蛋白质组学在类风湿关节炎研究中的应用进展

蛋白质组学是一种能够高通量、高精度的检测蛋白质表达的一门新兴技术,蛋白质理念的提出促进了分子生物学向系统生物学的迈进.文章简述了蛋白质组学的三大支撑技术:蛋白质的分离技术、质谱技术和生物信息学技术.总结了蛋白质组学技术在类风湿关节炎(rheumatoid ar-thritis,RA)中取得的进展,表明蛋白质组学在RA的研究中分析得出了一系列的生物学标志物,可用于RA的诊断、治疗、活动度及预后评价等,蛋白质组学为疾病的分析提供了大量的数据,对于RA的研究提供了更多的思路,具有广阔的前景.

中药生物碱类成分的质谱裂解规律研究进展

基于质谱快速、灵敏、准确以及能与其他检测手段联合应用于物质分析的特点,使其在中药分析领域的应用越来越广.电喷雾质谱技术是目前应用广泛的"软电离"质谱技术,具有灵敏度高、专属性强、操作简便等优点.电喷雾的离子化方式比较温和,绝大多数情况下可得到分子离子峰.质谱法具有分析速度快,灵敏度高,专属性强且谱图解析相对简单的优点,在化学成分分析中,质谱法可以提供大量的结构信息,是推测分子量、分子式和分子组成以及阐明结构的重要手段,广泛应用在合成化学、药物及代谢产物、天然产物结构分析中[1].近年来电喷雾质谱已经发展成为中药各类成分分析的一种重要手段,其所提供的大量结构信息为中药中成分的分析鉴定提供了依据[2].

基于超高效液相色谱分析黄连、吴茱萸配伍药对的有效成分

目的:评价通过超高效液相色谱(UPLC)分析黄连、吴茱萸配伍药对的有效成分.方法:选取4对不同产地的黄连、吴茱萸配伍药对进行研究,采用ACQUITY UPLC BEH C18作为本研究的色谱柱(1.7μm,100 mm×2.1 mm),柱温为40℃;加入2μL10℃的样品后,以乙腈(流动相A)-纯水加0.05％甲酸(流动相B),流速为0.4 mL/min进行梯度洗脱,建立UPLC-质谱(MS)指纹图谱分析方法.结果:在黄连、吴茱萸配伍药对的对照指纹图谱和样品指纹图谱的比较中,相对保留时间标定16个较有特征的共有峰分别与单味黄连药物及单味吴茱萸的指纹图谱特征峰比较,发现9、15和16号共有峰是黄连、吴茱萸都存在的特征峰,而1、2、13、14号共有峰仅吴茱萸方有的特征峰,余下共有峰为黄连药物的特征峰.9、15和16号黄连、吴茱萸配伍药对共有的特征峰,结合质谱分析和化合物质裂解规律,推测出木兰花碱、格陵兰黄连碱和1-甲基-2壬基-4(1H)-奎若酮等3中化合物.结论:采用UPLC-MS技术建立黄连、吴茱萸配伍药对有效成分,为黄连和吴茱萸药材的有效成分和质量评估提供参考.

超高压液相色谱-串联质谱法分析中药中甲胺磷残留物

目的:建立中药材中甲胺磷残留物的测定方法.方法:采用超高压液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS )联用技术,采用Acquity UPLC BEHC18(2.1 mm×50 mm,1.7μm),乙睛-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,以保留时间和离子对进行定性和定量,在ESI(+)和MRM监测模式下进行样品分析.结果:在0.5～10.0 mg·L-1,线性关系良好,回收率99.53%,RSD2.1%.结论:该法样品前处理简单、分析速度快、回收率和灵敏度高.

麻黄中生物碱类成分富集新方法及化学成分分析

目的:研究麻黄中生物碱类成分富集新方法并对其生物碱类成分进行分析,以期从中发现新的平喘活性成分.方法:为减少非生物碱类成分对定性分析的干扰、提高生物碱类成分分离制备的效率,该研究采用新型固相萃取填料对麻黄提取物中生物碱类成分进行富集,利用高效液相色谱法对富集到的生物碱类成分进行分离制备,采用HPLC-TOF-MS技术对制备的各组分进行分析,应用无标记整合药理学方法筛选各组分对β2受体的激动活性.结果:新型AC18固相萃取填料对麻黄中生物碱类成分的富集具有较高的选择性,采用基于反相/强阴离子交换混合模式的色谱固定相XCharge C18对富集得到的生物碱类成分进行分离,共制备了14个组分,经HPLC-MS分析,共检测出26个生物碱类成分.在筛选的14个组分中有11个组分显示了对β2肾上腺素受体的激动活性.结合这11个组分HPLC-MS分析结果,检识出其中12个生物碱类成分具有β2肾上腺紊受体激动活性,其中包括5组生物碱及其异构体:麻黄碱/伪麻黄碱,甲基麻黄碱/甲基伪麻黄碱,去甲基麻黄碱/去甲基伪麻黄碱,(±)-1-苯基-2-亚胺基-1-丙醇,(±)-酪胺甜菜碱.结论:麻黄中活性生物碱同分异构体的分离和鉴定对新的平喘活性成分的发现具有指导意义.

银杏叶提取物中银杏萜内酯成分大气压化学电离质谱分析

目的:用高效液相色谱-大气压化学电离-质谱(HPLC-APCl-MS)法对银杏叶提取物中银杏内酯进行分析.方法:液相色谱条件Agilent 3000 Extend-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-水30∶70,流速0.8 mL· min-1,检测波长220 nm,柱温35℃；负离子模式检测.结果:解析鉴别了白果内酯和银杏内酯A,B,C,J,其分子离子峰的m/z分别为324.8,407.1,422.9,438.9,422.9.结论:为银杏内酯的检测提供了一种快速有效的质谱方法.

蛋白质组学在肝损伤本质研究中的应用现状及策略

查阅Pubmed、CNKI等国内外相关研究资料30篇并对其进行汇总和分析.①蛋白质组学技术已应用于药源性肝损伤(DILI)、四氯化碳(CCl4)肝损伤、酒精性肝损伤、脂多糖(LPS)肝损伤、免疫性肝损伤、硫代乙酰胺肝损伤、放射性肝损伤、溴苯肝损伤、肼肝损伤、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)等多种类型肝损伤本质研究中,其中尤以在DILI中的应用为多见；②测试用蛋白样品主要取自动物肝和血清,偶亦用到尿液、胆汁酸、线粒体等；③双向凝胶电泳(2-DE)、MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)和多级MS是其主要分析工具；④肝损伤的蛋白质组机制研究广度和深度有待加强；⑤药物保肝作用的蛋白质组本质研究相对较少.应加强蛋白质组学在肝损伤本质研究中应用的深度,以促进肝损伤本质的全面揭示；应加强蛋白质组学在药物保肝本质研究中的应用力度,从而为保肝药物的科学应用提供更深入更全面的科学依据.

HPLC-Q-TOF-MS鉴定注射用益气复脉冻干粉中皂苷类成分

目的:采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-Q-TOF-MS)鉴定注射用益气复脉冻干粉中皂苷类成分,为后续该制剂皂苷类成分的定量研究及其药效物质基础研究提供参考.方法:分析人参皂苷Rg1,Re,Rb1的质谱裂解规律,结合HPLC-Q-TOF-MS鉴定注射用益气复脉冻干粉中皂苷类成分.结果:人参皂苷Rg1,Re,Rb1的质谱裂解主要有2条途径,分别为①依次丢失所有的配糖基直到形成稳定的去质子化母核;②配糖基的碎裂形成特征性碎片离子.在此质谱裂解规律的基础上,鉴定了注射用益气复脉冻干粉中21个皂苷类化合物,除了人参皂苷Rg1,Rb1,Re,Rc,Rd,Rf,Rg3及三七皂苷R1外,其他13个皂苷类化合物首次在益气复脉冻干粉中报道,同时通过文献对比初步鉴定了五味子甲素.结论:利用HPLC-Q-TOF-MS鉴定了益气复脉冻干粉中大部分含量较高的皂苷类成分,为后续该制剂的深入研究奠定了物质基础.

肾阳虚股骨颈骨折患者松质骨组织差异蛋白质的表达分析

目的:比较并分析肾阳虚与非肾虚患者股骨颈松质骨差异表达的蛋白质,从骨组织功能蛋白质角度初步探讨“肾主骨”理论科学内涵.方法:收集肾阳虚患者及非肾虚患者的股骨颈松质骨标本各13例,进行骨总蛋白提取、双向电泳(2-DE)蛋白质分离、凝胶图谱的获取、质谱分析及生物信息学检索.结果:2-DE获得的肾阳虚及非肾虚患者股骨颈松质骨可辨识总蛋白点数目为582个,与非肾虚组比较,肾阳虚证组有16个蛋白出现差异表达.其中线粒体热休克蛋白90(Hsp90s)等5个蛋白表达上调;骨形态发生蛋白4(BMP-4)等11个蛋白表达下调.结论:股骨颈松质骨16个蛋白表达改变可能与肾阳虚证的发生有关, “肾”可能通过调节这些与骨组织关系密切的蛋白表达而发挥“主骨”作用.

大肠癌虚实证候与蛋白质差异性表达的研究

目的:研究大肠癌虚证(气血亏虚)和实证(湿热蕴结)蛋白质差异性表达,从蛋白质水平上探讨大肠癌虚实证的本质.方法:用双向凝胶电泳分离虚实证大肠癌蛋白质,银染,PDQuest 2-DE软件分析,对部分差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,查询SWISS-PROT、NCBI数据库.结果:获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳图谱,共筛选出23个差异蛋白点,其中有21个差异蛋白质得到鉴定,这些蛋白包括热休克蛋白、细胞骨架蛋白、抗氧化蛋白、信号转导相关蛋白、能量产生相关蛋白、血液蛋白等.结论:初步建立了大肠癌虚实不同证型-蛋白质表达谱,为研究大肠癌虚实不同证型的本质提供了物质基础.

消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45皮下移植瘤模型血清蛋白质组表达的影响

目的 观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45皮下移植瘤模型血清蛋白质组表达的影响.方法 30只BALB/c-nu/nu裸鼠随机分为正常组、模型组、干预组,采用瘤块接种方法造模.正常组自由饮食,模型组、干预组分别给予生理盐水、消痰散结方灌胃.运用蛋白质组学的双向凝胶电泳技术,观察3组之间的血清蛋白质组表达差异,筛选出与消痰散结方作用相关的差异表达蛋白质,并对其进行质谱鉴定,确认差异表达蛋白质的身份.结果 去除血清中高丰度蛋白质后获得分辨率高、重复性稳定性好的血清2-DE图谱.与正常组比较,模型组中找到25个差异表达蛋白点,其中12个表达上调,13个表达下调.与模型组比较,干预组中找到19个差异表达蛋白点,其中14个表达上调,5个表达下调.3组间比较共找到差异表达蛋白点9个,与正常组比较,在模型组中表达上调、在干预组表达回调至正常组水平的3个,终鉴定为结合珠蛋白、泛素蛋白连接酶、组蛋白甲基转移酶;与正常组比较,在模型组中表达下调、在干预组表达回复至正常组水平的有6个,其中3个鉴定为载脂蛋白A1、过氧化物酶1、超氧化物歧化酶.结论 消痰散结方对载脂蛋白A1、过氧化物酶1等功能蛋白表达的综合性调节可能是其发挥抗胃癌作用的重要机制.

中医不同证型帕金森病患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 研究中医肝阳化风证和血虚生风证帕金森病患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)的比较蛋白质组差异,从蛋白表达水平上探讨中医肝阳化风证和血虚生风证的本质.方法 用固相pH梯度双向凝胶电泳分离肝阳化风证和血虚生风证帕金森病患者和正常人PBMC总蛋白质,考马斯亮蓝染色,PDQuest 2-DE软件分析,对部分差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用Mascot查询系统查询SWISS-PROT数据库.结果 获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳考染图谱,对其中的15个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析,经数据库查询,初步鉴定为一些与细胞骨架,抗氧化应激、蛋白降解、信号转导、细胞周期调控等有关的蛋白质.结论 建立了帕金森病肝阳化风证和血虚生风证PBMC的双向凝胶电泳图谱,提示帕金森病肝阳化风证和血虚生风证患者和正常人的PBMC的蛋白质表达具有差异,这种蛋白质组的差异分析有助于为研究肝阳化风证和血虚生风证本质在蛋白质水平上提供物质基础.

我国将构建现代中药质谱分析平台

用色谱和ESI-MS方法考察四物汤提取部位的化学成分

目的:为了探讨四物汤补血作用的物质基础,制备3种不同极性的四物汤提取部位(C1,C2,C3),对这3种部位的化学成分特点进行考察.方法:综合运用高效薄层色谱(HPTLC)、高效液相色谱(HPLC)、电喷雾离子化质谱(ESI-MS)3种方法对四物汤的C1,C2,C3部位及四味单药相应部位进行分析和比较.结果:四物汤部位C1中含有种类丰富的成分,包括阿魏酸、芍药苷等,并且应含有藁本内酯,而糖类物质极少;C2的成分以芍药苷、单糖、二糖为主;C3的成分以单糖和二糖为主.结论:综合运用色谱和直接输注ESI-MS,可以获得关于方剂提取部位组成的丰富信息.不同方法的结果可以相互比较,相互印证,使所获得的信息比单一方法更全面更确切.本研究的结果对于探讨四物汤补血物质基础具有参考意义.

用AMD技术和TLC ESI-MS离线联用技术分析四物汤中的糖类成分

目的:对具有补血活性的四物汤提取物C薄层色谱(TLC)中的糖类斑点进行定性分析.方法:用自动多次展开(AMD)方法获得了四物汤提取物C的TLC图谱,用TLC与电喷雾离子化质谱(ESI-MS)离线联用技术对其中4个主要斑点进行分析,并且用AMD技术对其中的单糖进行了分析.结果:4个斑点的构成物质分别主要为单糖、二糖、三糖、四糖,其中单糖主要由葡萄糖和果糖组成.结论:TLC ESI-MS离线联用方法能快速简便地对中药TLC图谱中糖类斑点进行定性.AMD单糖分析方法可实现在普通10 cm硅胶板上8种常见单糖的良好分离,并且展开过程自动化.AMD和TLC ESI-MS离线联用技术对糖类成分分析具有良好的应用价值.

双氧水降解残留农药效果及对苦参有效成分的影响

目的:研究双氧水对残留农药降解的效果及对苦参药材中生物碱成分的影响.方法:2组加标苦参药材经双氧水处理,改变双氧水处理时间、浓度、环境pH,用气-质联用技术分析一组苦参中的农药残留含量,用高效液相色谱分析另一组苦参中的生物碱含量.结果:在双氧水条件下,有机磷、拟除虫菊酯类农药基本符合消解一级反应动力学方程.有机磷、拟除虫菊酯类农药在酸、碱性条件下降解效果较好,碱性条件更好;各农药降解率还随处理时间的延长、双氧水浓度的增加而提高.苦参生物碱成分也受双氧水、反应液pH影响,但在中性条件下,用3 mL·L-1双氧水短时间处理,其含量变化不大.结论:双氧水降解农药具有快速简便、成本低等优点.

新疆桃仁HPLC-UV指纹图谱研究及在地区分类中的应用

该研究建立了新疆桃仁 HPLC-UV指纹图谱测定方法,方法采用Shimadzu Inertsil C18(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈线性梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,检测波长210 nm.指纹图谱中的9个色谱峰利用UPLC-Q-TOF-MS得到了指认,对41批样品指纹图谱进行聚类分析(HCA)、偏小二乘法判别分析(PLS-DA)和相似度分析(SA),新疆桃仁可分为2类,其中6个成分为分类标志物.所建立指纹图谱方法简便、稳定、可行,可用于新疆桃仁的质量控制及分类.

基于部分酸水解-亲水作用-LC-MS的北沙参多糖结构表征

由于中药多糖结构复杂、相对分子质量大,难以表征,该研究以中药北沙参40％乙醇沉淀多糖(Glehniae Radix polysaccharides,RGP)为研究对象,应用“自下而上”法完成对RGP的结构表征.该文初采用部分酸水解方法水解RGP,分别考察了酸浓度、水解时间和温度对其水解效率的影响.在佳条件(1.5 mol·L-1 TFA,4h,80℃)下,RGP被水解为特征性寡糖片段.之后,采用HILIC-LC-MS对RGP部分酸水解产物进行分离和结构表征.同时结合几种标准二糖的MS和MS/MS分析,建立依靠质谱分析确定多糖糖苷键类型的方法.结果确定了4种糖苷键连接类型在MS/MS中的断裂规律,并发现RGP为含有1,4-糖苷键的线性葡聚糖,水解得到聚合度4～11的葡寡糖.

中药急性子油类成分分析及毒性考察

急性子为凤仙花科植物凤仙花Impatiens balsamina L.的干燥成熟种子.具有破血软坚,消积的功效,临床上用于癥瘕痞块,经闭,噎膈等[1].笔者首次采用CO2超临界流体萃取技术从中药急性子中提取脂肪油及挥发油成分,将提取物甲酯化,并用气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪对这部分化学成分进行分析,从中鉴定出26个化合物.

亲水作用色谱-质谱联用法同时测定参附注射液中的14种有机酸

有机酸广泛分布在植物及相关产品中,其参与多种代谢途径(如三羧酸循环),并表现出多种药理活性.参附注射液作为广泛使用的中药注射剂,不良反应时有报道.因而,应深入阐明参附注射液的化学组成,并制定严格的质量标准,进而保障其临床使用安全有效.参附注射液由红参及黑顺片经现代工艺提取制备而成,有机酸为其主要成分类别之一.该研究通过建立HILIC-LC-MS,同时测定参附注射液中肉桂酸、阿魏酸、4-羟基苯甲酸、乳酸、已二酸、延胡索酸、咖啡酸、琥珀酸、马来酸、丙二酸、苹果酸、莽草酸、酒石酸和金鸡纳酸等14种有机酸成分的含量.14种有机酸类成分在HILIC色谱柱上均获得较好的保留和分离.除肉桂酸(231 μg· L-1)、乳酸(113 μg·L-1)和丙二酸(32.5 μg·L-1)外,其余11个化合物的定量限均小于10 μg·L-1.定量结果表明,苹果酸、丙二酸、奎尼酸、乳酸和肉桂酸在参附注射液中含量较高(＞1.89 mg·L-1),而10批样品中均未检测到咖啡酸和已二酸.该方法适用于参附等中药注射液中多种有机酸含量的同时测定.