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人参皂苷Rd对组蛋白H3乙酰化的调控机制研究
目的 基于定量蛋白组学分析和分子生物学实验验证,阐明人参皂苷Rd调控组蛋白H3乙酰化水平的作用机制.方法 利用氨基酸稳定同位素标记(SILAC)技术和液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)检测人参皂苷Rd作用下人胚肾HEK293T细胞蛋白质组的动态变化;通过对定量蛋白组学数据库分析监测组蛋白乙酰转移酶(HATs)和组蛋白去乙酰转移酶(HDACs)表达水平的变化,并通过Western blotting和实时荧光定量PCR (qRT-PCR)实验验证相关蛋白质表达和转录水平的变化;利用siRNA进行基因敲除实验以明确人参皂苷Rd对组蛋白H3K9和H3K18位点乙酰基修饰水平的调控作用.结果 人参皂苷Rd处理HEK293T细胞后,组蛋白H3K9ac、H3K18ac表达水平降低,但催化修饰这2个位点的P300没有明显变化;同时人参皂苷Rd可上调HDAC2的转录和表达水平,siHDAC2处理HEK293T细胞后,逆转了人参皂苷Rd对H3K9ac、H3K18ac的下调作用.结论 人参皂苷Rd通过上调HDAC2,下调组蛋白H3K9和H3K18位赖氨酸位点的乙酰化水平,从而影响下游基因的转录激活.
关键词： 人参皂苷Rd 组蛋白乙酰化 组蛋白去乙酰转移酶2 H3K9ac H3K18ac -
卵巢癌组织BRCA1转录调节:启动子位点1-2高甲基化介导的组蛋白修饰H3K9ac富集丢失
目的:探讨卵巢癌组织介导BRCA1转录调节的甲基化机制.方法:利用实时荧光定量PCR方法检测卵巢癌组织中BRCA1的表达样式;采用焦磷酸测序技术分析卵巢癌标本BRCA1基因启动子区域位点1和2的甲基化水平;采用染色质免疫共沉淀研究BRCA1启动子区域差异甲基化位点周边组蛋白H3K9ac富集情况.结果:卵巢癌组织BRCA1启动子高甲基化常常伴随BRCA1表达水平降低;BRCA1启动子区域位点1和2的异常甲基化是其转录调节的重要机制;位点1和2异常高甲基化介导的H3K9ac富集水平降低显著抑制BRCA1转录.结论:在卵巢癌组织中,BRCA1基因启动子的异常甲基化及其介导的差异组蛋白修饰H3K9ac富集协同参与BRCA1的转录调控.
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H3K9ac、H3K4me2在卵巢浆液性上皮性肿瘤中的表达及意义
目的：探讨组蛋白 H3第9位赖氨酸残基乙酰化（H3K9ac）及组蛋白 H3第4位赖氨酸残基二甲基化（H3K4me2）在卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢交界性浆液性囊腺瘤和卵巢浆液性囊腺癌组织中蛋白表达与浆液性上皮性卵巢癌发生、发展的关系及两者之间有无相关性。方法：应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法（SP 法）检测 H3K9ac、H3K4me2在30例卵巢浆液性囊腺瘤组织、30例卵巢交界性浆液性囊腺瘤组织及40例卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达，观察表达差异并进行统计学处理。结果：H3K9ac 在卵巢浆液性囊腺瘤组织中阳性表达率为93.33%，在卵巢交界性浆液性囊腺瘤组织中阳性表达率为66.67%，在卵巢浆液性囊腺癌中阳性表达率为42.50%，良性、交界性、恶性组织间两两比较差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。在不同手术病理分期、不同组织学分级的卵巢浆液性囊腺癌组织中 H3K9ac 的阳性表达率有统计学差异（P ﹤0.05）。H3K4me2在卵巢浆液性囊腺瘤组织中阳性表达率为90%，在交界性浆液性囊腺瘤组织中阳性表达率为73.33%，在卵巢浆液性囊腺癌中阳性表达率为52.50%，良性与交界性、交界性与恶性组织间比较差异无统计学意义（P ﹥0.05），良性与恶性组织间比较差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。在不同手术病理分期、不同组织学分级的卵巢浆液性囊腺癌组织中 H3K4me2的阳性表达率无统计学差异（ P ﹥0.05）。H3K9ac、H3K4me2在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达呈正相关（r =0.732，P ﹤0.001）。结论：H3K9ac、H3K4me2的低表达与浆液性上皮性卵巢癌的发生、发展有关，有可能成为浆液性上皮性卵巢癌诊断和治疗的新靶点。
