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比较蛋白质组学在电离辐射中的应用及其研究进展
比较或差异蛋白质组学作为蛋白质组学研究的重要组成部分,以双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)和质谱(mass spectrometry,MS)技术为核心,着重探讨机体在不同病理生理条件下蛋白质时空表达的变化,目前已广泛应用于疾病早期诊断、疗效监测、发病机制探讨、肿瘤标志物及药物靶点筛选等诸多研究领域,筛选出许多重要功能的相关蛋白.
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基于LC-MS的代谢组学分析流程与技术方法
代谢组学是继基因组学、转录组学、蛋白质组学之后兴起的又一新的组学研究分支,但其研究技术方法一直以来都是影响代谢组学发展的瓶颈之一.超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)技术结合化学计量学比较好地实现了对大量样品和微量代谢物的快速定性、定量分析,极大地推动了代谢组学的发展.本文按照代谢组学分析流程综述了LC-MS与化学计量学相结合用于代谢组学研究的现状与进展,并对重要研究方向进行了简要展望.
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硫代反义寡核苷酸质量控制方法的研究进展
综述了高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)、质谱(MS)和核磁共振(NMR)在硫代反义寡核苷酸质量控制中的应用.硫代修饰的反义寡核苷酸可以抑制基因的表达,在病毒感染和癌症治疗方面有着重要用途.药物要用于临床,必须对活性成分和生产相关的杂质进行鉴别、检查.对于硫代寡核苷酸,由于其结构特殊,必须综合运用包括HPLC,CE,MS和NMR在内的多种分析手段控制其质量.HPLC和CE技术用于对杂质和活性成分进行定性、定量分析;NMR可以精确地确定硫代产物的含量;MS则能够在测定硫代寡核苷酸分子量的同时确认其序列的正确性.
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微透析与现代分析技术联用的研究进展
微透析技术是一种优良的活体取样方法,微透析样品量少、浓度低的特点对建立分析方法提出了极大挑战,因此将微量取样技术与灵敏度高的分析技术的联用,可获得对活体内的一些组分的实时、连续、在线的检测.基于非分离的方法可用来在某一时间点对某一物质进行测定,包括生物传感器、免疫测定、质谱等.基于分离的方法可在线检测多种物质,包括高效液相色谱、高效毛细管电泳法等.微量取样技术与现代分析技术联用已成为生物学、医学、药学研究的强有力手段.
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基于化学蛋白质组学的激酶组学研究进展
蛋白激酶是细胞内信号转导通路网络的关键组成部分，调节细胞生长、分化、代谢及生存等重要生物学过程。激酶组(kinome)是指细胞或组织中所有激酶的总称。激酶组学（kinomics）是研究激酶组的学科，包括激酶的丰度、活性、底物特异性、磷酸化状态及氨基酸突变。目前人激酶组由568种基因编码组成，其中约50%激酶定位于疾病基因位点。由于基因扩增或突变引起的蛋白激酶活性失调与许多疾病的发生相关，包括炎症、糖尿病及各种肿瘤，因此，人激酶组被认为是药物靶点的潜在资源库。靶向激酶的小分子抑制剂已成功用于肿瘤治疗。化学蛋白质组技术是一种新的深入研究激酶组的方法，是将亲和富集与质谱技术相结合，在生理状态下研究激酶丰度及磷酸化水平。通常情况下，将一个或多个广谱小分子激酶抑制剂偶联于固相载体（如琼脂糖凝胶），亲和富集细胞或组织中的所有激酶，然后通过质谱鉴定或定量。该方法可用于激酶抑制剂药物或药物候选物的靶点专一性及耐药机制研究，为深入研究药物作用机制及寻找联合用药新靶点提供依据。对人激酶组及肿瘤激酶组无偏见、全景式分析能帮助发现更多新药靶点，以及激酶活性谱与肿瘤治疗的相关性，为个体化治疗提供依据。本文对人激酶组、激酶、激酶抑制剂与肿瘤的关系，基于化学蛋白质组的激酶组学研究进展及其在药物研究中的新应用进行综述。
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用MassLynx4.1软件提取液相色谱质谱联用部分重叠色谱峰的质谱图
目的 两个化合物A和X采用液相色谱质谱联用法实现部分分离,并形成部分重叠峰.尝试在不改变分离条件的情况下获得化合物X的“较纯的”质谱图.方法 运用MassLynx 4.1软件的“谱图合并(Combine Spectra process)”功能,扣除化合物A的信号.结果 与预期相符,所获得的质谱图明晰,提示X可能是A的脱氢类似物,后经验证,与A脱氢类似物纯品的质谱图一致.结论Masslynx 4.1软件的“谱图合并”功能可以帮助分析者更容易地获得清晰的质谱信息,并有可能节省传统方法中优化色谱条件所花费的时间,是液相色谱质谱联用分析的有力工具.
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7种喹诺酮类抗生素的电喷雾质谱裂解规律研究
目的 研究7种喹诺酮类抗生素的电喷雾质谱裂解规律.方法 采用超高效液相串联-四极杆飞行时间质谱对农业部公告限用的7种喹诺酮类抗生素进行分析,Acquity HSS T3UPLC色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm),柱温: 30℃,流速:0.2ml·min-1,进样量:2μl,采用流动相梯度对样品进行分析,质谱离子源为电喷雾电离源,在正离子模式下进行检测,碰撞气为氮气,干燥气温度:350℃,干燥气流速:10L·min-1,毛细管出口电压:125V,锥孔电压:65V.结果 正离子模式下,喹诺酮类化合物易获得质子形成[M+H]+ 的母离子,碰撞诱导解离后产生特征碎片离子,根据各子离子的精确质量数可确证其结构,对各喹诺酮类化合物的质谱裂解规律进行分析.结论 本文提出的喹诺酮类抗生素的质谱裂解规律可为动物源食品中喹诺酮类化合物的筛查及结构鉴定提供依据.
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HPLC-APCI-MS分析半边旗中二萜类化合物
目的建立一种准确可靠的分析半边旗中二萜类化合物的方法.方法用高效液相色谱(HPLC)-大气压化学电离源(APCI)-质谱(MS)联用的方式,以选择离子监测(SIM)方式进行测定.主要的二萜类化合物5F和4F的准分子离子为[M-H]-1,发生源内分子离子碰撞活化解离(CID)现象时,出现[M-H]-1和[M-H2O-H]-1离子峰.采用[M-H]-1为选择监测离子,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量,优选质谱条件和色谱条件.分析色谱柱为Diamonsil ODS,4.6 mm×150 mm,流动相为30% CH3CN-70% 2 mmol*L-1 NH4Ac,流速1.0 mL*min-1,进样5 μL.以测定半边旗中二萜类化合物5F为例,对此方法进行了应用.结果半边旗中二萜类化合物5F为1.18 mg*g-1,方法线性范围0.05～2.5 μg,相关系数均优于0.999,检出限达0.4 ng(进样5 μL).5F的加标回收率为97.8%(n=3),5F保留时间为4.3 min.结论本法灵敏、准确、可靠,可应用于半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和生药标准的制定.
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质谱联用技术在生物样品分析中的应用
质谱分析具有分析范围广、灵敏度高、样品用量少、分析速度快、重复性好、操作简易、损耗低、分离与鉴定可同时进行等优点,已广泛应用于环境科学、能源化工、生物医药等领域.本文综述了近 3 年国内外关于质谱联用技术在生物样品分析中应用的文献,并着重介绍了质谱技术在药物代谢动力学和生物等效性、毒代动力学、药代动力学-药效学、群体药代动力学、药物及代谢物结构确证与裂解规律和代谢组学中的应用,以期为生物样品分析的进一步发展提供参考.
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质谱在糖分析中的应用
100多年前德国著名科学家E.Fischer开始了糖的研究,1923年M.Heidelber和T.Oswald提出细菌的抗原部分是多糖而不是蛋白质,因此,糖类的生命科学几乎与蛋白质的生命科学同时诞生.
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质谱在肽和蛋白分析中的应用
质谱已成为肽和蛋白分析的重要工具,主要归功于一些软电离技术的应用,如电喷雾(ESI)和基体辅助激光解吸电离(MALDI).生物大分子多为极性、难挥发化合物,不易气化,用传统质谱无法测定.但随着新的离子化技术的广泛应用,现已能高效地电离一些完整或片断的大分子生物聚合物,从而进行质谱测定.本文对质谱在肽和蛋白分析的几个领域中的应用进展进行评述.
关键词： 质谱 软电离技术 电喷雾 基体辅助激光解吸电离技术 蛋白分析 -
HPLC-DAD-MS/MS法快速分析布格呋喃降解产物
利用HPLC-DAD-MS/MS对布格呋喃降解产物进行快速分离分析和结构鉴定.以Zorbax C8(5 μm,4.6 mm×150 mm)为色谱柱,乙腈-水(78∶22)为流动相,采用电喷雾离子源,正离子模式检测.通过高效液相色谱串联质谱和DAD检测器联用,在线分离并检测降解产物.根据降解产物的保留时间、紫外光谱及MS、MS/MS数据,结合布格呋喃的可能降解反应推断降解产物的结构.结果表明布格呋喃中6个主要降解产物均为布格呋喃的氧化或过氧化产物.降解产物A为布格呋喃的双键环氧化产物,降解产物B、C、D、E是在降解产物A的基础上进一步氧化形成的二级或多级产物,降解产物F为布格呋喃的过氧化产物.本文建立的HPLC-DAD-MS/MS法可快速分析布格呋喃中的降解产物,为降解产物鉴定提供重要的结构信息.
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高效液相色谱－质谱联用法测定人血浆中拉莫三嗪的浓度研究
目的：建立高效液相色谱－质谱联用法测定血浆中拉莫三嗪浓度的方法。方法色谱柱WATERS XTerra RP18（4．6 mm ×100 mm，3．5μm），流动相为甲醇－10 mmoL? L－1醋酸铵（含0．05％甲酸）水溶液（50∶50），柱温为35℃，流速为0．8 mL? min－1，电喷雾离子源，正离子检测，检测专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果拉莫三嗪在5．0～1000．0μg? L－1线性关系良好（r＝0．9988），批内和批间精密度的相对标准偏差（RSD）均小于15％，提取回收率96．5％～99．0％。结论本方法测定准确、灵敏、简便，可用于人血浆的拉莫三嗪浓度检测。
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脂质组学在疾病生物标记物研究应用现状
脂质组学通过研究脂质的结构和功能及其在体内的代谢变化，明确其对疾病诊断和治疗的作用，以期提高疾病风险预测的能力。常用脂质组学分析方法包括直接质谱注入法（鸟枪法）、色谱质谱联用法和核磁共振法等。脂质组学在疾病早期诊断、生物标志物的发现、新药研发以及系统研究方面都发挥了很大作用。本文旨在介绍脂质组学在疾病生物标志物发现中的应用及其研究方法。
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基于色谱质谱联用的尿液代谢组学归一化方法
代谢组学是近年来快速发展起来的一门学科,具有高灵敏度的色谱质谱联用技术是其主要的分析手段之一.代谢组学的主要研究对象为尿液、血浆及胆汁等,其中尿液由于受到饮水量等不可控因素的影响,导致内源性代谢产物的浓度发生改变,因此必须进行归一化处理以消除这种差异.本文综述了4种基于色谱质谱联用的归一化方法:肌酐归一化、峰面积归一化、渗透浓度归一化及尿液体积归一化,并分别阐述了其优缺点,希望能对相关的研究工作提供参考.
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代谢组学的研究现状与展望
代谢组学是20世纪90年代中期发展起来的对某一生物或细胞所有低相对分子质量代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科,由于其广泛的应用前景,目前已成为系统生物学的重要组成部分.现简要介绍了代谢组学的含义、代谢组学研究的历史沿革、当前代谢组学研究中的分析技术、数据解析方法,综述了代谢组学在药物毒理学研究、疾病诊断、植物和中药等领域的应用情况,并对当前代谢组学研究中存在的问题及发展趋势进行探讨.
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基因工程药物中宿主细胞蛋白的检测与控制
宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCPs)是基因工程菌株或细胞株自身产生的与基因工程目的产物无关的蛋白混合物,其中有些蛋白是工程菌株或细胞株生存、繁殖及其他正常生理活动所必须的,其在产品生产过程与目的产物共同纯化且不能被去除.HCP的组成与丰度在生产的各个阶段与终产品都各自不同,其决定于许多不同因素.ELISA(enzyme-linked-immunosorbent assay)是HCP定量检测中常用的分析手段,但是由于依赖于特异性抗体的产生,在许多情况下也限制了该方法的检测应用.可视化检测技术(如双向差异凝胶电泳)与定性检测技术(如质谱分析)成为ELISA检测的有力验证与补充.对HCP及其产生机制越来越深入的理解有助于我们设计基因工程药物的生产过程(从上游细胞系的选择到下游纯化手段的选择),从而降低或去除终产品中的HCP.
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液质联机法初步研究洛伐他汀的微生物转化
目的:分析微生物对洛伐他汀的转化.方法:应用HPLC/MS技术测定转化产物的相对分子质量.其中液相色谱条件为色谱柱:Alltima ODS2(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.5%乙酸(80:20);流速:1.OmL·min;柱温:室温.质谱为ZMD Micromass电喷雾质谱仪.结果:得到相应的HPLC和MS图谱,并对其分析发现此菌株对洛伐他汀有转化作用.结论:HPLC/MS适合于研究他汀类药物的微生物转化.
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体内药物分析方法学研究中易忽略的LC-MS/MS法基质效应和逆转化问题
进行体内药物分析前,研究者会按照相关要求做方法学考察,以保证分析方法的准确和可靠.由于生物基质的复杂性,并不是所有影响准确性的因素均能在方法学考察时反映出来.本文总结了两个影响测试准确性的因素:外源性基质(制剂中的辅料、药物的代谢产物及合用的其他药物等)产生的基质效应以及代谢产物的逆转化现象,以期引起相关人员的重视.
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HPLC-TOF-MS分析盐酸羟苄唑原料有关物质
目的：对盐酸羟苄唑原料中的有关物质进行分析，分析其杂质来源。方法：采用HPLC-TOF-MS法。色谱柱为Zorbax XDB C18（4.6 mm ×150 mm，5μm），流动相为甲醇-乙腈-醋酸铵缓冲液（pH 4.0）（20∶10∶70），流量1.0 mL· min－1，检测波长277 nm；采用电喷雾离子源（ ESI ），离子源温度为120℃，正／负离子扫描检测，一级全扫描及二级扫描测定，质量扫描范围m／z 100～1200。结果：初步分析有两个主要杂质，并推测其结构及来源。结论：本方法的分析结果，可为盐酸羟苄唑原料质量标准提高提供重要依据，并为其质量控制提供保障。
