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雷帕霉素下调光老化成纤维细胞老化表型的初步研究
目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对紫外线照射导致的成纤维细胞(FBs)衰老和抗氧化应激的作用特点.方法 采用CCK-8法检测不同浓度的RAPA对FBs活性的影响,甄选佳应用浓度.利用紫外线体外反复照射构建成纤维细胞的老化模型.RAPA作用后,β-半乳糖苷酶染色法检测衰老细胞,利用DCFH-DA为荧光探针,用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)的水平.结果 低浓度的RAPA对细胞的活性并无影响;与紫外线照射组组比较,RAPA+紫外线组的β-半乳糖苷酶染色阳性率下降了约40％,差异具有统计学意义(P＜0.05).RAPA预处理可以明显降低紫外线照射细胞组ROS的产生.结论 RAPA可以降低光老化成纤维细胞ROS生成量,一定程度上缓解了紫外线照射导致的细胞光老化进程.
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PDGF-BB对光老化皮肤成纤维细胞TIMPs及胶原蛋白的影响
目的 探讨血小板衍生因子-BB(PDGF-BB)对光老化成纤维细胞(FBs)中胶原蛋白(COL)、基质金属蛋白酶(MMPs)、基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMPs)的影响.方法 利用cck-8试剂盒检测PDGF-BB对FBs增殖活性的影响;利用低剂量UVB重复照射成功建立FBs早衰模型;在末次造模结束24 h,利用Real-Time PCR技术检测MMPs的表达;末次造模结束48 h,利用West blot技术检测TIMPs和胶原的表达.结果在一定浓度范围(0～8 ng/ml)及处理时间(0～48 h)内,PDGF-BB对细胞有促进增殖作用,其中以1 ng/ml作用佳.1 ng/ml PDGF-BB能缓解UVB诱导的TIMPs表达抑制(P<0.05),同时,能在蛋白水平上减缓UVB对FBsⅠ型及Ⅲ型胶原合成的抑制(P<0.05).但对UVB诱导的MMPs的过表达无明显改善作用.结论 PDGF-BB虽然对MMPs无明显改善作用,但其能有效增加光老化FBs中TIMPs及Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达,调节光老化皮肤ECM合成/降解稳态,有望成为对抗光老化的新手段.
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强脉冲光子嫩肤系统在面部美容方面的初步应用
目的观察Quantum 光子嫩肤系统在面部美容方面的治疗范围及并发症.方法采用位于可见光和近红外线区域、波长近于550～1 200 nm的宽谱线光源对光老化和光损伤皮肤进行非介入性治疗,观察临床疗效.结果临床应用治疗雀斑、毛细血管扩张、面部皱纹等各种类型患者共642例,总有效率100%.结论 Quantum光子嫩肤系统对光老化和光损伤皮肤的非介入性治疗,较现有治疗方法更具优点.
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强脉冲光与HGM激光联合非侵入性治疗面部皮肤光老化
目的观察强脉冲光治疗仪与HGM激光器联合应用非侵入性治疗面部皮肤光老化的效果.方法对460例Fitzpatrick Ⅲ、Ⅳ型皮肤光老化患者,采用560 nm强脉冲光与532 nm HGM激光联合治疗4次,治疗分两步进行,首先使用560 nm强脉冲光,能量密度30～40 J/cm2的光子嫩肤治疗,然后使用532 nm HGM激光器,能量密度35～60 J/cm2,施行局部针对治疗.治疗间隔均为2周.分别于后一次治疗的4、8周后,随访治疗效果和并发症情况.结果经4次治疗8周后,随访90%患者毛细血管扩张、毛孔粗大、色素沉着和细小皱纹改善的程度均达到了75%以上.主要并发症为短暂红斑和水疱.结论 560 nm强脉冲光治疗仪与532 nm HGM激光器联合应用治疗面部皮肤光老化性毛细血管扩张、毛孔粗大、色素沉着和细小皱纹,疗效可靠,并发症少,是一种理想的非侵入性治疗亚洲人Fitzpatrick Ⅲ、Ⅳ型皮肤光老化的方法.
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雷帕霉素调控光老化成纤维细胞MMPs和COL-1表达
目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对光老化皮肤成纤维细胞(FBs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达和Ⅰ型胶原蛋白(colla-gen-Ⅰ)合成的影响.方法 采用cck-8法检测RAPA对FBs活性的影响,甄选佳应用浓度,利用UVB体外反复照射构建成纤维细胞的老化模型,RAPA预处理细胞,造模结束24 h后,实时荧光定量检测MMPs的表达;造模结束48 h,蛋白质印迹法检测Ⅰ型胶原的表达.结果 低剂量RAPA对FBs的细胞活性无影响,5μm/L的RAPA作为后续细胞处理的药物浓度为佳.UVB组的光老化FBs中,MMP-1、2、9的表达均显著升高;而RAPA预处理后能明显降低UVB引起的MMPs过度分泌;同时使Ⅰ型胶原的表达量增多.结论 RAPA可降低光老化FBs中MMPs的表达,增加Ⅰ型胶原的合成,维持光老化皮肤ECM成分的稳定,在一定程度上缓解细胞光老化程度.
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脂肪来源干细胞对光老化成纤维细胞的治疗作用
目的 探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)对光老化成纤维细胞的治疗作用.方法 分离培养小鼠ADSCs,并进行表面标志物鉴定;ADSCs与成纤维细胞(FBs)共培养48h后,单次UVB 120mJ/cm2照射后30min检测细胞内活性氧(ROS)生成量;采用UVB 120mJ/cm2反复照射4次,照射间隔时间12h,诱导产生细胞光老化模型,继续培养48h后检测细胞增殖能力、合成弹性蛋白原等变化.结果 体外培养ADSCs呈成纤维细胞样,活力良好,表面标志物CD29、CD90.2和sca-1阳性,CD34和CD45阴性;ADSCs可减轻单次UVB照射引起的氧化应激损伤,保护细胞免受细胞周期阻滞的影响,同时可促进光老化FBs合成弹性蛋白原.结论 ADSCs对光老化FBs具有保护作用,可作为对抗光老化的新手段.
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皮肤光老化中医机理探讨
人体皮肤每天都接受来自日光中紫外线的辐射,长期辐射会引起人体暴露部位皮肤光老化.阐明其机理对防护皮肤光损伤及皮肤衰老甚至皮肤癌具有十分重要的意义.现代医学对皮肤光老化发病机理已经做了深入研究.目前,光老化尚无明确的中医理论记载,文章主要对皮肤光老化的中医病因病机作以探讨.
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绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤细胞p38MAPK和MMP-1的影响
目的:研究绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的影响.方法:制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清,将人角质形成细胞(HaCaT)分为4组:空白对照组(A)、UVB模型组(B)、空白血清组(C)和含药血清组(D);将成纤维细胞(HSF)分为6组:空白对照组(Ⅰ)、UVA模型组(Ⅱ)、HaCaT培养上清液A组(Ⅲ)、HaCaT培养上清液B组(Ⅳ)、HaCaT培养上清液C组(Ⅴ)、HaCaT培养上清液D组(Ⅵ).对HaCaT细胞B、C、D组和HSF细胞Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别用UVB和UVA照射,制备光老化细胞模型.将4组HaCaT细胞培养上清液分别加入HSF细胞的Ⅲ～Ⅵ组.采用RT-PCR和Western blotting方法检测Ⅰ～Ⅵ组细胞p38MAPK和MMP-1mRNA和蛋白的表达水平.结果:与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白的表达水平显著上调(P＜0 01);与Ⅱ组比较,Ⅳ组p38MAPK和MMP-1mRNA和蛋白表达均上调(P＜0.01),而Ⅲ组变化不显著;与Ⅳ组比较,Ⅵ组p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白表达均显著下调(P＜0.01),而Ⅴ组变化不显著.结论:光老化HaCaT细胞分泌细胞因子促进光老化HSF细胞p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白的表达.绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞培养上清液作用的光老化HSF细胞中MAPK信号转导通路中相关基因和蛋白的表达具有抑制作用.
关键词： 绞股蓝总皂苷 光老化 皮肤细胞 P38促分裂原活化蛋白激酶 基质金属蛋白酶-1 -
皮肤光老化与其防治的研究述评
皮肤衰老是一个复杂的生物学现象,包括两方面因素:一是内源性自然衰老,很大程度上在衰老过程中起决定作用;另一个是受环境因素影响的外源性衰老,其中紫外线(UV)的影响尤为主要,被更普遍的定义为光老化.在日光照射部位此两方面共同作用.紫外线致皮肤衰老机理以免疫抑制、自由基学说、线粒体突变学说、结缔组织合成分解失衡学说为主,还有人认为与非酶糖基化反应关系密切.其防治包括药物的内服和外用、激光治疗、化学剥脱术以及手术疗法等.
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间充质干细胞及其分泌液抗皮肤光老化作用的研究进展
皮肤是人体大的器官,在健康和美容等方面具有重要作用.随着时间的推移,皮肤会出现色素沉着、产生皱纹、弹性降低等衰老现象,其中,光老化主要由外源性理化因素造成,与多种皮肤病和皮肤恶性肿瘤有密切的关系.间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的干细胞,能够分泌多种细胞因子和生长因子,在抗皮肤光老化中发挥一定的作用.本文主要从基因调控和蛋白表达调控两个方面对MSC及其分泌液的抗皮肤光老化的作用机制进行综述.
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防晒剂保护皮肤免受紫外线损害效能分析
紫外线是造成皮肤晒黑、晒伤、光老化及皮肤癌等皮肤损害主要的原因。防晒类化妆品的根本目的就是大限度地保护皮肤免受紫外线的损伤[1]，防晒类化妆品的选择与使用直接影响到防止紫外线以保护皮肤的效果。通过分析SPF 与 PA 指数、肤质特点、防晒剂种类及使用方法，指导如何正确选择与使用防晒类化妆品。
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反复紫外线照射建立皮肤光老化模型
目的 采用紫外线反复照射裸鼠局部皮肤的方法,造成皮肤光老化,探讨建造皮肤光老化模型的新方法.方法 紫外线照射裸鼠背部右侧标记区域皮肤(2.5 cm×1.5 cm),并以对侧未照射皮肤作为对照,观察紫外线对皮肤老化的影响.照射方法:第1周每次给予裸鼠紫外线照射量为180mJ/cm2(180mJ/cm2为小致红斑量),第2～4周每周能量比前1 w增加1/3,分别为240、300、360 Mj/cm2,此后第5周起维持360 mJ/cm2分别至6(A组)、8(B组)、10 w(C组).每周每只裸鼠照射3次,完成后一次照射24h后处死.取标记区域照射皮肤和对侧未照射皮肤,进行HE染色,并检测超氧化物歧化酶(SOD)、羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)等生化指标.结果 照射10 w(C组)的裸鼠标记区域皮肤HE染色显示表皮明显增厚,真皮组织排列紊乱,SOD、Hyp、MDA指标与对侧未照射组具有统计学差异,符合光老化皮肤特性,证明紫外线局部照射裸鼠皮肤10 w的皮损状态可以作为皮肤光老化模型,用于皮肤光老化的相关研究.结论
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绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞中p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达的抑制作用
目的:观察绞股蓝总皂苷含药血清对光老化HaCaT细胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白和Jun基因(c-Jun) mRNA表达的影响,探讨绞股蓝总皂苷含药血清抗皮肤光老化的作用机制.方法:采用中波紫外线(UVB)照射建立光老化HaCaT细胞模型,加低、中、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清于光老化HaCaT细胞模型培养液中培养,并设空白对照组、空白血清组和UVB模型组.采用Western blotting和RTPCR方法检测各组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA的表达水平.结果:与空白对照组比较,UVB模型组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著上调,差异有统计学意义(P＜0.01)；与UVB模型组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著下调,差异有统计学意义(P＜0.01)；与空白血清组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达下降(P＜0.01).结论:绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达抑制皮肤光老化.
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染料木黄酮对光老化成纤维细胞增殖作用的影响
目的 探讨染料木黄酮对光老化成纤维细胞增殖作用的影响.方法 经酶消化法分离培养真皮成纤维细胞,并进行细胞传代,免疫细胞化学鉴定细胞.实验分为3组:正常细胞对照组:未经处理的真皮成纤维细胞;8-甲氧补骨脂素(8-methoxypsoralan,8-MOP)/长波紫外线(ultraviolet A,UVA)对照组:用含50 ng/ ml 8-MOP的培养基避光孵育细胞24h,再以9J/cm2 UVA照射;8-MOP/UVA+染料木黄酮(0、1.25、2.5、5、10、20 μg/ml)组:用含50 ng/ ml8-MOP及各浓度染料木黄酮的培养基共同孵育细胞24 h,再以9 J/cm2 UVA照射24h.MTr法检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞细胞周期,光镜下观察各组细胞分裂和分裂后表型,实时荧光定量PCR法检测各组细胞中基质金属蛋白酶-1、3水平.结果 皮肤成纤维细胞阳性率达99％以上;8-MOP/UVA+染料木黄酮1.25、2.5 μg/ml组细胞增殖率分别为8-MOP/UVA对照组的112.6％(P＞0.05)和146.6％(P＜0.05),染料木黄酮的光保护作用随浓度的升高而增强,然而随着浓度的继续升高,细胞增值率逐渐降低,当浓度达20 μg/ml时,细胞增殖率仅为8-MOP/UVA对照组的19.4％(P＜0.01),选择染料木黄酮的佳保护浓度为2.5μg/ml;8-MOP/UVA对照组细胞细胞周期阻滞于S期,而8-MOP/UVA+染料木黄酮2.5 μg/ml组细胞细胞周期则由S期进入G2/M期;正常细胞对照组、8-MOP/UVA组及8-MOP/UVA+染料木黄酮2.5μg/ml组分裂细胞表型占总细胞数目的比率分别为(99.7±0.58)％、(7.7±1.15)％、(57.7±3.51)％,各组间差异有统计学意义(P＜0.01);8-MOP/UVA+染料木黄酮2.5 μg/ml组细胞基质金属蛋白酶-1、3水平均明显低于8-MOP/UVA对照组,而高于正常细胞对照组,各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 染料木黄酮可在一定程度上解除8-MOP/UVA所致光老化成纤维细胞的生长抑制作用.
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骨髓间充质干细胞对豚鼠皮肤光老化的修复作用
目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对皮肤光老化的修复作用,为皮肤光老化的治疗提供新途径.方法 每天UV-A和UV-B紫外线灯同时照射2 h,连续照射50 d,制备豚鼠皮肤光老化模型;体外分离培养豚鼠乳鼠MSCs;经DAPI标记后,局部多点皮内注入豚鼠皮肤紫外线照射区域,激光共聚焦显微镜下分别观察注入后24 h、5 d及10 d,DAPI标记的MSCs在紫外线照射区域皮肤组织的迁徙及定居;肉眼及HE染色切片观察MSCs对豚鼠光老化皮肤的修复作用.结果 DAPI标记的MSCs经紫外线照射皮肤区域局部皮内多点注射24 h后,即出现在真皮层,5 d后出现在真皮层及毛囊组织,10 d后广泛弥散在皮肤各层.肉眼及皮肤HE染色切片镜下观察均显示,治疗组豚鼠较模型组明显延缓光老化进程,且在停止照射后,治疗组光老化症状比自然恢复组有更为显著的改善.结论 MSCs对皮肤光老化有明显的延缓及修复作用.
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十精丸对大鼠皮肤光老化干预作用的代谢组学研究
目的:采用代谢轮廓及代谢径路分析方法揭示十精丸对大鼠皮肤光老化模型干预作用的作用机制研究.方法:以经典的SD大鼠皮肤光老化动物模型制备方法,即紫外线照射大鼠皮肤诱导大鼠产生皮肤光老化,对血清中抗氧化酶系活力、羟脯氨酸含量及病理学观察方面对模型组大鼠进行评价,同时给予十精丸进行干预,采集实验过程中大鼠夜尿供代谢组学分析,通过对模型复制及十精丸给药过程中的大鼠尿液的轨迹变化及差异代谢物标记物的代谢径路及关键靶点分析,阐明大鼠皮肤光老化的发病机制及十精丸对其干预作用的作用机制,并利用已发掘的关键代谢物及代谢酶用于皮肤光老化的预防及治疗研究.结果:与空白组相比,模型组大鼠血清中T-SOD、HPY酶活性显著降低(P＜0.05),MDA含量显著升高(P＜0.05).给予十精丸干预后上述各项指标及组织病理学呈回调趋势,向空白组方向发展.在此基础上尿液代谢组学分析发现,模型组大鼠在紫外光照过程中,体内代谢发生巨大变化,通过对海量代谢物数据的多元统计分析及差异代谢的深入挖掘发现,与大鼠皮肤光老化过程密切相关6个代谢物,即花生四烯酸、L-半胱氨酸、牛磺酸、L-精氨酸、肌酐、L-鸟氨酸.结论:本研究建立的尿液代谢组学技术可用于大鼠皮肤光老化的发病机制研究,十精丸可能通过对花生四烯酸代谢中的关键代谢酶及代谢物发挥干预皮肤光老化的治疗作用.
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水飞蓟宾对 UVA致人表皮角质形成细胞光老化保护作用的研究
目的：对水飞蓟宾的抗细胞光老化作用进行研究。方法：UVA辐射HaCaT造模，酶生化法检测水飞蓟宾对UVA辐射HaCaT后的细胞增殖及抗氧化酶的影响。结果：水飞蓟宾可增加细胞的增殖活力、降低MDA的产生和LDH的漏出量、提高细胞中SOD的活性。结论：水飞蓟宾对UVA致人角质形成细胞光老化具有明显保护作用。
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杜仲对紫外线诱导的人皮肤角质形成细胞光老化模型的影响
目的:考查杜仲乙醇提取物对人皮肤角质形成细胞光老化模型的影响,探讨杜仲抗皮肤衰老的作用和机理.方法:UVB照射HaCaT细胞建立光老化细胞模型,用不同浓度的杜仲乙醇提取物进行干预,以倒置显微镜观察细胞形态,使用MTT法检测细胞活性,以细胞培养液中LDH活性为指标评价细胞膜的损伤程度.结果:UVB照射后明显引发HaCaT细胞光老化反应,经50μg·mL-1和100μg·mL-1杜仲乙醇提取物干预后,细胞形态发生改善,细胞活性显著提高,分别为63.52%(P＜0.01)和62.53%(P＜0.05),培养液中LDH活性显著下降,分别为2547U·L-1(P＜0.01)和(2665±87.73)U·L-1(P＜0.05).结论:杜仲乙醇提取物可以减轻UVB诱导HaCaT细胞的光损伤,佳作用浓度为50μg·mL-1,作用机制可能与其能够清除氧自由基、提高细胞活性、保护细胞膜免受损伤而降低LDH的泄漏有关.杜仲具有抗皮肤衰老的潜力.
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绿原酸对紫外线致ESF-1细胞光老化保护作用的研究
目的:研究绿原酸抗紫外线致ESF-1细胞光老化作用,初步探讨其作用机制.方法:采用40J/cm2的UVA或70mJ/cm2的UVB照射ESF-1细胞后,立即加入不同浓度的绿原酸,24h后MTT法测定细胞活性,试剂盒法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量.结果:绿原酸300mg/L和400mg/L的浓度能使UVA诱导的光老化细胞活性明显增强(P＜0.05),细胞培养液中LDH活力降低(P＜0.05),其中300mg/L绿原酸能使细胞培养液中MDA含量降低(P＜0.05)、SOD活力升高(P＜0.05);200、300、400mg/L的绿原酸能使UVB诱导的损伤细胞活性增强,其中200mg/L的绿原酸能使细胞培养液中SOD活力升高(P＜0.05),MDA含量降低(P＜0.05),LDH活力降低(P＜0.05).结论:绿原酸具有光保护作用,提高SOD活力可能是其减轻紫外线辐射损伤的机制之一.
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甘草酸对光老化HaCaT细胞的保护作用及炎症因子影响
目的:研究甘草酸对UVB光老化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及炎症因子影响.方法:采用30 mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,建立光老化模型;用10-7、10-6、10-5 mol/L甘草酸处理光老化细胞24 h.MIT法检测细胞增殖率;采用试剂盒检测各组细胞SOD、GSH及CAT活性;Western Blot法检测各组细胞IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量.结果:与空白组相比,模型组GSH、SOD及CAT活性显著降低(P＜0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著升高(P＜0.01);与模型组相比,不同浓度甘草酸可使SOD、GSH及CAT活性显著升高(P＜0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:甘草酸能保护UVB诱导的HaCaT细胞光老化,其机制可能与其抑制氧化损伤,减少炎症因子的产生有关.
