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养肝澳平合剂对肝纤维化模型大鼠的实验研究
目的 探讨养肝澳平合剂(YGAPM)对肝纤维化模型大鼠的影响及机制.方法 将78只SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、肝纤维化模型组(B组)、YGAPM高剂量组(C组)、YGAPM中剂量组(D组)、YGAPM低剂量组(E组)、秋水仙碱组(F组).B、C、D、E、F组用CCl4/橄榄油腹腔注射法制备肝纤维化大鼠模型,在造模成功后,C、D、E组灌胃不同剂量的YGAPM,F组灌胃秋水仙碱,药物干预8周后采集血清及肝组织.采用生化方法测定大鼠肝功能、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)含量.免疫荧光法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),转化生长因子β1(TGF-β1).蛋白质印迹法检测TGF-31、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达.结果 与B组比较,各药物干预组肝功能水平均下降(P＜0.01),C组肝功能各指标下降显著(P＜0.01),与F组比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05);药物干预各组肝脏组织MDA、HYP含量明显降低(P＜0.01),而SOD含量明显上升(P＜0.01),C组较F组有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).与A组比较,B组肝组织纤维化面积比例、α-SMA、TGF-β1、TIMP-1表达显著升高(P＜0.01),各药物干预组表达均显著下降(P＜0.01).结论 YGAPM能剂量依赖地降低肝脏损伤,改善肝纤维化,机制可能是通过抗炎、抗脂质过氧化从而减少肝细胞损伤,间接降低胶原蛋白含量;并通过直接或间接抑制肝星状细胞(HSC)活化过程中的TGF-β1信号通路,逆转肝纤维化.
关键词： 养肝澳平合剂 肝纤维化 转化生长因子β1 基质金属蛋白酶抑制剂-1 -
组分复方“CKJ”药物血清对大鼠原代肝星状细胞活化和转化生长因子β1及其受体的影响
目的 探讨由虫草多糖、苦杏仁苷、绞股蓝总皂苷组成的“CKJ方”药物血清对大鼠原代肝星状细胞(primary hepatic stellate cells,rHSCs)活化的影响及相关药理作用机制.方法 分离并培养rHSCs,将培养4天的rHSCs分为正常组、模型组及CKJ组.模型组及CKJ组以2.5 ng/mL转化生长因子β1 (TGF-β1)刺激造模24 h,正常组以不合TGF-β1的基质液(无血清的DMEM)作为对照.药物组以5％CKJ方药物血清继续孵育24 h,正常组及模型组以5％空白血清孵育24 h.采用细胞高内涵筛选技术(HCS)免疫荧光法及Western blot检测rHSCs α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、血小板源性生长因子β受体(PDGF-βR)、TGF-β1、转化生长因子β受体1(TGF-βR1)、转化生长因子β受体2(TGF-βR2)mRNA的表达水平.结果 与正常组比较,模型组rHSCs α-SMA蛋白表达及α-SMA、Col-Ⅰ、PDGF-βR、TGF-f1、TGF-βR1、TGF-βR2mRNA表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,5％ CKJ药物血清组rHSCs α-SMA蛋白表达及α-SMA、Col-Ⅰ、PDGF-βR、TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 组分复方“CKJ”药物血清可降低大鼠rHSCs α-SMA的蛋白表达,其主要作用机理可能与抑制TGF-β1及其相关受体有关.
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养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠血浆AngⅡ、TGF-β1、CTGF含量和肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGF mRNA表达的影响
目的 观察养肝益水颗粒对12周龄自发性高血压大鼠(SHR)血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子β1( TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)含量和肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGF mRNA表达的影响,以进一步探讨养肝益水颗粒发挥肾脏保护的可能作用机制.方法 将40只12周龄雄性SHR大鼠随机分为模型组、贝拉普利组[ 1.8 mg/( kg·d)]、养肝益水颗粒低剂量组[5.4 g/(kg·d),简称低剂量组]、养肝益水颗粒高剂量组[27 g/(kg·d),简称高剂量组],每组10只；并设Wistar-Kyoto大鼠(WKY)10只作为正常对照组；模型组和正常对照组给予等量生理盐水灌胃,每天1次,共6周.检测各组大鼠血浆AngⅡ、TGF-β1、CTGF浓度和肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGF mRNA的表达.结果 模型组,低、高剂量组血浆AngⅡ、TGF-β1、CTGF含量显著高于正常对照组(P＜0.01),贝拉普利组与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；贝拉普利组与高剂量组血浆AngⅡ、TGF-p1、CTGF含量显著低于模型组(P＜0.01,P＜0.05),低剂量组与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；贝拉普利组及高、低剂量组肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGF mRNA的表达显著低于模型组(P ＜0.01,P＜0.05)；高剂量组优于贝拉普利组和低剂量组(P＜0.01,P＜0.05).结论 养肝益水颗粒主要通过降低肾脏局部AngⅡ、TGF-β1及CTGF的表达而发挥肾脏保护作用.
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贞清方与地龙对2型糖尿病大鼠肾组织TGF-β1及PAI-1表达的影响
目的 研究中药复方贞清方和方中的地龙对糖尿病大鼠肾组织转化生长因子β1 (TGF-β1)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达的影响.方法 通过高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为:模型组、贞清方组和地龙组,并设立正常对照组,每组10只.贞清方组给予贞清方提取液24 g/(kg·d)灌胃,地龙组给予地龙提取液2.6 g/(kg·d)灌胃,正常对照组及模型组给予等体积蒸馏水灌胃,均每天1次,连续治疗8周.观察大鼠空腹血糖(FBG)、血清PAI-1、24 h尿微量白蛋白(UAE)和内生肌酐清除率(CCr);过碘酸雪夫(PAS)染色后光镜下观察肾组织结构变化,并通过免疫组化法分析TGF-β1、PAI-1的表达;利用RT-PCR和Western blot分别检测肾皮质TGF-β1、PAI-1 mRNA和蛋白表达水平.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠FBG、血清PAI-1、UAE、TGF-β1和PAI-1 mRNA及蛋白表达均明显升高,CCr明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).与模型组比较,贞清方组FBG、血清PAI-1、UAE均明显下降(P<0.01),CCr明显升高(P<0.05);地龙组FBG无明显降低,血清PAI-1、UAE均下降(P<0.05,P<0.01),CCr升高(P<0.05);贞清方组优于地龙组.贞清方组和地龙组肾组织病理学变化程度减轻.贞清方组和地龙组TGF-β1和PAI-1 mRNA及蛋白表达较模型组降低(P<0.05,P<0.01),以贞清方组更显著.结论 贞清方和地龙在2型糖尿病大鼠肾病早期应用可保护肾脏,其机制可能与抑制TGF-β1表达,导致PAI-1表达下调有关.贞清方的作用强于单味药地龙.
关键词： 贞清方 地龙 糖尿病肾病 转化生长因子β1 纤溶酶原激活物抑制剂-1 -
丹参酮ⅡA对高血压大鼠肥厚心肌TGF-β1/Smads信号通路的影响
目的 研究丹参酮(Tanshinone,TSN)ⅡA对压力超负荷大鼠肥厚心肌血管紧张素1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与其胞内信号蛋白Smads基因表达的影响,探讨TSN ⅡA抑制高血压左心室肥厚的分子机制.方法 SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为模型组、丹参酮低、高剂量组[10、20 mg/(kg·d)]、缬沙坦组[10 mg/(kg·d)],每组8只;另有8只作为假手术组.用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)、病理切片HE染色测量心肌纤维直径(myocardial fiber dimension,MFD);采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain raction,RT-PCR)检测AT1R mRNA的表达水平,免疫印迹法(Western blot)分别检测TGF-β1及其胞内信号蛋白Smad-3、4、7的蛋白水平.结果 (1)丹参酮低、高剂量组血压没有变化,并显著高于假手术组和缬沙坦组(P<0.01).(2)丹参酮低、高剂量组和缬沙坦组的LVMI、MFD均显著低于模型组(P<0.01).(3)心肌肥厚时AT1R、TGF-β1和Smad-3的表达显著增加(P<0.01),高剂量TSNⅡ A和缬沙坦都可使肥厚心肌的AT1R mRNA和TGF-β1、Smad-3蛋白水平明显下调(P<0.01),缬沙坦对TGF-β1的下调作用较丹参酮明显(P<0.05).(4)低、高剂量的丹参酮和缬沙坦均可以使Smad-7蛋白的表达显著上调(P<0.01).丹参酮高剂量组上调作用明显超过缬沙坦组(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA对心肌肥厚的抑制作用是非血压依赖性的,其对高血压心肌肥厚的抑制作用可能与抑制AT1R mRNA表达、阻滞TGF-β1/Smads的信号转导有关.
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排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的影响
目的 观察排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的疗效并探讨其作用机制.方法 将50只SD雄性健康大鼠按1:1:3比例随机分为正常组(10只)、假手术组(10只)、造模组(30只),假手术组只分离肾包膜不行肾切除,造模组建立5/6肾切除模型.收集大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h urinary protein,24h UP);采血检测血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(serum creatinine,SCr).根据血SCr水平再将30只造模组大鼠随机分为模型组、排毒保肾丸组、尿毒清颗粒组,每组10只.排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组分别予排毒保肾丸[1.0 g/(kg·d)]和尿毒清颗粒[3.33 g/(kg ·d)]溶于蒸馏水中灌胃,正常组、假手术组、模型组均予2mL蒸馏水灌胃.均每日1次,共给药4周.观察给药过程中大鼠精神状态、活动度、体毛色泽、大便形状等一般情况和体重的变化.4周后收集大鼠24 h尿液,检测24 h UP;采血检测BUN、SCr、转化生长因子β1(transforming growth fator-β1,TGF-β1)、Ⅲ型前胶原(procollagen type Ⅲ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,ColⅣ)、层粘连蛋白(laminin,LN)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN);处死大鼠,取左侧残余肾组织行病理检查,免疫组织化学法检测肾组织TGF-β1、FN蛋白表达量,实时荧光定量PCR检测肾组织TGF-β1、FN mRNA表达.结果 与正常组比较,假手术组大鼠上述观察指标差异无统计学意义(P＞0.05);与假手术组比较,模型组大鼠一般情况较差,体重增长缓慢,24 h UP增加(P＜0.01),血清BUN、SCr、TGF-β1、PCⅢ、ColⅣ、LN、FN升高(P＜0.01),残肾病变重,肾组织TGF-β1、FN蛋白及TGF-β1、FN mRNA表达增加(P＜0.01);与模型组比较,排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组大鼠一般情况较好,体重增长较快,血BUN、SCr下降(P＜0.01),24 h UP减少(P＜0.05),血TGF-β1、PCⅢ、ColⅣ、LN、FN降低(P ＜0.05,P＜0.01),残肾病变轻于模型组,肾组织TGF-β1、FN蛋白及TGF-β1、FN mRNA表达减少(P＜0.01);与尿毒清颗粒组比较,排毒保肾丸组血SCr、FN及肾组织FN蛋白及FN mRNA表达降低(P＜0.05).结论 排毒保肾丸具有抗5/6肾切除大鼠肾纤维化的作用,通过基因转录和蛋白翻译两个水平下调TGF-β1、FN的表达是其作用机制之一.
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大黄素对急性胰腺炎胰腺组织TGFβ1表达的影响
目的：通过分析中药大黄素对大鼠急性胰腺炎治疗前后胰腺组织细胞转化因子β1(TGFβ1)的表达、DNA合成及总蛋白含量的影响，从胰腺再生角度探讨大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制。方法：以雨蛙肽(caerulein)腹腔注射诱导大鼠急性胰腺炎模型，并于大黄素治疗前后6、24、48、72及96h处死大鼠。同时应用RT-PCR技术检测治疗前后胰腺组织TGFβ1 mRNA表达，同位素体外掺入法测定胰腺组织DNA合成以及Lowry′s法测定胰腺组织总蛋白含量。结果：大黄素治疗后血清淀粉酶显著下降。正常胰腺组织、胰腺炎诱导后6h未见TGFβ1 mRNA表达。TGFβ1 24h后出现表达，72h时达高峰。大黄素治疗后6h即可检测到TGFβ1 mRNA表达，且24、48h时表达均较非治疗组显著增强，并于48h时达大值。同时胰腺炎诱导后72h，胰腺组织DNA合成显著下降，大黄素治疗后96h DNA合成明显增加，胰腺炎诱导后48h胰腺组织总蛋白含量下降，大黄素治疗后96h显著增加。结论：大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制可能是通过诱导细胞因子TGFβ1基因表达增强，调控细胞增殖和分化，刺激多种细胞外基质成分合成，增加胰组织DNA合成和蛋白含量，参与胰腺细胞修复、再塑过程。
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益气降浊汤对CVB3m重复感染致病毒性心肌炎小鼠TGF-β1 mRNA表达的影响
目的探讨益气降浊汤对病毒性心肌炎转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的影响.方法建立慢性病毒性心肌炎模型,通过4次梯度倍增CVB3m病毒感染小鼠,160只雄性昆明鼠分成空白组、模型组、中药治疗组、西药治疗组,分别于末次感染后10、30、60天处死小鼠,采用HE染色观察心肌病变,采用半定量RT-PCR法检测心肌组织中TGF-β1mRNA表达情况.结果HE染色显示各治疗组比模型组心肌病变明显减轻(P＜0.05),且TGF-β1 mRNA面积较模型组减少(P＜0.05).结论益气降浊汤能通过下调TGF-β1 mRNA表达,抑制心肌间质细胞外基质(ECM)的增生和重建,改善心脏病理变化,防止心肌炎后心室重构及向扩张型心肌病转化.
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丹参酚酸B对转化生长因子β1和血小板衍生生长因子-BB在肝星状细胞内信号传导的影响
目的探讨丹参酚酸B(SA-B)抗肝纤维化作用机制.方法分离大鼠肝星状细胞(HSC),于无包被塑料培养皿中原代培养7天,继以10-6mmol/L SA-B孵育,再加10 ng/ml的转化生长因子β1(TGF-β1)或血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激.以Western blot法观察SA-B对TGF-β1或PDGF-BB刺激的HSC内ERK蛋白及其磷酸化表达的影响及对TGF-β1或PDGF-BB刺激的HSC表面TGF-β1Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)或PDGF受体β(PDGFR-β)表达的影响.结果SA-B可抑制原代正常培养9天的HSC及TGF-β1刺激的HSC中ERK1/2的磷酸化;对正常培养的HSC和TGF-β1刺激的HSC表面TβRⅠ和TβRⅡ的表达无明显影响.SA-B抑制原代正常培养9天的HSC和经PDGF-BB刺激的HSC中PDGFR-β的表达,但对PDGF-BB刺激的HSC中ERK1/2磷酸化没有明显作用.结论SA-B抑制TGF-β1诱导的HSC内ERK信号传导通路.这一抑制作用与HSC上TβR的表达无关,也与PDGF-BB在HSC内的ERK信号传导通路无关.SA-B对PDGF-BB在HSC内的信号传导通路的抑制作用在于抑制了HSC上PDGF受体的表达.
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化纤汤治疗博莱霉素致小鼠肺纤维化实验研究
目的 研究中药化纤汤对博莱霉素致肺纤维化小鼠的防治作用,并与丹参及地塞米松治疗进行对照,从而探讨中药治疗肺纤维化的临床价值及可能的作用机制.方法 6～8周龄雄性ICR小鼠分8组,模型组(BM组)经鼻滴入博莱霉素(BLM)5 mg/kg建立肺间质纤维化模型,化纤汤预防治疗组(PHT组)于滴入BLM前48 h予化纤汤灌胃,化纤汤治疗组(HT组)于滴入BLM后第14天用化纤汤灌胃,同时设立丹参预防治疗组(PDST组)及丹参治疗组(DST组),地塞米松预防治疗组(PDT组)及地塞米松治疗组(DT组),并与正常小鼠(NC组)进行对照.第28天收获其支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,右肺行苏木精-伊红(HE)和Masson三色染色,并观察电镜下细胞超微结构的改变,左肺经酸解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中转化生长因子β1(TGF-β1)的浓度.结果 各药物干预组与BM组比较,小鼠肺系数明显下降(P＜0.05);肺泡炎、纤维化程度均有改善(P＜0.05),其中化纤汤预防治疗组改善明显;肺HYP含量下降(P＜0.05);BALF中TGF-β1含量亦明显下降.结论 早期应用化纤汤可以在某种程度上减轻BLM诱导的肺泡炎及肺纤维化程度,提示益气活血中药对肺纤维化有一定预防作用;抑制TGF-β1在肺组织中的表达可能是其作用机制之一.
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灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化的影响
目的 观察灯盏细辛注射液对大鼠肾问质纤维化的改善作用并探讨其机制.方法 采用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型为研究对象.36只SD大鼠随机分为对照组、UUO模型组(模型组)和灯盏细辛治疗组(治疗组).治疗组每天给予灯盏细辛注射液[5 mL/(kg·d)]腹腔注射治疗,由术前24 h始至术后第9天止;术后第10天取术侧肾脏组织,常规石蜡包埋切片,HE、PAS和苦味酸一天狼星红染色,光镜下观察大鼠肾小管间质病理改变、肾脏皮质相对间质客积和相对胶原含量的变化;免疫组织化学方法检测肾脏转化生长因子B1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的表达.结果 模型组和治疗组均出现明显的肾间质纤维化病理改变,但治疗组病变程度相对较轻.肾皮质相对间质容积和相对胶原含量模型组及治疗组明显高于对照组,但治疗组明显少于模型组(p＜0.01).免疫组化染色显示:TGF-β1、α-SMA和Ⅰ型胶原表达模型组和治疗组明显多于对照组,但治疗组较模型组明显减少(P＜0.05).结论 灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化具有显著的改善作用,这种作用可能是通过抑制TGF-β1表达,阻止肾小管上皮细胞转分化,减少Ⅰ型胶原合成实现的.
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硫化氢对大鼠肝纤维化的抑制作用及机制研究
目的:探讨硫化氢对大鼠肝纤维化的抑制作用及作用机制.方法:选取27只雄性大鼠,将其随机分为三组,分别是对照组、空白对照组、观察组,每组9只.对对照组的大鼠腹腔注射四氯化碳,诱导大鼠肝纤维化;对观察组大鼠腹腔实施40%四氯化碳的基础上,还要在其腹腔注射硫化氢钠,每天注射1次,注射8周后停止.在实验结束后,检测大鼠的肝功能和纤维化指标数值,观察肝组织病理学变化,应用RT-PCR和Western印迹法检测肝组织转化生长因子TGF-β1的表达.结果:与对照组相比较,观察组能降低血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转酶(AST)及透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、三星前胶原(PC)水平,升高白蛋白(ALB),改善肝功能等,大鼠整体的肝组织病理明显改善.结论:硫化氢对控制肝纤维化有非常好的效果,并且也能减少细胞外基质在肝脏中的沉积,能够对肝纤维化的进程有显著的延缓作用.
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益肾化瘀方对单侧输尿管结扎大鼠转化生长因子β1、Smad7信号蛋白表达的影响
目的 探讨益肾化瘀方抗肾间质纤维化的可能作用机制.方法 108只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组和益肾化瘀方高、中、低剂量组,每组18只.除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管结扎方法建立肾间质纤维化模型,造模次日益肾化瘀方高、中、低剂量组分别予益肾化瘀方浓缩液32、16、8g/(kg·d)灌胃,缬沙坦组予缬沙坦溶液13.3mg/ (kg· d)灌胃,假手术组、模型组予生理盐水20ml/ (kg·d)灌胃,各组均连续灌胃28天.分别于造模后第7、14、28天观察大鼠肾组织病理改变,计算肾间质纤维化面积,检测大鼠肾组织中转化生长因子β1 (TGF-β1)、Smad7信号蛋白的表达.结果 模型组大鼠出现肾间质炎细胞浸润和梭形核细胞增生,伴局灶性肾间质纤维化,各治疗组肾脏病理表现均有不同程度的减轻,其中益肾化瘀方高剂量组病理改变与缬沙坦组相当.与同时间点假手术组比较,其余各组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1升高,Smad7信号蛋白减少(P＜0.01);与同时间点模型组比较,除益肾化瘀方低剂量组外,其余各治疗组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1降低,Smad7信号蛋白增加(P＜0.05或P＜0.01),并且以益肾化瘀方高剂量组和缬沙坦组改善明显(P＜0.05).结论 益肾化瘀方可能通过抑制大鼠肾组织中TGF-β1的高表达,上调Smad7的表达,从而减轻肾间质纤维化.
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穴位贴敷对过敏性哮喘大鼠血清转化生长因子β1和尾加压素Ⅱ的影响
目的 探讨穴位贴敷治疗过敏性哮喘的可能作用机制.方法 将40只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、贴敷2h组、贴敷4h组,每组10只.除空白组外,其余各组大鼠用鸡卵白蛋白(OVA)和生理盐水的混悬液皮下多点注射及雾化吸入致敏制造过敏性哮喘模型.造模结束后第15天起,空白组和模型组正常饲养;贴敷2h组、贴敷4h组于大鼠肺俞、脾俞、肾俞穴位贴敷,分别贴敷2h、4h,隔天1次,共贴7次.观察各组大鼠引喘潜伏期和发作总持续时间;ELISA法检测大鼠血清中转化生长因子β1(TGF-β1)和尾加压素Ⅱ(UⅡ)含量;HE染色观察大鼠支气管和肺组织病理结构改变. 结果 与模型组比较,贴敷2h、4h组引喘潜伏期延长、发作总持续时间缩短,血清TGF-β1和UⅡ水平明显降低(P＜0.01);支气管和肺组织结构不清,支气管黏膜水肿、充血及气道壁增厚等改变显著改善.贴敷4h组与贴敷2h组相比,引喘潜伏期、发作总持续时间、血清TGF-β1与UⅡ差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 穴位贴敷能降低血清TGF-β1和UⅡ含量,从而改善气道重塑,可能是其治疗过敏性哮喘的机制之一.
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胃炎饮方对胃溃疡大鼠表皮生长因子和转化生长因子β1表达的影响
目的 从调节表皮生长因子(EGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的角度探讨胃炎饮方促进胃溃疡愈合的分子机制.方法 50只Wistar大鼠随机抽取8只作为假手术组,其余42只采用冰醋酸腐蚀法建立胃溃疡大鼠模型.将造模成功的32只分为模型组、胃高组、胃低组、对照组,每组8只.胃高组、胃低组分别灌服生药浓度为2.14、1.07 g/ml胃炎饮煎剂10 ml/kg,对照组灌服浓度为0.368 mg/ml的奥美拉唑液10 ml/kg.各给药组从造模术后第3天开始灌胃,假手术组、模型组灌胃等量生理盐水,每日1次,共14天.双抗体夹心ABC-ELISA法检测各组大鼠EGF、TGF-β1水平,免疫组化方法检测各组大鼠EGF、TGF-β1表达,RT-PCR方法检测各组大鼠EGF mRNA、TGF-β1mRNA的表达. 结果 与假手术组比较,模型组大鼠胃组织EGF、TGF-β1水平显著升高,平均光度值显著升高,而平均灰度值显著下降,EGF mRNA、TGF-β1mRNA表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,各治疗组EGF、TGF-β1水平及平均光度值显著升高,平均灰度值显著下降,EGF mRNA、TGF-β1mRNA表达显著升高,溃疡面积均明显缩小(P ＜0.05或P＜0.01);与对照组和胃低组比较,胃高组EGF、TGF-β1水平及平均光度值显著升高(P＜0.05或P＜0.01),EGF mRNA、TGF-β1 mRNA表达及溃疡面积差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01). 结论 胃炎饮可促进胃溃疡大鼠胃组织EGF和TGF-β1表达,加强胃黏膜修复,可能是提高溃疡愈合的可能机制.
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排毒保肾丸对肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smad信号通路的影响
目的 观察排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的影响并探讨其可能作用机制.方法 将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、排毒保肾丸组、尿毒清颗粒组,每组10只.除正常组、假手术组外,其余各组大鼠均采用5/6肾切除方法建立肾纤维化模型.排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组分别予排毒保肾丸1.0g/(kg·d)和尿毒清颗粒3.33g/(kg·d)灌胃,正常组、假手术组、模型组予2ml生理盐水灌胃,每日1次.各组均灌胃4周后处死大鼠,取残肾组织行HE、PAS、PASM、Masson染色病理观察,检测肾组织转化生长因子β1 (TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白及其mRNA的表达水平.结果 病理结果显示,模型组大鼠局灶节段性肾小球缺血性皱缩,较多炎性细胞浸润伴轻至中度纤维化;与模型组比较,排毒保肾丸组残肾组织病变程度减轻.与正常组、假手术组比较,模型组大鼠TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著升高,Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著下降(P＜0.01);与模型组比较,排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著降低,而Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著升高(P＜0.01).结论 排毒保肾丸有抗肾纤维化的作用,下调肾组织TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达可能是其作用机制之一.
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芪丹利心丸对心肌梗死大鼠左心室心肌组织miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路的影响
目的 探讨芪丹利心丸防治心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制. 方法 采用左冠状动脉结扎术建立心肌梗死大鼠模型,随机分为模型组、卡托普利组和芪丹利心丸组,另设假手术组只穿线不结扎,每组10只.术后第2天,芪丹利心丸组给予芪丹利心丸2.43 g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利片2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予去离子水10 ml/(kg·d)灌胃.4周后检测各组心脏血流动力学指标[包括心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压大上升速率(+ dp/dt max)、左心室内压大下降速率(-dp/dt max)],称取左心室重量(LVM)并计算左心室质量指数(LVMI),HE染色进行病理学观察,Masson染色计算胶原容积分数(CVF),检测左心室心肌组织miR-133a、转化生长因子β1 (TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF) mRNA及TGF-β1、CTGF蛋白表达情况.结果 与假手术组比较,模型组LVSP、+dp/dt max,-dp/dt max下降,LVEDP升高,LVMI、CVF增大,miR-133a下调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达增多(P＜0.01).与模型组比较,芪丹利心丸组LVSP、+ dp/dt max,-dp/dt max上升,LVEDP降低,LVMI、CVF减小,miR-133a上调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达减少(P＜0.05或P＜0.01).HE染色显示,模型组见梗死边缘区残存的心肌纤维混乱、部分断裂,肌间隙增宽明显,而卡托普利组和芪丹利心丸组心肌梗死边缘区心肌纤维走形相对规整,多数胞膜基本完整.结论 芪丹利心丸可防治心肌梗死大鼠心肌纤维化,其机制可能与miR-133 a/TGF-β1/CTGF信号通路有关.
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养阴清肺方含药血清对60Co照射后肺成纤维细胞转化生长因子β1及α-肌动蛋白表达的影响
目的 探讨养阴清肺方治疗放射性肺纤维化的可能作用机制. 方法 将20只大鼠随机分为养阴清肺组[予养阴清肺方浓缩液(浓度0.97 g/ml)1 ml/100 g]、激素组[予醋酸泼尼松龙片水溶液(浓度0.125g/ml)1 ml/100g]、养阴清肺加激素组(养阴清肺方浓缩液、醋酸泼尼松龙片水溶液各0.5ml/100g)、模型组和未照射对照组(均给予生理盐水1 ml/100 g),每天早晚各灌胃1次,连续3天,第4天早上给药1h后经腹主动脉取血制备含药血清.取人胚肺成纤维细胞接种于6孔板内,分为未照射对照组、模型组、养阴清肺组、激素组、养阴清肺加激素组,除未照射对照组外其余各组用钴60射线照射,剂量为8Gy.照射后将各组上清液吸弃,并分别换上相应的含药血清培养液,于24、48、72h检测转化生长因子β1(TGF-β1)含量.细胞培养同前,于照射后24h检测肺成纤维细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的表达. 结果 模型组、养阴清肺组、激素组、养阴清肺加激素组在各个时间点比较TGF-β1表达水平均较未照射对照组显著升高(P＜0.05).在24h时激素组、养阴清肺加激素组TGF-β1表达水平较模型组降低,在48h时养阴清肺组、养阴清肺加激素组TGF-β1表达水平较模型组降低,72 h时养阴清肺组、激素组TGF-β1表达水平较模型组降低(P＜0.05).与模型组比较,激素组、养阴清肺组、养阴清肺加激素组α-SMA表达均明显降低(P＜0.05);并且养阴清肺加激素组α-SMA表达明显低于养阴清肺组和激素组(P＜0.05). 结论 养阴清肺方能抑制照射后肺成纤维细胞分泌TGF-β1和α-SMA表达,可能是其治疗放射性肺纤维化的作用机制之一.
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降糖三黄片对糖尿病肾病大鼠肾组织蛋白激酶C和转化生长因子β1的影响
目的 观察降糖三黄片对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中蛋白激酶C(PKC)和转化生长因子β1(TGF β1)的影响及其对肾脏的保护作用.方法 将49只Wistar大鼠随机分为正常组10只,造模组39只.采用高脂饲料加链脲佐菌素腹腔注射复制DN大鼠模型,34只造模成功大鼠分为模型组10只,中药组和西药组各12只.中药组给予降糖三黄片[787.5mg/(kg·d)],西药组给予卡托普利片[4mg/(kg·d)],正常组及模型组灌服等量蒸馏水,各组均连续灌胃8周.实验末腹主动脉采血检测各组大鼠血糖、血脂、胆固醇和胰岛素水平；治疗第4、8周测24h尿蛋白总量；摘取右侧肾脏称重并计算肾质量系数；免疫组织化学检测肾组织TGFβ1水平和PKC活性.结果 中药组血糖、血脂、胰岛素水平下降,胰岛素敏感指数上升,与模型组及西药组比较差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).中药组肾质量系数低于模型组(P＜0.05),中药组和西药组尿蛋白总量均较模型组减少(P＜0.01);中药组肾质量系数、尿蛋白总量与西药组比较差异均无统计学意义.中药组、西药组大鼠TGF-β1、PKC表达明显低于模型组(P＜0.01),西药组略低于中药组但两组比较差异无统计学意义.结论 降糖三黄片可抑制DN大鼠肾组织中PKC活性.下调TGF-β1水平,使细胞外基质合成减少,起到保护肾组织、推迟肾纤维化的作用.
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瘫痿胶囊对自身免疫性重症肌无力小鼠血清白细胞介素4及转化生长因子β1的影响
目的 观察瘫痿胶囊对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用机制. 方法 以乙酰胆碱受体α1肽(AChR α1肽)多点注射法制备EAMG模型小鼠.将造模成功的58只健康雌性C57BL/6小鼠随机分为7组:模型组,瘫痿胶囊低、中、高剂量组,强的松组及正常组、佐剂组,观察其症状变化,检测其血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素4(IL-4)水平.结果 4周后,与模型组比较,瘫痿胶囊高中剂量组及强的松组临床症状评分减少(P＜0.01),AChR-Ab降低(P＜0.01),TGF-β1升高(P＜0.05),IL-4降低(P＜0.05).结论 瘫痿胶囊治疗EAMG的机制可能足通过升高外周血TGF-β1水平、降低IL-4,抑制AChR-Ab的产生,从而改善临床症状.
