首页 > 文献资料
-
UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分
目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分(毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1)的方法.方法 采用正负离子切换多反应监测模式(MRM),ESI离子源;Phenomenex C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm)进行分离,流动相为甲醇(A)、乙腈(B)、5 mmol/L乙酸铵-0.05 mmol/L乙酸钠水溶液?,梯度洗脱,分析时间为7.0 min.结果 所测11种主要有效成分在测定浓度范围内线性关系良好,r均大于0.99;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为95.2％～104.4％,RSD≤4.64％.4个批次康艾注射液中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1测得量分别为0.004～0.006 μg/mL、0.002～0.003 μg/mL、125.75～148.00 μμg/mL、51.75～77.00 μg/mL、0.010～0.013 μμg/mL、51.50～87.75 μg/mL、27.83～30.73μg/mL、4.23～5.15 μg/mL、8.40～13.35 μg/mL、17.33～27.68 μg/mL和9.03～11.00 μg/mL.结论 首次建立可同时测定康艾注射液的11种主要成分的UPLC-MS/MS方法,该法操作简便,灵敏度高,专属性好,分析速度快,可用于康艾注射液的质量控制.
-
HPLC-MS/MS法同时测定脑复清胶囊中11种成分
目的 建立一种高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)分析方法,可同时测定脑复清胶囊中刺五加苷E、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)、异嗪皮啶、迷迭香酸、三七皂苷R1、丹酚酸B、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd和大黄素共11种成分的含量.方法 采用Agilent Poroshell 120 EC-C18 (75 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱,以0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温35℃.质谱采用负离子多反应监测模式进行检测.结果 11个成分在各自浓度范围内线性关系良好(r＞0.996),刺五加苷E、二苯乙烯苷、异嗪皮啶、迷迭香酸、三七皂苷R1、丹酚酸B、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、大黄素的加样回收率分别为106.4％、104.2％、99.9％、102.3％、104.1％、98.3％、108.9％、103.6％、105.8％、101.9％、104.2％;11种成分在10批样品中的质量分数分别为0.274～0.310 mg/g、1.579～1.642 mg/g、0.093～0.099 mg/g、0.331～0.352 mg/g、1.115～1.229 mg/g、1.663～1.870 mg/g、4.884～5.173 mg/g、0.691～0.762 mg/g、2.974～3.358 mg/g、1.053～1.493 mg/g、0.100～0.115 mg/g.结论 所建立的方法灵敏度高,稳定快速,适用于同时测定脑复清胶囊中11个成分的含量,可以用于该产品质量控制.
-
熟三七饮片HPLC指纹图谱的建立及多成分定量测定
目的 建立不同产地熟三七饮片的HPLC指纹图谱,并同时测定其中11种皂苷类成分含量.方法 采用Agilent ZorbaxSB-C18 (250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相(洗脱程序:0～30 min,20％乙腈;30～60 min,20％～45％乙腈;60～88 min,45％～75％乙腈;88～98 min,75％乙腈;98～100 min,75％～20％乙腈),体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃,建立熟三七饮片的HPLC指纹图谱,并对三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、20S-Rh1、20R-Rh1、Rd、Rk3、Rh4、20S-Rg3、20R-Rg3等指标成分的定量测定方法进行方法学考察,对10批(S1～S10)熟三七饮片进行含量测定.结果 建立了熟三七饮片的HPLC指纹图谱,共标定30个共有峰,S1～S10指纹图谱的相似度分别为0.941、0.938、0.945、0.951、0.913、0.909、0.920、0.928、0.917、0.919;在所建立的定量测定方法条件下,同时测定11个皂苷成分,三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、20S-Rh1、20R-Rh1、Rd、Rk3、Rh4、20S-Rg3、20R-Rg3平均质量分数分别为5.274、20.515、2.838、23.651、3.476、1.407、5.239、1.784、1.580、0.904、0.294 mg/g;色谱峰均达到了较好地分离,且在线性范围内线性关系良好,11种皂苷的线性回归方程相关系数分别为0.999 7、0.999 5、0.999 5、0.999 7、0.999 7、0.999 6、0.999 7、0.999 6、0.999 7、0.999 7、0.999 6;平均加样回收率分别为101.23％、98.52％、97.67％、99.62％、98.17％、98.92％、99.44％、99.14％、100.25％、98.23％、96.89％;RSD值分别为1.35％、1.58％、2.44％、1.05％、1.48％、1.56％、0.85％、2.34％、2.85％、1.25％、1.08％.结论 该方法灵敏、准确、重复性好,可为熟三七饮片的质量评价提供参考.
-
人参皂苷Rd的研究进展
人参皂苷Rd是二醇型人参皂苷在人体肠道内的主要代谢产物之一,具有广泛的生物活性.对心脑血管、神经系统、免疫系统等作用独特;在镇痛、神经保护作用方面,人参皂苷Rd相对于其他单体皂苷也较强.人参皂苷Rd的结构复杂,化学合成至今尚未成功,需从植物药中提取以满足医疗和科研的需要,但因植物中人参皂苷Rd的量较低,从植物中提取的方法 难以满足需要.因此,国内外在有效获取人参皂苷Rd方面也进行了大量研究.对人参皂苷Rd的生物活性、制备方法 等研究进行了详细综述.
-
人参皂苷Rd对组蛋白H3乙酰化的调控机制研究
目的 基于定量蛋白组学分析和分子生物学实验验证,阐明人参皂苷Rd调控组蛋白H3乙酰化水平的作用机制.方法 利用氨基酸稳定同位素标记(SILAC)技术和液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)检测人参皂苷Rd作用下人胚肾HEK293T细胞蛋白质组的动态变化;通过对定量蛋白组学数据库分析监测组蛋白乙酰转移酶(HATs)和组蛋白去乙酰转移酶(HDACs)表达水平的变化,并通过Western blotting和实时荧光定量PCR (qRT-PCR)实验验证相关蛋白质表达和转录水平的变化;利用siRNA进行基因敲除实验以明确人参皂苷Rd对组蛋白H3K9和H3K18位点乙酰基修饰水平的调控作用.结果 人参皂苷Rd处理HEK293T细胞后,组蛋白H3K9ac、H3K18ac表达水平降低,但催化修饰这2个位点的P300没有明显变化;同时人参皂苷Rd可上调HDAC2的转录和表达水平,siHDAC2处理HEK293T细胞后,逆转了人参皂苷Rd对H3K9ac、H3K18ac的下调作用.结论 人参皂苷Rd通过上调HDAC2,下调组蛋白H3K9和H3K18位赖氨酸位点的乙酰化水平,从而影响下游基因的转录激活.
关键词： 人参皂苷Rd 组蛋白乙酰化 组蛋白去乙酰转移酶2 H3K9ac H3K18ac -
HPLC-ELSD法测定人参茎叶中人参皂苷Rg1、Re、Rd的含量
目的 建立HPLC-ELSD法测定人参茎叶中人参皂苷Rg1、Re、Rd含量的方法 . 方法 采用Diamonsil(钻石)C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈(A)和水(B)按不同体积比混合,梯度洗脱程序:0-30 min,21%A;30-35 min,21%-33%A;35-60 min,33%A;60-65 min,33%-21%A;65-70 min,21%A;流速为1.0 ml/min,雾化温度35℃,蒸发温度50℃,载气N2,压力1.5 Bar. 结果 人参皂苷Rg1、Re、Rd分别在1.06-7.95 μg、1.94-14.55 μg、1.26-9.45 μg范围内呈良好的线性关系.3种人参皂苷的平均回收率分别为96.75%(RSD=1.99%)、97.77%(RSD=1.33%)、96.30%(RSD=1.26). 结论 本方法 灵敏、简便、准确,可用于人参茎叶中人参皂苷的含量测定.
关键词： HPLC-ELSD法 人参茎叶 人参皂苷Rg1 人参皂苷Re 人参皂苷Rd -
三七总皂苷中活性单体的检测及体内代谢研究进展
现代药理学研究证实三七总皂苷具有抗自由基、抗血小板聚集、扩张血管、改善微循环及抗炎等作用,其有效成分三七总皂苷(panaxnotoginseng sapomns,PNS)中主要含有三七皂苷R1(notoginsenoside R1,R1)、人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)、人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,Rb1)、人参皂苷Rd(ginsenoside Rd,Rd)、人参皂苷Re(ginsenoside Re,Re)等单体皂苷.PNS口服难以被直接吸收,必须经过体内代谢才能发挥生物活性.然而迄今国内尚未检索到PNS体内代谢过程比较系统的研究报道.故该文对PNS的检测方法及5种活性单体在生物样品中的吸收分布及代谢等药动学研究进展进行了分析和综述.
-
人参皂苷 Rd的抗癌机制研究进展
人参皂苷Rd是二醇型人参皂苷在人体肠道内的主要代谢产物之一，是三七、人参、绞股蓝等的提取物，具有广泛的生物活性。对心脑血管、神经系统、免疫系统及抗肿瘤方面等作用独特。由于人参皂苷Rd的药理作用的多样性和安全性，已成为人们关注的焦点，但因人参皂苷Rd的结构复杂，化学合成至今尚未成功，需从植物药中提取以满足医疗和科研的需要，但因植物中人参皂苷Rd的量较低，从植物中提取的方法难以满足需要。因此，国内外着重对有效获取人参皂苷Rd方面进行了大量研究，而忽略了其本身的抗癌功效。肿瘤防治现已成为世界性难题，据专家预测，由于我国目前环境污染和吸烟问题仍然严重，在2025年前癌症总的发病率不大可能下降，所以癌症是一个必须面对的多发病、常见病，而人参皂苷Rd由于其天然、价廉、低毒性，且在诱导癌细胞凋亡方面疗效显著，为抗癌药物新药开发提供了新的道路。故本文对人参皂苷Rd的抗癌机制研究进行了详细综述，旨在为人参皂苷Rd防治肿瘤及放化疗毒副反应提供理论依据。
-
人参皂苷Rd抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖机制研究
目的:体外研究人参皂苷Rd(GS-Rd)抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖机制.方法:采用MTT法检测GS-Rd对U251细胞增殖情况的影响;采用流式细胞仪观察GS-Rd对U251细胞周期及凋亡影响;通过实时荧光定量PCR检测GS-Rd对U251细胞相关凋亡基因表达的影响.结果:1)GS-Rd在浓度为20~80μmol/L范围内对U251细胞均有一定的抑制作用,并且抑制强度随药物浓度的增加而增大,呈剂量依赖性;2)GS-Rd各剂量组均可诱导U251细胞凋亡.细胞周期分析显示随着给药浓度增加,越多的U251细胞被阻滞在G1/G0期,使进入S和G2/M期的细胞减少;3)与空白对照组相比,GS-Rd各剂量组Bcl-2mRNA表达显著降低(P<0.05),同时Caspase-3mRNA表达显著提高(P<0.05).结论:人参皂苷Rd能抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,同时能诱导细胞凋亡,其抑瘤机制可能与下调Bcl-2mRNA表达和上调Caspase-3mRNA表达有关.
-
GSRd对人脑胶质瘤U251细胞端粒酶活性和hTERT表达的影响
目的:探索人参苷皂Rd对人脑胶质瘤的作用.方法:人脑胶质瘤U251细胞系细胞培养,不同浓度的人参皂苷Rd处理观察细胞形态、测定端粒酶活性以及hTERT表达水平.结果:随着GSRd浓度的升高,U251细胞的生长被明显抑制,出现了细胞凋亡和凋亡小体的现象;在经GSRd处理后U251细胞的端粒酶活性,对照组和溶媒组类似,而GSRd药物处理24h后,细胞端粒酶活性显著降低,其中20 μg/L组端粒酶活性降低极显著,P＜0.01,40 μg/L和80 μg/L组端粒酶活性显著降低,P＜0.05.GSRd药物处理48 h后,细胞端粒酶在20、40、80 μg/L处理后,端粒酶活性降低极显著,P＜0.01;20 μg/L、40 μg/L和80 μg/L的GSRd处理细胞后,相比于对照和溶媒组,hTERT基因表达水平显著降低.结论:人参皂苷Rd能够促进人脑胶质瘤U251细胞凋亡,对于临床治疗脑胶质瘤有重要的意义.
-
绞股蓝总苷分散片指纹图谱及3个成分的定量分析
目的 建立不同批次绞股蓝总苷分散片HPLC-ELSD指纹图谱,并对3种特征成分定量分析.方法 采用HPLC-ELSD法,Phenomenex luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲酸-异丙醇-水(1∶8∶91)和乙腈进行梯度洗脱,ELSD检测器;体积流量0.8 mL/min;柱温25℃;进样量10 μL.结果 10批绞股蓝总苷分散片指纹图谱中标示出20个特征峰;绞股蓝皂苷A、人参皂苷Rd、人参皂苷F2的线性范围分别为2.04～7.14 μg (r=0.999 4)、1.01 ～3.53 μg (r=0.999 5)、0.48～1.69 μg (r=0.9997);平均加样回收率分别为98.67％、98.40％、98.92％、RSD分别为1.10％、0.78％、1.30％.结论 该方法简便,重复性好,精密度高,可用于绞股蓝总苷分散片生产过程的质量控制与制剂质量控制.
-
HPLC-ELSD法测定血塞通注射液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd
目的 采用HPLC-ELSD法同时测定血塞通注射液(三七)中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd.方法 采用Venusil XBP C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温30℃,雾化管温度36℃,漂移管温度70℃,载气压力25 psi(1 psi=6.895 kPa).结果 三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd分别在2.78～27.8 μg/mL,9.24～92.4 μg/mL,0.384 ～ 3.84 μg,/mL,5.55～55.5 μg/mL,1.904～ 19.04 μg/mL呈良好线性关系；血塞通注射液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd平均回收率(n=6)分别为97.60％、100.71％、98.14％、100.94％、99.69％.结论 该方法简便、准确、分离好,灵敏度高,重复性好,无干扰,可用于血塞通注射液的质量评价及三七制剂的质量控制.
-
HPLC法测定乌参醒脑滴丸中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd
目的 建立乌参醒脑滴丸(人参、首乌,银杏叶提取物)中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd的HPLC测定方法.方法 采用Diamonsil-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5.0μm),柱温30℃;流动相为乙腈和水进行梯度洗脱,体积流量为1.0mL/min；检测波长为203nm.结果 人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd分别在11.68～58.4μg/mL、15.30～153.0μg/mL、13.25～132.5μg/mL、7.65～76.5μg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,4种皂苷类成分的平均回收率为97.5％(RSD为1.56％)、100.3％(RSD为2.13％)、97.6％(RSD为1.98％)、98.6％(RSD为1.53％).结论 该法灵敏、简便、准确,可用于乌参醒脑滴丸的质量控制.
-
微管液相色谱法测定参芪颗粒中4种人参皂苷含量
目的:建立参芪颗粒(人参、黄芪、白术、茯苓等)中人参皂苷Rb_1、Rc、Rb_2与Rd的含量测定方法.方法:采用微管液相色谱梯度洗脱法,色谱柱为Microsil C_(18)微管色谱柱(150 mm×1.0 am,3 μm),流动相:乙腈-水梯度洗脱,流速:50μL/min,检测波长为203 nm.结果:人参皂苷Rb_1在0.24～2.40μg范围内呈良好线件关系(r=0.999 9),平均回收率为98.14%,RSD=0.67%(n=6);人参皂苷Rc在0.20～2.013μg范围内旱良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率为98.04%,RSD=0.99%(n=6);人参皂苷Rb_2在0.11～1.10 μg范围内呈良好线性关系(r=0.999 4),平均同收率为98.79%,RSD=0.75%(n=6);人参皂苷Rd在0.025～0.50 μg范围内呈良好线性关系(r=0.999 1),平均回收率为97.97%,RSD=1.46%(n=6).结论:本法简便、准确,能够用于该制剂的质量控制.
-
HPLC测定舒胸片中4种皂苷的含量
目的:用HPLC法测定舒胸片(三七、红花、川芎)中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd含量.方法:采用Kromasil C18柱,乙腈-水线性梯度洗脱,检测波长203 nm.结果:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的线性范围分别为1.20～6.02 μg(r=0.999 6),5.60～27.99 μg(r=0.999 9),2.84～14.20 μg(r=0.999 9),0.51～2.55 μg(r=0.999 7).加样回收率分别为96.4%(RSD为1.9%),103.7%(RSD为0.8%),106.6%(RSD为1.3%),98.5%(RSD为1.1%).结论:该方法精密度高,结果准确可靠,重复性好,可用于舒胸片的质量控制.
-
应用洗脱-推挤逆流色谱法高效分离制备人参皂苷Rg1、Rf及Rd
目的 运用洗脱-推挤逆流色谱技术(EECCC)分离制备人参皂苷Rg1、Rf及Rd.方法以乙酸乙酯-正丁醇-0.1％甲酸水(2∶1∶3,v/v)为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,仪器转速为1 250r/min,操作体积流量为40 mL/min,切换体积为2 400 mL.结果 在此条件下,经一步纯化从300 mg样品中分离纯化得到71 mg人参皂苷Rg1、21 mg人参皂苷Rf及53 mg人参皂苷Rd,经高效液相色谱分析,纯度分别达到96.2％、94.3％和95.1％.结论 EECCC制备方法快速,简单.对于分离分配系数高的物质十分有效.
-
人参皂苷Rd高产突变株Paecilomyces bainier sp229-7的生长特性和生物转化
目的 通过研究突变株拟青霉菌sp229-7(Paecilomyces bainier sp229-7)的生长及转化底物情况,探讨突变株转化三七茎叶总皂苷的高效性.方法 在不同条件下,运用摇瓶转化法考查菌株生长和转化底物特性;分别采用静息态细胞、胞外酶以及粗酶液,测定其对底物转化情况.结果 菌体12～48 h之间生长旺盛,36 h加入底物转化率高,加入底物后72 h转化基本结束,转化产物只有人参皂苷Rd,底物投料量至少可以达到20 mg/mL,克分子转化率达80%以上,转化温度27 ℃～32 ℃之间佳.静息态细胞、胞外酶以及粗酶液都可以将人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd.结论 与文献报道相比,Paecilomyces bainier sp229-7突变株具有良好的底物耐受性和专一性,快速生长的后期是底物投料的佳时机,Rb1 转化为Rd 的时间缩短为3 d,投料量至少增加20倍,显著提高了转化效率,可望应用于工业生产.突变株的高转化效率可能与转化酶由细胞内产生并部分分泌到胞外有关,增加了酶与底物接触机会,避免了产物在胞内过量积累.
关键词： 人参皂苷Rd 生物转化 菌株特性 底物耐受 拟青霉菌sp229-7 -
人参皂苷Rd预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠NR2B受体和核酸内切酶G表达的影响
目的:观察人参皂苷Rd预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠基底节区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2B蛋白和核酸内切酶G(EndoG)表达变化的影响,探讨人参皂苷Rd治疗缺血性卒中的可能机制.方法:栓线法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,免疫组织化学染色和图像分析法检测局灶性脑缺血1 h再灌注1、6、24、72 h后基底节区NR2B和EndoG表达,评价人参皂苷Rd对NR2B和EndoG表达和脑梗死体积的影响.结果:缺血再灌注组缺血侧基底节区NR2B阳性表达显著增加,EndoG在细胞核内表达显著;再灌注不同时间点人参皂苷Rd处理组NR2B和EndoG阳性表达均显著降低(P<0.05或P<0.01),脑梗死体积显著缩小(P<0.01).结论:脑缺血再灌注后NMDA受体亚单位NR2B和凋亡诱导因子EndoG表达显著增加;人参皂苷Rd预处理能显著降低NR2B和EndoG表达,通过抑制兴奋性神经毒性和阻断神经细胞凋亡,缩小脑梗死体积,从而起神经保护作用.
-
顶空-气相色谱法测定人参皂苷Rd原料中残留物的含量
目的:建立人参皂苷Rd原料中溶剂和树脂残留物的测定方法.方法:采用顶空进样-毛细管气相色谱法,色谱柱为CP-Sil 8 石英毛细管柱(30 m×0.53 mm,5 μm);柱温:50 ℃维持5 min,以每分钟15 ℃升温至160 ℃,维持2 min;检测器:FID,温度:280 ℃.用外标法测定人参皂苷Rd原料中溶剂和树脂残留物.结果:建立的色谱方法在所考察的浓度范围内线性关系良好,各溶剂回收率符合要求.结论:本实验建立的色谱方法适用于人参皂苷Rd原料中溶剂和树脂残留物的检测.
-
UHPLC同时测定进口西洋参4个化学成分的含量
目的 建立UHPLC同时测定进口西洋参中4个活性成分(人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd)含量的方法.方法 采用Zorbax SB C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,柱温30℃,检测波长为203 nm.结果 4种成分的分离度良好,且在各自浓度范围内呈现良好的线性关系(r≥0.999 9),平均回收率为95.7％～100.3％(RSD1.4％～1.8％).结论 该方法操作简单,缩短了分析时间,重复性好,为评价进口西洋参的质量提供了可靠的方法.
