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沉默Peroxiredoxin I基因对乳腺癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响
目的 探讨Peroxiredoxin I(Prx I)沉默后对乳腺癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及其作用机制.方法 将稳定表达Prx I shRNA的pGPU6-Prx I和阴性对照pGPU6-HK细胞接种于裸鼠皮下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型.实验共分为4组:pGPU6-HK组、pGPU6-Prx I组、pGPU6-HK+照射(ionizing radiation,IR)组、pGPU6-Prx I+IR组.用6MVX线照射裸鼠瘤组织,测量肿瘤体积,称取肿瘤质量,计算抑瘤率;免疫组化检测肿瘤组织中Prx I和Caspase3蛋白表达;电镜观察肿瘤细胞超微结构,Western blot测定肿瘤组织中γ-H2AX和Rad51蛋白表达.结果 成功构建了裸鼠移植瘤模型,pGPU6-Prx I+IR组裸鼠移植瘤生长肿瘤明显迟缓,体积较小,抑瘤率为79.76%,与pGPU6-Prx I(34.92%)和pGPU6-HK+IR(56.94%)比较差异具有显著性(P<0.05);给予pGPU6-Prx I及IR处理后,肿瘤细胞凋亡和坏死增多,Prx I和Rad51蛋白表达减少,而Caspase3和γ-H2AX蛋白表达增加,以pGPU6-Prx I+IR组更为显著,其Rad51蛋白下降了84.8%,γ-H2AX蛋白表达升高5.6倍(P<0.05).结论 沉默Prx I表达可提高乳腺癌移植瘤的放射敏感性,其作用机制与DNA双链断裂增加、DNA损伤后修复能力降低有关.Prx I可能是-个理想的乳腺癌放射增敏分子靶点.
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五味子乙素对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡及自噬蛋白LC3的影响
目的 探讨五味子乙素(Sch B)对顺铂(CDDP)诱导的小鼠急性肾损伤(AKI)肾小管上皮细胞凋亡与自噬的影响及作用机制.方法 30只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、Sch B对照组、模型组以及Sch B干预(Sch B浓度分别为20 mg/kg、100 mg/kg)组,每组6只.采用腹腔注射CDDP法建立AKI模型,收集各组血及肾组织,检测血肌酐(SCr)水平,免疫组化检测各组肾组织中p53蛋白含量,蛋白免疫印迹(West-ern blotting)法检测各组肾组织p53蛋白、自噬标志蛋白微管相关蛋白L轻链3(LC3)的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测肾小管上皮细胞凋亡情况,光镜观察肾组织形态改变.结果 (1)与空白对照组比较,模型组SCr、肾小管上皮细胞凋亡数均升高(P<0.05),p53蛋白含量、p53蛋白表达、LC3蛋白表达均降低(P<0.01).(2)与模型组比较,Sch B干预组SCr、肾小管上皮细胞凋亡数均下降(P<0.01);Sch B能上调p53蛋白、LC3蛋白表达(P<0.01),改善肾小管上皮细胞融合、空泡变性等病理改变,减轻肾小管损伤.结论 Sch B对顺铂所致小鼠AKI有保护作用,其机制可能与上调p53蛋白、LC3蛋白表达水平,改善细胞DNA损伤修复,增强肾组织的自噬有关.
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端粒结合蛋白CTC1提高人乳腺癌细胞放射抗性的潜在作用机制
目的 探讨端粒结合蛋白CTC1 提高人乳腺癌细胞放射抗性的潜在作用机制.方法 以单纯转染试剂的细胞作为空白对照( Mock组),siNC 转染细胞作为阴性对照(siNC 组),siCTC1#3 转染细胞作为实验组(siCTC1#3 组). MDA-MB-435/MDA-MB-435R 细胞分别以3×105个细胞浓度接种于铺有细胞爬片的6 孔细胞培养皿中,待6 h 左右细胞贴壁后,将细胞分为未处理组( untreated 组)、单纯射线照射组( IR组)、siCTC1#3 干扰组和射线照射联合siCTC1#3 干扰组(IR+siCTC1#3 组).将siRNA (siCTC1#3和siNC)利用脂质体转染至MDA-MB-435/MDA-MB-435R 细胞48 h 后CCK8 试剂盒检测细胞增殖及细胞毒性;台盼蓝染色测定细胞增殖动力学;Real time PCR 检测细胞相对端粒长度;免疫荧光检测细胞的DNA 损伤修复能力及CTC1 蛋白与γH2AX 的共定位情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;检测细胞Caspase-3的活性以明确细胞早期凋亡事件的触发情况.结果 siCTC1#3组与siNC 组、Mock组增殖能力、相对端粒长度相比,差异有统计学意义(P＜0.05);siCTC1#3 组并没有明显引起细胞周期时相的改变(P ＞0.05);MDA -MB-435R 细胞与MDA-MB-435 细胞相比,对数生长期的增殖速度、相对端粒长度、γH2AX 焦点的数量差异有统计学意义(P＜0.05);IR+siCTC1#3组与IR组相比,γH2AX 的数量、细胞凋亡率、坏死率差异有统计学意义(P＜0.05);在转染后24 h,MDA-MB-435和MDA-MB-435R细胞中siCTC1#3组Caspase-3的活性分别为相应Mock 组的(4.36 ±0.53)倍和(3.21 ±0.24)倍(P＜0.01).结论 端粒结合蛋白CTC1 提高人乳腺癌细胞放射抗性的机制与该蛋白促进肿瘤细胞增殖、促进DNA 损伤修复、抑制端粒缩短和抗细胞凋亡有关,而与调节细胞周期进程无关.
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RECQ1的生物学特性在多发性骨髓瘤化疗中的意义
RECQ1系ATP依赖性DNA解旋酶,其表达特征与人类肿瘤性疾病有明显相关性,在多种肿瘤细胞迁移与侵袭中具有调控效应,并证实RECQ1在多种肿瘤化疗中能明显增强和诱导肿瘤对药物的耐药性,与多发性骨髓瘤(MM)的发病机制有关.本文从近年对RECQ1生物学特性的研究及其与MM相关性予以分析,认为RECQ1解旋酶的靶向抑制剂可能成为抗MM药物研究和治疗的新架构、新趋势和新靶点.
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USP3在DNA损伤修复及抗感染免疫中的研究进展
USP家族是去泛素化酶家族中种类多、结构复杂的一类,由三个区域组成,形成一个类似手型的结构.包含催化结构区域以及蛋白质结合区域,作用于底物蛋白的泛素分子或者多聚泛素链从而将其降解.其广泛参与到肿瘤发生、细胞分化、信号传导等过程中,近些年逐渐成为研究热门.作为USP家族中新发现的一个成员,USP3近年来在DNA损伤修复、抗感染免疫及肿瘤发生发展等领域中研究渐多,现将其相关研究进展进行简要综述,以供参考.
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Wee1蛋白激酶的研究进展
Wee1是丝氨酸像氨酸蛋白激酶家族的一员,在多种肿瘤中过表达,抑制Wee1蛋白激酶活性可引起细胞死亡或永久性细胞生长停滞.研究证明Wee1可作为治疗肿瘤的靶点,其特异性小分子抑制剂AZD-1775(也称为MK1775)已进入临床Ⅱ期试验.本文就Wee1蛋白激酶的结构及其在细胞周期和恶性肿瘤中的作用作一综述.
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DNA损伤修复基因在鼻咽癌中的研究进展
鼻咽癌(nasopharyngeall carcinoma,NPC)是发生在鼻咽腔后方及咽部上方部位的恶性肿瘤.全世界的鼻咽癌病例约80%在中国,为我国常见且恶性程度较高的肿瘤之一,南方发病率高于北方,以广东、广西、福建、湖南等省份发病率高,可达到30/10万～50/10万.
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hOGG1在小细胞肺癌中的表达特点及其与预后的关系
目的 探讨人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（human 8-hydroxyguanine deoxyribonucleic acid glycosidase,hOGG1）在小细胞肺癌中的表达特点及其与患者预后的关系.方法 应用免疫组化检测71例小细胞肺癌组织和30例正常肺组织中hOGG1的表达,按细胞阳性百分数及染色强度将其分为低表达组和高表达组,并分析hOGGI在小细胞肺癌表达与临床病理及患者预后的关系.结果 正常肺组织与小细胞肺癌组织中均有hOGG1表达,但正常肺组织以细胞质表达为主(60.0％),而小细胞肺癌组织以核质共表达为主(49.3％),两者亚细胞定位有明显差异(P＜0.01)；在hOGG1表达高低方面,正常肺组织100％为低表达,而小细胞肺癌组织78.9％为高表达,两者间也存在明显差异(P＜0.01);hOGG1的表达与患者的性别、肿瘤分期、吸烟指数、有无淋巴结转移及有无胸水无明显关系(P＞0.05)；Kaplan-Meier分析显示hOGG1的表达强弱与患者的预后明显相关(P＜0.05),hOGGI低表达组中位生存时间为23个月,hOGG1高表达组中位生存时间为13个月.COX比例风险模型分析结果提示hOGG1是影响患者生存的独立预后因素(P=0.004).结论 hOGG1蛋白核质共表达为主的高表达与小细胞肺癌的发生及发展有关,hOGG1蛋白表达增强可能是小细胞肺癌患者预后不良的指标之一.
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RNA干扰抑制KM3细胞APE1蛋白表达对其增殖与凋亡的影响
目的探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE1)基因RNA干扰对KM3人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞APE1蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响,以期为转基因治疗多发性骨髓瘤提供实验依据.方法将构建的APE1 siRNA表达载体导人人多发性骨髓瘤细胞株KM3细胞,应用Western blot检测APE1蛋白表达的改变,并通过细胞增殖曲线、MTT法和流式细胞术、DNA片段化百分率检测观察靶细胞的增殖与凋亡.结果 Western blot分析表明APE1 siRNA表达载体使KM3细胞APE1蛋白表达下降,细胞生长曲线观察、MTT法检测显示,转染的KM3细胞生长受抑,流式细胞术和DNA片段化百分率检测观察到APE1 RNA干扰使靶细胞凋亡明显增加.结论 APE1 RNA干扰通过降低APE1蛋白表达,抑制KM3细胞生长和促进其凋亡.
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多发性骨髓瘤患者APE1蛋白表达的临床意义
目的检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)患者脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease, APE1)基因表达,探讨其临床意义.方法采用免疫细胞化学、Western blot分析在MM细胞系KM3、32例MM患者和10例正常自愿者骨髓标本中检测APE1蛋白表达及定位,并且通过图像分析系统计算其积分光密度值.结果在阳性对照的MM细胞系KM3中胞核、胞核/胞浆、胞浆均有APE1表达,其中尤以胞核明显.APE1胞浆阳性分度在正常对照组、初治组、复发或难治组间依次增高(P＜0.01,0.05).结论 APE1蛋白表达强度与MM疗效有关,APE1基因表达增强可能是MM患者预后不良的指标之一.
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转录因子FoxO1在神经元凋亡中的作用
Firkhead转录因子(Fox蛋自家族)是2000年才正式统一命名的一个新的转录因子家族,自20世纪90年代首次在果蝇中发现该基因以来,其家族已先后发现100多个Fox基因,该家族的共同特征是具有一个长110个氨基酸的保守的DNA结合结构域,称为Fox(Forkhead box)结构域,含有一个螺旋-转角-螺旋基序,有3个α螺旋和2个大环形成的翼状(winged)结构[1].Fox家族又分为17个亚家族,即FoxA～Q,其中FoxO亚家族主要通过调控转录和信号转导途径在动物细胞凋亡、细胞周期停滞、DNA损伤修复及糖代谢等方面发挥重要作用[2].
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DNA修复抑制剂与肿瘤
人体细胞每天在内外源性DNA损伤因子的作用下会产生大量不同类型的损伤,而人体细胞内也存在着完善的DNA修复机制来应对这些损伤,恢复DNA的完整性和保真性,从而维持遗传稳定性.越来越多的证据提示,在肿瘤的发生、发展和治疗过程中,DNA修复功能会发生变化,而这些变化很可能与肿瘤的各种生物学行为密切相关.许多致癌物都是通过损伤基因组 DNA 而导致基因的突变,一旦 DNA 损伤反应(DDR)通路中关键基因,如BRCA1、BRCA2、BLM、FAN-CA、TP53、RAD51C和MSH2等发生突变,便会进一步导致DNA修复功能缺陷和引发基因组不稳定性,极易增加癌变风险.肿瘤细胞携带有大量的突变基因,DNA复制时会产生复制叉的阻滞而触发DDR导致细胞凋亡;当氧化还原反应相关基因处于突变失活状态时,氧化应激产生的活性氧自由基(ROS)会引发DNA氧化损伤.因此,我们可以利用DNA修复抑制剂,放大DNA复制应激和氧化应激的效应,突破肿瘤细胞对这些效应的耐受极限,终产生不可逆转的DNA损伤而导致肿瘤细胞死亡.本文综述了各种DNA修复抑制剂的临床研究现状,并概述了筛选疗效预测标志物的必要性及探索新的联合治疗策略的可行性.
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亚砷酸钠对DNA损伤修复的抑制实验
[目的]探讨砷化物的毒作用机制. [方法]MTT实验检测亚砷酸钠对A549细胞的细胞毒性,彗星实验观察其单独作用时细胞的DNA损伤效应;然后以3因素析因设计的彗星实验分析亚砷酸钠对苯并(a)芘(BaP)所致的DNA损伤效应的影响. [结果]随着亚砷酸钠浓度的增加,细胞存活率下降;在彗星实验中,当亚砷酸钠单独作用时,各浓度组细胞拖尾率与阴性对照组相比无统计学差异;联合BaP染毒,当BaP浓度一定时,亚砷酸钠浓度越高细胞拖尾率也越高,显著增强了BaP所致的DNA损伤效应.且亚砷酸钠预作用24 h后观察到的DNA损伤较同时染毒和BaP预作用24 h观察到的DNA损伤更为严重. [结论]亚砷酸钠不直接损伤DNA,能降低细胞DNA损伤的修复,从而增强另一种基因毒物所致的DNA损伤作用.
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PARP抑制剂治疗卵巢上皮性癌的研究进展
卵巢上皮性癌是病死率高的妇科恶性肿瘤.目前采用的铂类和紫杉烷类联合化疗方案仍不能避免大多数患者的复发.新近发现的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Poly-ADP Ribose Polymerase,PARP)在DNA修复通路中起着关键作用.PARP抑制剂作为一种DNA修复酶抑制剂,可通过靶向阻断肿瘤细胞DNA修复途径发挥抗肿瘤作用.
关键词： 卵巢上皮性癌 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂 DNA损伤修复 -
双功能基因APE1对多发性骨髓瘤疗效的影响
目的探讨MM细胞APE1基因表达及定位对MM疗效的影响.方法采用双标免疫荧光结合激光共聚焦显微镜和免疫细胞化学分析MM细胞系KM3,并在32例MM患者和10例正常自愿者骨髓标本中检测APE1蛋白表达及定位.结果 MM患者骨髓标本有APE1和CD38蛋白共表达;在作为阳性对照的MM细胞系KM3中胞核、胞核/胞浆、胞浆均有APE1表达,其中尤以胞核明显;APE1胞浆阳性分度在正常对照组、初治组、复发或难治组间依次增高(P＜0.01或0.05).结论 APE1蛋白表达强度与MM疗效有关,APE1基因表达增强可能是MM患者预后不良的指标之一.
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Rad9、Rad1、Hus1与肿瘤发生的研究进展
基因的稳定性对维持机体的正常生长具有重要作用.DNA随时面临损伤因子的威胁,一旦DNA发生不可逆损伤将会导致基因的不稳定,甚至诱发肿瘤形成.但机体具有DNA损伤修复、细胞凋亡调控系统可以及时修复损伤的DNA以维持基因的稳定性.有研究表明Rad9、Rad1、Hus1基因参与DNA的损伤修复和细胞凋亡并与肿瘤的发生、发展有明确关系.本文将对目前Rad9、Rad1、Hus1基因的研究以及与肿瘤发生的关系进行综述.
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辐射损伤修复应答与放射增敏
DNA分子是生命体的重要遗传物质,也是辐射损伤的关键靶分子.近年来研究发现电离辐射引起DNA损伤后,机体通过激活DNA损伤应答激酶ATM(Ataxia telangiectasia mutated protein kinase)、ATR(ATM Rad3 related protein kinase)、DNA-PK(DNA-activated protein kinase)启动细胞内一系列应答反应(阻滞细胞周期或直接激活DNA修复),此为影响细胞辐射敏感性的重要因素[1].
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EGFR核转位与DNA损伤修复研究进展
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在许多人类恶性肿瘤中过表达或突变,参与肿瘤发生和恶性转变过程,是目前分子靶向治疗的热点。多种肿瘤组织细胞核内发现高水平的 EGFR 表达,并且已经证实核EGFR 的高表达与患者总体生存率、无病生存率负相关[1]。核EGFR 在肿瘤的形成、发展、转移及治疗耐受中发挥着重要的生物学功能,特别是核EGFR 能促进细胞生成和 DNA 损伤修复[2]。因此,核EGFR 与DNA 之间的相互关系值得深入研究。本文将综述EGFR 核转位通路及其与DNA 损伤修复的关系,并分析核EGFR 潜在的分子治疗靶点。
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DNA损伤修复与肺癌顺铂耐药机制的研究进展
肺癌是目前世界上致死率高的恶性肿瘤,化疗是治疗的主要手段之一,肺癌的化疗是以铂类为基础的联合化疗,其中,顺铂是有效并广泛应用的一线药物,但是由于耐药问题的存在使其疗效不尽如人意.顺铂是一种细胞周期非特异性细胞毒药物,其主要作用靶点是DNA,因此DNA损伤修复功能的异常是顺铂耐药的主要机制之一.本文主要综述了与肺癌顺铂耐药相关的DNA损伤修复异常,包括核苷酸切除修复异常、碱基错配修复异常、DNA双链断裂损伤修复异常及跨损伤修复.
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自噬对人肺腺癌A549细胞放疗敏感性的影响
背景与目的放射治疗是肺癌重要的治疗手段之一，然而却因放疗抵抗极易导致肿瘤的复发和转移。放疗可诱导肿瘤细胞自噬发生，新研究也报道，自噬可能与DNA损伤修复过程相关。本研究旨在探讨通过雷帕霉素上调A549细胞自噬，能否增加细胞放疗敏感性，其过程是否与DNA损伤修复过程相关。方法以人肺腺癌A549细胞作为实验对象，实验设对照组（N）、单纯放疗组（IR）、雷帕霉素联合放疗组（R+ARPA）。采用Western blot检测γ-H2AX蛋白质、Rad51蛋白质、Ku70/80蛋白质、p62蛋白质、LC3蛋白质表达；电镜检测自噬体形成；细胞克隆形成实验检测细胞存活分数（survival fraction, SF）值。结果与单纯放疗组相比，放疗联合雷帕霉素组自噬活性增加，且Rad51、Ku80蛋白质表达减少，细胞增殖能力下降。结论通过雷帕霉素上调自噬可增加肺癌细胞放疗敏感性，其机制可能与抑制DNA损伤修复过程相关。
