、模型组、DEX对照组按1 mg/kg腹腔注射LPS,DEX对照组同时腹腔注射DEX(5 mg/kg),空白对照组注射等量生理盐水.30 d后,测定大鼠胸腺指数、脾脏指数,对血清一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性与一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)、硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,肝组织SOD、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活性与GSH、TBARS含量进行检测.结果:与模型组相比,TTM高剂量组在(19～30)d体重显著降低(P＜0.05),TTM高、中、低剂量组胸腺指数,TTM高剂量组脾脏指数显著降低(P＜0.05),TFM高、中、低剂量组血清NOS活性与TBARS、NO含量显著降低(P＜0.05),TTM高剂量组血清SOD活性及中、高剂量组GSH含量显著上升(P＜0.05),TTM高、中剂量组血清IL-6、TNF-α含量显著降低,IL-10含量显著升高(P＜0.05),TTM中、高剂量组肝脏TBARS含量显著降低,TTM各剂量组肝脏SOD活性与中、高剂量组GSH-Px活性,高剂量组GSH含量显著升高(P＜0.05).结论:TTM对LPS所致大鼠的胸腺、脾脏萎缩有一定的延缓作用,能有效降低血清中NOS活性,减少NO生成,提升SOD、GSH-Px活性与GSH含量,减轻脂质过氧化,降低IL-6、TNF-α过量分泌、提升IL-10含量,有抗炎护肝的功能.

延龄草诱导人结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨延龄草诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制.方法:以人结肠癌RKO细胞株为模型,通过MTT实验检测延龄草不同提取部位对RKO细胞的细胞毒性;以流式细胞术及光比色法检测延龄草乙酸乙酯部位对RKO细胞线粒体膜电位及Caspase9和Caspase3活性的影响.结果:延龄草乙酸乙酯部位(EE-TM)对RKO细胞增殖抑制作用显著(P＜0.01),干预24、48及72 h后的IC50值依次为52.64、22.56及18.39 μg/mL;EE-TM干预12h后可以导致RKO细胞线粒体膜电位下降(P＜0.01),干预24h及48 h后可以导致RKO细胞内Caspase9及Caspase3的活性增强(P＜0.01).结论:延龄草具有体外抗结肠癌活性,作用机制可能是通过线粒体通路介导细胞走向凋亡.

延龄草化学成分及药理作用研究展望

该文综述了延龄草属植物近50年内国内外科研工作者在化学成分及药理作用方面的研究进展,为延龄草植物的后期研究提供详实的资料.

延龄草盐酸丁咯地尔上调氟哌啶醇致痴呆大鼠抗氧化酶表达作用的比较研究

目的:观察和探讨延龄草、盐酸丁咯地尔对氟哌啶醇致痴呆大鼠抗氧化酶表达作用的影响.方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组、模型组、实验1组、实验2组.除对照组外,其余大鼠均用氟哌啶醇建立阿尔采默病(AlzheimerDisease,AD)动物模型,实验组还同时腹腔注射延龄草注射液和盐酸丁咯地尔注射液.用电跳台法观察各组大鼠的行为学改变,测定各组大鼠的血、肝、肾、海马、脑皮质超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHI-PX)含量.结果:与对照组、模型组比较,延龄草注射液、盐酸丁咯地尔注射液均能维持实验大鼠的学习记忆能力,并使实验大鼠多种组织的SOD、GSH-PX表达值显著升高,差异有非常显著性意义(P＜0.001).结论:延龄草、盐酸丁咯地尔都有维持学习记忆能力和上调抗氧化酶表达作用.

延龄草化学成分的分离与鉴定

目的 研究延龄草(Trillium tschonoskii Maxim.)根及根茎的化学成分.方法 利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、ODS(反相C18键合硅胶)柱色谱、高效液相色谱等色谱技术对延龄革的化学成分进行分离和纯化,通过理化性质和NMR等波谱数据分析确定化合物的结构.结果 从延龄草根及根茎70％((4))乙醇提取物中分离得到11个已知成分,分别确定为重楼皂苷Ⅵ(chonglouoside Ⅵ,1)、偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(penogenin-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glucopyranoside,2)、重楼皂苷Ⅶ(chonglouoside Ⅶ,3)、偏诺皂苷元-3β-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(trikamsteroside B,4)、(25S)-27-羟基偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷((25S)-27-hydroxypenogenin-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-O-β-D-glucopyranoside,5)、(25S)-27-羟基偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷((25S)-27-hydroxypenogenin-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glucopyranoside,6)、(25S)-27-羟基偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(polyphylloside Ⅲ,7)、(23S,24S,25S)-螺甾-5-烯-1β,3β,21,23,24-五羟基-1β-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[O-β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(trikamsteroside E,8)、3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-O-β-D-glucopyranosylhomoaro-cholest-5-ene-26-O-β-D-glucopyranoside (parispseudoside B,9)、3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glucopyranosylhomo-aro-cholest-5-ene-26-O-β-D-glucopyranoside (aethioside A,10)、3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1 →4)-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glucopyanosylhomo-aro-cholest-5-ene-26-O-β-D-glucopyranoside (parispseudoside A,11).结论 化合物9-11为首次从百合科植物中分离得到,7为首次从延龄草属植物中分离得到,4-6、8为首次从延龄草中分离得到.

延龄草中微量元素研究

目的:通过测定延龄草中微量元素的含量,发挥延龄草的药用和食用价值.方法:采用干法灰化处理样品,用石墨炉原子吸收光谱法测定延龄草中微量元素的含量.结果:延龄草中9种微量元素含量分别是:Zn 20.00 mg/kg,Fe 95.5 mg/kg,Cu 7.5 mg/kg,Mn 11.75 mg/kg,Cd 0.02 mg/kg,Cr 0.0955 mg/kg,Co 0.0075 mg/kg,Pb 0.01175 mg/kg,Ni 0.07275mg/kg.结论:延龄草中人体必需的微量元素Zn、Fe、Mn的含量较高,有害元素Pb、Cd等的含量很低.

延龄草多酚分析及其在不同硒浓度下的变化规律

目的 分析延龄草多酚,并研究其在不同硒浓度下的变化规律.方法 Folin-Ciocalteu比色法测定茎叶和根茎中总酚含有量,紫外-可见分光光度法和LC-MS法分析多酚组成,HPLC法测定不同硒浓度(0、5、10、15、20、25、30、40 mg/kg)下各成分含有量.结果 茎叶和根茎中总酚含有量存在显著差异,前者为后者的5.9倍.多酚主要由绿原酸、咖啡酸和芦丁组成.茎叶中绿原酸含有量随着硒浓度增加而提高;咖啡酸含有量较低,无明显变化规律;芦丁含有量随着硒浓度增加先提高后降低.结论 硒对延龄草茎叶中绿原酸的积累具有明显促进作用,但对咖啡酸和芦丁的积累无显著影响.

延龄草脂肪酸类成分分析

目的 研究延龄草脂肪酸类成分及主要成分的测定.方法 采用GC-MS对延龄草脂肪酸类成分进行鉴定,主要成分甲酯化后,采用GC法定量测定.结果 延龄草脂肪酸类成分主要有3种；甲酯化后,主要成分亚油酸进样量在0.585 8～4.184μg范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均加样回收率为87.6％(RSD为1.75％).结论 方法均简便合理,可以用于延龄草药材脂肪酸类成分的鉴定和测定.

延龄草苷可提高氟尿嘧啶的抗宫颈癌疗效

目的:观察延龄草苷对氟尿嘧啶抗宫颈癌疗效的促进作用.方法:宫颈癌HeLa细胞分别与延龄草苷(300 μg/mL)、氟尿嘧啶(10 μg/mL)以及氟尿嘧啶(10 μg/mL)+延龄草苷(30、100和300 μg/mL)孵育后,采用MTT法检测延龄草苷与氟尿嘧啶对体外培养的HeLa细胞增殖的抑制作用,应用FCM法检测HeLa细胞的凋亡情况.蛋白质印迹法检测延龄草苷联用氟尿嘧啶对HeLa细胞中丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶、丝/苏氨酸蛋白激酶Akt以及凋亡相关信号通路蛋白表达的影响.建立小鼠移植瘤模型,腹腔注射给药后检测延龄草苷(300 mg/kg)对裸鼠体内肿瘤形成的拮抗作用.结果:延龄草苷与氟尿嘧啶在体外联合应用,可增强氟尿嘧啶对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用(P＜0.05),促进细胞凋亡(P＜0.05).延龄草苷与氟尿嘧啶联用可抑制裸鼠体内的肿瘤生长,并且比单独应用氟尿嘧啶的效果显著(P＜0.05).延龄草苷与氟尿嘧啶联合作用可降低肿瘤细胞中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶和磷酸化Akt蛋白的表达,同时活化型caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(均P＜0.05).结论:延龄草苷可提高氟尿嘧啶的抗宫颈癌疗效,推测其可作为一种有潜力的化疗药物增敏剂.

延龄草、何首乌对氟哌啶醇致痴呆大鼠抗氧化酶表达作用的研究

目的:观察和探讨延龄草、何首乌对氟哌啶醇致痴呆大鼠抗氧化酶表达作用的影响.方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组、模型组、实验1组和实验2组.除对照组外,其余大鼠均用氟哌啶醇建立痴呆症(Alzheimer Disease,AD)动物模型,实验组还分别腹腔注射延龄草注射液、何首乌注射液.测定各组大鼠血、肝、肾、海马、脑皮质超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的含量.结果:与对照组比较,延龄草注射液、何首乌注射液均能使模型大鼠多种组织SOD、GSH-PX显著升高,差异有非常显著性意义(P<0.001).结论:延龄草和何首乌都能增强抗氧化酶表达作用,但对多数组织SOD、GSH-PX表达值的影响,延龄草明显强于何首乌.

HPLC法同时测定延龄草根及根茎中延龄草皂苷B2、B1、B3含量

目的:建立HPLC法同时测定延龄草Trillium tschonoskii Maxim.根及根茎中延龄草皂苷B2、B1、B3的含量.方法:采用UItimate(R)RXB-C18(4.6 mm×150 mm,3μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(10％-100％梯度),检测波长为203 nm,流速1.0mL/min1柱温30℃.结果:在该色谱条件下,三种延龄草皂苷的分离度良好,延龄草皂苷B2、B1、B3浓度在0.05-0.5 mg/mL范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.2％、102.5％、101.4％.结论:该方法简便、准确、重现性好,适用于同时测定延龄草皂苷B2、B1、B3的含量,可作为延龄草质量标准制定的依据.