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子宫内膜癌组织中HIF1-α、VEGF-C的表达及微淋巴管密度
目的:探讨HIF1 -α、VEGF -C及微淋巴管密度与子宫内膜癌临床病理特征的关系.方法:对45例子宫内膜癌患者及正常妇女内膜组织中HIF1 -α、VEGF -C及D2-40、VEGFR -3进行免疫组化检测,并进行微淋巴管计数.结果:子宫内膜癌与正常妇女增生期子宫内膜组织中HIF1 -α、VEGF -C的表达及微淋巴管密度存在统计学差异,且子宫内膜癌组织中HIF1-α、VEGF -C的表达及微淋巴管密度与FIGO临床病理分期密切相关.结论:子宫内膜中的HIF1-α及VEGF -C变化与癌细胞的侵袭有关,可作为临床分子水平治疗子宫内膜癌的特异性靶点,联合检测子宫内膜癌中HIF1-α、VEGF -C的表达及微淋巴管密度,有利于判定子宫内膜癌的生物学行为和预后.
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不同剂量配比黄芪-莪术抑制Lewis肺癌生长转移及其对TGF-β1、HIF-1α表达的影响
目的 探讨黄芪-莪术不同剂量配比的抗肿瘤效果及其抗肿瘤血管生成机制.方法 以皮下注射瘤细胞方法构建C57BL/6小鼠Lewis肺癌荷瘤模型,随机分为模型组、顺铂组及黄芪-莪术0∶1、1∶1、2∶1、3∶1配比组.各组小鼠给予不同剂量的药物或等量生理盐水灌胃15天,并分别在第1、3、5、7、9、11、13、15天腹腔注射顺铂或生理盐水.于第16天处死后剥离肿瘤组织,称重计算瘤重指数及抑瘤率,观察肺转移结节数,HE染色分析瘤组织病理学变化,Western Blot法检测肿瘤组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)表达.结果 与模型组比较,莪术与不同比例的黄芪配伍均能明显降低瘤重和瘤重指数,减少肺转移结节数目(P＜0.05);0∶1、1∶1、2∶1和3∶1配比组的抑瘤率分别为21.91％、23.89％、37.70％、43.22％.各中药组的瘤重虽高于顺铂组(P＜0.05),但瘤重指数3∶1和2∶1配比组与顺铂组相比差异无统计学意义(P＞0.05),3∶1配比组对瘤重的抑制效果优于其他配比组(P＜0.05).3∶1和2∶1配比组的TGF-β1蛋白表达与模型组相比均显著降低(P＜0.01),且两配比组差异无统计学意义(P＞0.05);各配比组的HIF-1α蛋白表达与模型组相比均显著降低(P＜0.01),而3∶1配比组降低程度接近于顺铂组,低于其他配比组(P＜0.01).结论 较高比例的黄芪能够促进莪术的抑瘤和抗转移作用,其机制可能与黄芪通过增强莪术对肿瘤细胞TGF-β1、HIF-1α表达的抑制作用有关.
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硫化氢对心肺复苏后大鼠心肌缺氧诱导因子-1α的影响
目的 研究心肺复苏后大鼠心肌细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的变化及外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的干预作用.方法 实验在华中科技大学同济医学院附属同济医院动物实验室进行,雄性SD大鼠45只,采用窒息法建立大鼠心搏骤停模型,随机(随机数字法)分为3组,每组15只:(1)对照组,仅行麻醉、气管插管及动静脉插管操作;(2)CPR组,进行模型制备及复苏;(3)CPR+硫氢化钠(NaHS)组,以NaHS作为H2S供体,在CPR开始前1 min经股静脉给予50μg /kg NaHS,其余操作同CPR组.观察各组血流动力学参数,留取6 h心肌组织,采用RT-PCR法检测HIF-1α mRNA表达,采用MPO测定试剂盒测定各组心肌组织MPO含量,三组动物于24 h处死取心肌组织行病理学检查.采用单因素方差分析,组阳比较采用t检验.结果 CPR组和CPR+NaHS组的血流动力学指标差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组相比,CPR组和CPR+NaHS组HIF-1α基因表达均上升,CPR+NaHS组上升更为显著(P＜0.05),与CPR组比较,CPR+NaHS组HIF-1α基因表达升高(P＜0.06);与对照组相比,CPR组和CPR+NaHS组心肌MPO活性出现不同程度升高(P＜0.05),与CPR组比较,CPR+NaHS组心肌MPO活性下降(P＜0.05);通过对心肌苏木精-伊红(HE)染色切片观察显示,CPR组和CPR+NaHS组出现不同程度的病理损伤,GPR+NaHS组的病理损伤轻于CPR组.结论 HIF-1α mRNA在心肺复苏后大鼠心肌细胞的表达增强,硫化氢可能通过上调HIF-1α的表达,对心肺复苏后心肌起保护作用.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF蛋白表达的影响
目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF表达的影响.方法:在缺氧条件体外培养肝细胞癌HepG2细胞16 h,并以不同浓度EGCG处理,即低剂量(10 μmol/L)、中剂量(50 μmol/L)、高剂量(100 μmol/L),制成细胞爬片以免疫组化SABC法检测HIF-1α及VEGF表达的变化,同时设常氧组及缺氧对照组进行比较.结果:常氧状态下HepG2细胞中HIF-1α几乎无表达,VEGF有少量表达.缺氧对照组经16h缺氧后HIF-1α表达明显上调,与常氧组相比有显著差异( t = 3.579,P<0.01);VEGF表达亦较常氧组明显上调,两者有明显差异( t =6.372,P<0.01).同浓度的EGCG对缺氧各组细胞HIF-1α及VEGF表达,与缺氧对照组相比均有不同明显抑制作用(HIF:F = 56.818,P<0.05;VEGF:F = 10.016,P<0.05),EGCG对HIF-1α及VEGF表达的抑制作用呈剂量依赖性,且相关分析显示,HIF-1α及VEGF蛋白表达同步化( r=0.617,P<0.05).结论:EGCG可从蛋白水平下调缺氧诱导的HepG2细胞HIF-1α及VEGF的表达水平,从而有可能抑制肿瘤血管新生.
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缺氧诱导因子-1α在鼠肺缺血再灌注损伤中的表达与意义
目的:探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1 α)对鼠肺缺血再灌注损伤是否具有保护作用及可能的机制.方法:选择体重250～350 g的健康雄性SD大鼠72只,随机分为3组,缺血再灌注组、二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)组、假手术组,每组24只.缺血再灌注组:建立左肺缺血和再灌注动物模型:在肺充气状态下用无损伤动脉钳夹闭左侧肺门,阻断45 min后松开动脉夹,形成再灌注；DMOG组:在缺血和再灌注动物模型建立前24 h进行腹腔内注射DMOG 20 μg,/g;假手术组:仅行左侧开胸,不行缺血再灌注处理.缺血再灌注组与DMOG组于再灌注1h、3h、6h、12h后颈动脉放血处死大鼠,假手术组于开胸后1h、3h、6h、12 h颈动脉放血处死大鼠,取左肺上半部制成匀浆,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛含量、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,酶联免疫吸附法测定匀浆内白细胞介素-8含量,下半部通过免疫组化法行HIF-1α蛋白表达的观察与光镜下苏木素伊红(HE)染色后肺组织病理学改变的观察.结果:HIF-1α蛋白主要表达于肺泡上皮细胞的胞核或胞浆,与假手术组比较,缺血再灌注组、DMOG组各时间点HIF-1α蛋白的表达增强,DMOG组较缺血再灌注组各时间点HIF-1α蛋白的表达增强；缺血再灌注组、DMOG组在再灌注后3h、6h、12 h(缺血再灌注组12 h除外)较1 h HIF-1α蛋白的表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与假手术组比较,缺血再灌注组、DMOG组各时间点白细胞介素-8(除DMOG组1h外)、丙二醛含量均升高,而超氧化物歧化酶活力降低；DMOG组较缺血再灌注组各时间点白细胞介素-8、丙二醛含量均降低,而超氧化物歧化酶活力升高；缺血再灌注组、DMOG组在再灌注后3h、6h、12 h较1h:白细胞介素-8含量(除DMOG组3h外)升高,丙二醛含量(除缺血再灌注组、DMOG组12 h外)升高,超氧化物歧化酶活力降低,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).光镜下DMOG组肺组织炎性渗出较缺血再灌注组减轻.结论:HIF-1α通过降低肺组织中丙二醛、白细胞介素-8含量,增强肺组织中超氧化物歧化酶活力,减轻肺内毛细血管充血及炎性细胞浸润,对大鼠肺缺血与再灌注损伤发挥保护作用.
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结直肠癌中缺氧诱导因子1-α与FasL 表达相关性的研允
目的 探讨结直肠癌侵袭转移过程中缺氧诱导因子1-α(alpha,HIF-1α)与FasL表达的相关性.方法 采用分子克隆方法,将我室已构建的FasL-pcD-NA3.1(+)质粒与pcDNA3.1(一)质粒进行重组,得到新的FasL-pcDNA3.1(一)质粒并加以鉴定;通过脂质体转染法将空质粒、FasL-pcDNA3.1(+)与FasL-pcDNA3.1(一)质粒分别转染人直肠癌HR-8348细胞,构建侵袭力不同的结直肠癌细胞HR-8348L、HR一8348F和HR一8348As,未转染细胞HR一8348B为空白对照,应用Tran-swell,小室检测各组细胞的侵袭能力;采用化学缺氧法构建四组细胞的缺氧模型,Western blot方法定量检测缺氧0h、6h、12h及24h各组细胞内HIF-1α的表达.结果 FasL-pcDNA3.1(一)质粒符合要求,FasL片段大小约900bp,测序结果正确率99.2%;单层细胞体外侵袭实验见HR一8348F细胞穿透Transwell滤膜的细胞数目为(12.930±2.434),显著多于HR-8348B(8.133±1.959)、HR-8348L(7.670±2.093)和HR-8348As(7.870±1.685)细胞(P<0.05);Western blot检测示HIF-1α蛋白于120kD处显色,缺氧0h与6h,各组样品中HIF-α仅表达微量,HIF-1α水平无显著性差异(P>0.05);缺氧12h与24h,HR一8348F细胞内HIF-1α水平较0h和6h时明显增高(P<0.05),而HR-8348B、HR-8348L及HR-8348As细胞内HIF-1α表达与6h时无明显变化(P>0.05),HR-8348F细胞HIF-1α水平显著高于HR-8348B、HR-8348L及HR-8348As细胞(P<0.01).结论 缺氧环境中结直肠癌细胞FasL表达增强是除低氧分压外另一个诱导HIF-1α表达增高的因素,FasL与 HIF-1α水平呈正相关,高侵袭能力的结直肠癌细胞对缺氧的适应能力加强,促进肿瘤的远处转移.
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以HIF-1α和P300相互作用为靶点的抑制剂筛选模型的建立
本研究以HIF-1α和P300的相互作用为靶点,设计并构建了基于哺乳动物双杂交体系的HIF-1特异性抑制剂筛选方法.通过克隆HIF-1α和P300相互作用的基因序列,成功构建重组质粒pBIND-HIF1α和pACT-P300,进而在HEK293细胞中验证了HIF-1α和P300蛋白在哺乳动物双杂交体系中确实存在直接的相互作用,并进一步优化了模型构建条件.化合物黑毛霉素(chetomin)、甲萘醌(menadione)在此筛选模型上能抑制其相互作用.在此基础上,联合U251-HRE的HIF-1转录活性抑制剂筛选方法,充分肯定了黑毛霉素能有效抑制HIF-1活性.因此,联合哺乳动物双杂交和U251-HRE这两个细胞模型,成功建立了以HIF-1α和P300相互作用为靶点的筛选模型,为特异性小分子肿瘤靶向药物的开发奠定了基础.
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缺氧诱导因子-1α、葡萄糖转运蛋白1在卵巢上皮性癌组织中的表达及其意义
目的 探讨卵巢上皮性癌组织中缺氧诱导因子(HIF)1α及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达及其意义.方法 采用免疫组化SP法检测5例正常卵巢、15例卵巢良性肿瘤、7例卵巢交界性肿瘤和44例卵巢上皮性癌组织中HIF-1α、GLUT1的表达.结果 HIF-1α与GLUT1在正常卵巢、卵巢良性肿瘤组织中不表达,而在卵巢交界性肿瘤阳性表达率分别为42.99%(3/7)、85.7%(6/7),在卵巢上皮性癌组织中阳性表达率分别为81.8%(36/44)、90.9%(40/44),卵巢上皮性癌组织中阳性表达率明显高于卵巢交界性肿瘤组织(P＜0.05);且阳性表达率与病理分级、手术病理分期、远处转移、淋巴结转移均呈明显正相关(r值分别为0.625、0.738、0.823、0.801,均P＜0.05).HIF-1α阳性表达者GLUT1染色强度高于HIF-1α阴性表达者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HIF-1α可通过促进细胞GLUT1的表达而促进细胞的增殖,两者共同参与卵巢上皮性癌的发生、发展.GLUT1与HIF-1α可作为卵巢组织恶性转化的标志,高表达提示预后不良.
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HIF-1α、VEGF表达对甲状腺乳头状癌预后的影响
目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达对预后的影响.方法 采用免疫组织化学SP法检测50例PTC组织标本中HIF-1α、VEGF蛋白的表达,结合临床病理特征和随访资料进行分析.结果 HIF-1α主要表达于细胞核和细胞质,VEGF主要表达于细胞质,阳性表达率分别为76%和78%,两者存在显著正相关性.HIF-1α表达与临床分期和预后有关,与病理类型、病变长度无明显关系.HIF-1α,VEGF表达阳性组术后复发转移率均高于HIF-1α、VEGF阴性组.HIF-1α蛋白表达阳性和阴性组1,3,5a生存率分别为77%,65%,50%和96%,75%,62%,Log-Rank检验2组生存曲线非常显著性差异(P<0.01).结论 PTC中存在HIF-1α、VEGF蛋白高表达,HIF-1α蛋白高表达与PTC术后复发转移密切相关,是PTC患者预后不良的标志.
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缺氧诱导因子-1αKi-67在前列腺癌中的表达及意义
目的 探讨前列腺癌中缺氧诱导因子(HIF)-1α、Ki-67表达的相互关系及临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测HIF-1α、Ki-67在前列腺增生和前列腺癌组织中的表达.结果 前列腺癌组织中HIF-1α与Ki-67的阳性表达率分别为69%和64%,并且与前列腺癌的组织学分级、临床分期呈正相关(P《0.05).HIF-1α与Ki-67表达密切相关(rs=0.362,P《0.01).结论 HIF-1α过度表达可能参与前列腺癌的发生发展,且与前列腺癌细胞增殖有密切关系,可作为反映前列腺癌生物学行为的有效指标.
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缺氧诱导因子-1αKi-67在前列腺癌中的表达及意义
目的 探讨前列腺癌中缺氧诱导因子(HIF)-1α、Ki-67表达的相互关系及临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测HIF-1α、Ki-67在前列腺增生和前列腺癌组织中的表达.结果 前列腺癌组织中HIF-1α与Ki-67的阳性表达率分别为69%和64%,并且与前列腺癌的组织学分级、临床分期呈正相关(P《0.05).HIF-1α与Ki-67表达密切相关(rs=0.362,P《0.01).结论 HIF-1α过度表达可能参与前列腺癌的发生发展,且与前列腺癌细胞增殖有密切关系,可作为反映前列腺癌生物学行为的有效指标.
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缺氧诱导因子1-α参与结直肠癌细胞上皮间质转化及DNA同源重组修复的机制
目的:研究氯化钴(CoCl2)模拟的细胞体外缺氧微环境对结直肠癌细胞株SW480及Caco-2上皮间质转化及DNA同源重组修复的影响并探究其机制.方法:应用不同浓度的氯化钴(CoCl2)处理SW480及Caco2细胞72 h后,CCK8法检测细胞增殖能力,划痕及Transwell试验检测细胞的迁移及侵袭能力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况,RT-PCR及Western blotting实验检测细胞内相关基因mRNA及蛋白水平的变化情况.结果:CCK-8实验提示细胞在缺氧后增殖能力明显增加(P＜0.05);划痕试验及Transwell侵袭实验提示细胞在缺氧条件下迁移及侵袭能力明显增强(P＜0.05);流式细胞术提示细胞在缺氧后被阻滞在S期(P＜0.05),凋亡率明显下降(P＜0.05);RT-PCR试验表明缺氧后细胞内缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)及RAD51的mRNA水平上调(P＜0.05);Western blotting实验表明在缺氧环境下细胞内HIF-1α表达上调(P＜0.05),上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition)相关蛋白:钙黏附蛋白E(E-cadherin)表达下调,波形蛋白(vimentin)及转录抑制因子(snail)表达上调(P＜0.05),DNA同源重组相关蛋白BRCA1及RAD51表达上调(P＜0.05),PI3K/AKT(磷脂酰肌醇-3-羟激酶)信号通路下游关键信号分子AKT1及共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant gene)的编码产物ATM激酶磷酸化水平显著上调(P＜0.05).结论:慢性缺氧环境可促进结直肠癌细胞SW480及Caco-2的增殖、迁移和侵袭能力,抑制凋亡,其机制可能与HIF-1 α/PI3 K-AKT、HIF1-α/ATM信号通路介导EMT及DNA同源重组修复过程有关.
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不同缺氧方式对大鼠缺氧诱导因子-1α及脑源性神经营养因子的表达和认知功能影响
目的 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征常引起多系统损伤,特别是损伤中枢神经系统,引起认知功能障碍.文中旨在探讨不同缺氧方式下大鼠血清中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、脑源性神经营养因子(BDNF)水平表达和认知功能的损害及可能相关机制. 方法 24只大鼠随机数字表法分为3组:正常对照组,间歇性缺氧组和持续性缺氧组,每组8只.正常对照组大鼠不予任何处理.间歇性缺氧组缺氧舱内循环充入N2和空气,使箱内氧浓度在(7.0±0.5)%和21%切换,各维持1.5min,每个循环周期为4min;持续性缺氧组放入氧浓度为(7.0±0.5)%的缺氧舱内.缺氧组大鼠每天均缺氧8h,持续30d.记录大鼠体重,ELISA检测血清中HIF-1α、BDNF水平,Morris水迷宫和HE染色分别检测大鼠的行为学和形态学改变. 结果 正常对照组体重[(218.63±15.29)g]明显高于间歇性缺氧组[(195.75±6.50)g]和持续性缺氧组[(180.88 ±12.02)g],差异有统计学意义(P<0.05).定位航行实验结果提示间歇性缺氧组和持续性缺氧组逃避潜伏时间明显长于正常对照组(P<0.05),间歇性缺氧组逃避潜伏时间较持续性缺氧组明显延长(P<0.05).空间探索实验可知正常对照组穿越平台次数[(4.97±0.47)次]显著多于间歇性缺氧组和持续性缺氧组[(2.63±1.45)次、(3.22±1.30)次],差异有统计学意义(P<0.05).与正常对照组HIF-1α水平、BDNF水平[(14.11±4.06,1036.40±124.48)pg/mL]比较,间歇性缺氧组[(36.14±9.34)、1625.34±332.44)pg/mL]、持续性缺氧组[(27.27±6.88,1204.07±363.81)pg/mL]均明显升高(P<0.05),而间歇性缺氧组较持续性缺氧组亦显著升高(P<0.05).HE染色可见持续性缺氧组和间歇性缺氧组CA1区神经元细胞排列分散、紊乱,核膜结构不清,细胞核固缩,细胞质深染,部分细胞破坏.间歇性缺氧组更可见部分细胞缺失和空泡样改变. 结论 慢性缺氧抑制大鼠生长发育,出现认知功能障碍;慢性间歇性缺氧下高水平的HIF-1α提示机体处于缺氧应激状态,血清BDNF水平代偿性增加可能参与神经元细胞的损伤调节.
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食管鳞癌组织中HIF-1 α和IGF-1蛋白的表达及其意义
目的 探讨缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)蛋白表达与食管鳞癌发生、发展及浸润、转移的关系.方法 应用免疫组化S-P法检测49例食管鳞癌组织、12例原位癌、19例癌旁不典型增生组织及39例正常食管黏膜组织中HIF-1α及IGF-1蛋白的表达.结果 食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白表达与肿瘤浸润深度及淋巴结转移密切相关(P均＜0.05),而与分化程度无关(P＞0.05);IGF-1蛋白表达与癌的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移均密切相关(P均＜0.05);HIF-1α蛋白及IGF-1在癌组织、原位癌、不典型增生组织及正常黏膜组织中的表达率依次降低;病变黏膜与正常黏膜比较均有显著差异(P均＜0.05).HIF-1α与IGF-1蛋白表达呈正相关.结论 HIF-1α和IGF-1在食管鳞癌的浸润、转移及黏膜上皮癌变过程中起重要作用,二者联合检测可作为判定食管鳞癌侵袭转移能力的客观指标,对食管鳞癌的预后判断具有重要意义.
关键词： 缺氧诱导因子1-α 胰岛素样生长因子-1 食管鳞癌 免疫组织化学 浸润转移 -
HIF-1α、MMP2在大肠癌中的表达及相关性研究
目的：观察缺氧诱导因子1-α（HIF-1α）、基质金属蛋白酶2（MMP2）在大肠癌发生发展过程中的表达情况及其相关性，探究其与大肠癌临床病理特征的关系。方法运用免疫组织化学（ SABC ）法检测HIF-1α、MMP2在46例大肠癌组织及20例正常组织中的表达情况。结果 HIF-1α、MMP2在大肠癌的阳性表达率明显高于正常大肠组织，差异有统计学意义（P＜0．001）。 HIF-1α、MMP2的表达均与Dukes分期及是否有淋巴结转移有关（P＜0．05）；通过相关性分析，两者呈正相关（r＝0．357，P＜0．05）。结论HIF-1α、MMP2可能与大肠癌的发生、浸润及转移有关，两者的协同作用可能参与了大肠癌的发生、发展。
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补肾强筋胶囊对成骨细胞缺氧诱导因子1α的影响
目的:探讨补肾强筋胶囊含药血清对成骨细胞缺氧诱导因子1α (HIF1-α)的影响.方法:制备补肾强筋胶囊大鼠含药血清,成骨细胞株hFOB1.19培养并分为常规组、对照组、低浓度组及高浓度组,常规组用21％02培养,其余三组用2％02培养,其中对照组加入空白血清,低浓度组和高浓度组分别加入低浓度和高浓度补肾强筋胶囊含药血清,MTT法检测成骨细胞增殖,并检测各组ALP活性,Western blot检测各组HIF1-α.结果:MTT检测成骨细胞增值率低于常规对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);高浓度组、低浓度组OD值与低氧对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);常规对照组ALP活性与低氧对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);高浓度组与低浓度组均比低氧对照组的ALP活性高,差异有统计学意义(P＜0.05);在低氧环境下,加入补肾强筋胶囊含药血清后,高浓度组及低浓度组其HIF-1 α的表达较低氧对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:补肾强筋胶囊含药血清可促进低氧环境下成骨细胞的增殖,降低HIF1-α含量.
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SENP-1和HIF-1α在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
[目的]探讨SENP-1和HIF-1α在肝细胞肝癌组织,癌边缘组织及非癌组织中的表达与肝癌发展的关系和在肝癌新生血管生成中的作用.[方法]应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测57例肝癌组织,癌边缘组织,非癌组织中SENP-1和HIF-1α的表达,用CD34多克隆抗体标记新生血管内皮细胞,计数微血管密度(MVD),分析三者表达的相关性及与相关临床病理参数的关系.[结果]肝癌组织与癌边缘组织SENP-1、HIF-1αmRNA表达显著高于非癌组织,SENP-1和HIF-1α在癌边缘组织及癌组织细胞的胞浆内有明显表达,癌边缘组织的表达强度及阳性率显著高于癌组织(P＜0.05),且表达阳性率随肝癌组织分化程度降低而增高,而在非癌组织的实质细胞中则不表达；在癌边缘组织及癌组织中SENP-1与HIF-1α蛋白表达正相关(r=0.761,P=0.000；r=0.346,P=0.008),HIF-1α蛋白表达与MVD负相关(r=-0.684,P=0.000;r=-0.808,P=0.000).[结论]SENP-1和HIF-1α的表达可能是肝癌细胞适应缺氧微环境的重要调节机制,与肝癌新生血管生成密切相关.
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缺氧诱导因子1-α在酒精性肝病形成中的表达
目的研究缺氧诱导因子1-α(HIF1-α)在酒精性肝病动物模型的表达情况,探讨其与酒精性肝病的关系. 方法采用酒精灌胃法建立酒精性肝病动物模型,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学染色法检测大鼠肝组织HIF1-α mRNA和蛋白水平. 结果 RT-PCR结果显示模型组大鼠HIF1-α mRNA表达阳性率为62.5%(5/8),对照组为16.7% (2/12),χ2＝3.94,P<0.05.两组大鼠肝脏HIF1-α多克隆抗体免疫组织化学染色评分分别为3.13±0.83和0.83±1.27,差异有非常显著性,t＝4.88,P<0.01. 结论 HIF1-α在酒精性肝病动物模型的表达明显增高,缺氧是酒精性肝病的发病机制之一.
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低氧诱导对人肝癌SMMC7721细胞生物学行为的影响
目的 研究低氧对体外培养的人肝癌细胞株SMMC7721增殖、细胞周期、凋亡和黏附、迁移能力的影响,探讨其中可能存在的分子机制.方法 通过氯化钴诱导人肝癌SMMC7721细胞低氧,MTT法、流式细胞术、细胞黏附试验、transwell小室迁移实验观察低氧对肝癌细胞增殖、凋亡和细胞周期以及细胞黏附和迁移能力的影响;采用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测低氧对细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP2)mRNA和蛋白表达的影响.结果 MTT法显示氯化钴诱导的低氧对肝癌细胞生长起抑制作用;低氧24 h,流式细胞术显示细胞凋亡、坏死增加,细胞周期G0/G1期、S期细胞比例减少,G2/M期比例增加;黏附试验显示低氧后细胞黏附力增强(P＜0.01),transwell小室实验显示,低氧后细胞迁移能力较常氧时明显增加(P＜0.05);RT-PCR和细胞免疫化学检测显示低氧条件下HIF-1α、VEGF、MMP2的mRNA和蛋白表达均较常氧时增加(P＜0.05).结论 氯化钴诱导低氧可抑制SMMC7721细胞增殖,使细胞周期阻滞于G2/M期,细胞凋亡、坏死增加,同时细胞黏附、迁移能力增强;低氧时HIF-1αmRNA和蛋白表达增加,并通过调节及其下游靶基因VEGF、MMP2的表达参与了这一生物学行为的转变.
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不同剂量左甲状腺素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织HIF-1α表达的调节
目的 探讨不同剂量左甲状腺素(L-T4)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)新生大鼠脑组织缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)的调节作用.方法 7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组(HI)、溶剂组及L-T4低、高剂量组.低、高剂量L-T4干预组及溶剂对照组分别于HIBD后当日起腹腔注射2μg/100 g L-T4、3.5 μg/100 g L-T4及等体积溶剂,每日1次,共5d.应用免疫组化法检测鼠脑HIF-1α蛋白,RT-PCR法检测HIF-1αmRNA.结果 缺氧缺血组缺血侧大脑皮质HIF-1α蛋白(72.795±6.121)及HIF-1αmRNA(0.448±0.035)表达较假手术组(依次为38.581±2.846,0.174±0.015)增高,差异有统计学意义(P＜0.05);L-T4低、高剂量干预组缺血侧大脑皮质HIF-1α蛋白(依次为117.350±9.374,142.842±8.948)及HIF-1αmRNA(依次为0.618±0.042,0.711±0.049)表达较缺氧缺血组增高,差异有统计学意义(P＜0.05),且L-T4对HIF-1α的影响具有剂量依赖性,即随剂量增加,HIF-1α蛋白及HIF-1αmRNA表达增加,两组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 在新生大鼠HIBD时,L-T4可上调HIF-1α蛋白及其mRNA表达,从而对HIBD起保护作用,且具有剂量依赖性.
