肺硬化性血管瘤整个病变的克隆性

目的:探讨肺硬化性血管瘤(PSH)整个病变的克隆性并阐明其本质.方法:利用激光显微切割技术获取22例女性肺PSH组织中多角形细胞和表面立方细胞构成的整个病变及病变周围正常肺组织,分别提取基因组DNA,通过基于女性体细胞构成组织内X染色体失活嵌合性和磷酸甘油酸激酶(PGK)基因位点的克隆性分析、观察PSH整个病变的克隆性.结果:22例肺PSH光镜下均表现为典型的组织病理学特征,即呈实性、乳头状、硬化性和出血性组织结构.病变主要由间质圆形或多角形细胞及被覆在乳头状结构表面的立方细胞所构成.克隆性检测结果表明有7例31.8%(7/22)显示PGK基因位点多态性.经Hpa Ⅱ酶切后,所有具有多态性的标本2个条带中有1个条带的密度明显减弱或消失,而另1个条带保留,证明其均为肿瘤性增生.结论:PSH是一种真性肿瘤,构成PSH的2种主要细胞起源于同一类型细胞.

单克隆抗体间接免疫荧光试验检测生殖器单纯疱疹病毒感染

目的:评价间接免疫荧光试验 (IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值.方法:采用以单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法,检测了120例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV,并与病毒培养法进行比较.结果:IFA检测HSV的总阳性率为85.8%,高于病毒培养法的阳性率(70.8%,χ2=12.04,P<0.01).两种方法检测GH患者皮肤水疱内的HSV阳性率分别为93.3%和90.0%,无明显差异(χ2=1.96,P>0.05);而检测糜烂和结痂性皮疹内的HSV时,IFA 的阳性率分别为92.6%和69.4%,均分别高于病毒培养法(75.9%,χ2=5.82,P<0.05;47.2%,χ2=14.17,P<0.01).结论:IFA 法具有简单、快速、敏感性高的优点,适用于检测GH患者皮疹内HSV,有临床实用价值.

宫颈单纯疱疹病毒感染的检测和分型

0引言 单纯疱疹病毒(HSV)分HSV-1和HSV-2两个血清型,两型病毒均能引起宫颈慢性炎症,并具有反复发作和致癌的特性,可对孕妇及围产儿造成严重后果. 而且两型病毒的生物学特征及其引起的生殖器疱疹的病程和预后却不同[1,2]. 因此,对HSV感染的快速检测和准确分型,有助于生殖器疱疹的诊断、预后及流行病学研究. 我们已建立了用于HSV检测与分型的抗原捕获聚合酶链反应(AC-PCR)方法[3,4]. 为了解宫颈HSV感染情况,评价AC-PCR 在生殖器疱疹诊断中的应用价值,我们用AC-PCR 法对宫颈棉拭标本中HSV进行检测和分型,并与病毒培养法进行比较.

应用红细胞花环形成试验筛选肿瘤膜抗原单克隆抗体

0引言红细胞花环形成试验(rosette assay)中被检细胞处于生长状态,表面抗原表达密度较高,并保持在一种天然分子的构象,因此与免疫组化方法相比,敏感性高,特异性好.在用肿瘤细胞或新鲜组织为免疫原制备和筛选mAb中有很大的应用价值[1].我们对花环形成试验在肿瘤膜抗原mAb制备上的应用进行了探讨,并与间接免疫荧光染色和流式细胞术分析的筛选方法进行了比较.

抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析

抗创伤弧菌mAb的制备与鉴定

目的: 制备抗创伤弧菌mAb并用于创伤弧菌感染的快速诊断.方法: 用灭活创伤弧菌免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗创伤弧菌的mAb,ELISA法用于mAb的Ig效价,亚类及特异性鉴定.结果: 获得了2株可持续分泌抗创伤弧菌mAb的杂交瘤细胞株.结论: 获得的高特异性的抗创伤弧菌mAb不仅为创伤弧菌感染的快速诊断奠定了坚实的基础,而且为其进一步的治疗方面的研究提供了理论依据.

检测抗肾综合征出血热病毒mAb在患者体内代谢的方法建立与应用

目的: 研究抗HFRS病毒鼠源性mAb治疗HFRS患者后其体内血药浓度的变化以及抗鼠抗体的产生情况. 方法: 建立检测人血清中鼠IgG及抗鼠抗体的ELISA方法,并以此检测二期及三期临床试验的HFRS患者血清165份. 结果: 建立的两种方法均特异性强,敏感度高,稳定性好. 观察到血清中鼠IgG血药浓度在用药后1~3 d高,平均为(1.04±0.84) mg/L;随后迅速下降,6~10 d组平均浓度为(0.21±0.21) mg/L;用药12 d以后绝大多数已测不到. 而抗鼠抗体主要产生在用药12 d以后,阳性率为78.0%,平均效价为1∶557;用药后6~10 d组的阳性率为28.6%,平均效价为13∶55. 结论: 抗HFRS病毒mAb(鼠IgG)在HFRS患者体内代谢较为迅速,而12 d后产生的抗鼠抗体不是影响其代谢的主要因素.

疏水作用FPLC一步法制备级纯化抗人肝癌单抗HAb18 F(ab')2片段

目的制备符合人用标准的肝癌单抗HAb18 F(ab')2片段. 方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体,胃蛋白酶与抗体在pH 3.5 0.1 mol.L-1柠檬酸条件下,经不同反应时间,收集样品,上FPLC(快速蛋白液相色谱) Phenyl-Sepharose HP疏水柱纯化并进行质检. 结果按上述条件消化2 h,95%以上的IgG裂解为F(ab')2片段,经Phenyl-Sepharose HP疏水柱纯化后F(ab')2片段纯度可达98.8%. 纯化时间仅50 min,一次制备量可达500 mg,回收率>50%,免疫活性为1∶8000,细菌、热原质检测结果为阴性. 结论该法操作简便,周期短,易于质控,是大量、快速、高产率制备F(ab')2片段的有效方法.

抗人肝癌单克隆抗体嵌合轻链在巴氏毕赤酵母的高效分泌表达

目的: 通过整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌mAb HAb18的cFab的嵌合轻链.方法: 将抗人肝癌mAb cFab/HAb18原核表达载体pET32a/cFab中的cL亚克隆到酵母表达载体pPIC9K,构建成重组质粒pPIC9K/cL测序鉴定.重组质粒pPIC9K/cL整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418筛选得到高拷贝转化子及Mut表型鉴定后,用含5 mL/L甲醇的培养基诱导表达.结果: 该系统成功表达了抗人肝癌mAb HAb18cFab的嵌合轻链,表达水平为22 mg/L;Western Blotting证实,表达产物具有良好的HAb18GE结合活性和特异性.结论: 嵌合轻链/HAb18在巴氏毕赤酵母获得成功表达,为高效分泌表达cFab抗体奠定了基础.

消减免疫法制备抗肝癌凋亡细胞相关抗原单克隆抗体

目的分析肝癌细胞凋亡过程中相关分子的表达情况,制备抗凋亡相关抗原的mAb.方法用60 mL@L-1乙醇作用6 h诱导HCC-9204细胞凋亡.May-Grunwald-Giemsa(MGG)法染色观察细胞形态.流式细胞仪分析细胞DNA含量.环磷酰胺消减免疫法免疫10只小鼠,另取10只小鼠用常规法免疫作为对照.末次免疫后取鼠尾血清进行免疫细胞化学法检测.选取尾血清与凋亡细胞和非凋亡细胞的反应差异明显者取脾细胞,与骨髓瘤细胞SP2/0融合.ELISA法筛选.计算杂交瘤细胞融合率和抗体阳性率.有限稀释法连续克隆化.免疫细胞化学法进一步筛选.Western blot法分析mAb相关抗原的分子质量.结果 MGG染色可见大部分细胞出现凋亡.流式细胞仪分析可见亚二倍体凋亡峰.实验组有2只鼠的尾血清在凋亡细胞呈强阳性,而与非凋亡细胞的反应很弱.两组的细胞融合率无明显差异;在凋亡细胞高表达,而在非凋亡细胞低表达的抗体的产生率也未见明显差异.实验组总的抗体产生率明显低于对照组(P＜0.01),在凋亡细胞与非凋亡细胞均高表达的抗体的产生率也明显低于对组(P＜0.01).筛选出1株在乙醇诱导的HCC-9204凋亡细胞核内高表达,而在非凋亡的HCC-9204细胞低表达的mAb.此mAb相关抗原的相对分子质量为75×103.结论消减免疫法有助于制备抗凋亡相关抗原的mAb.

慢病毒载体介导GFP标记大鼠骨髓间充质干细胞

目的 探究慢病毒载体介导绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)标记大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)的理想条件,以获得稳定高表达GFP的MSCs亚群.方法 慢病毒载体介导GFP以25、50、100、200和400的感染复数(multiplicity of infection, MOI)分别作用12h和24h感染MSCs,倒置荧光显微镜及流式细胞术检测各组的感染效率和荧光强度,MTT法评价感染对MSCs增殖的影响,从而确定理想的感染条件.平皿克隆套环法挑选理想条件下感染的MSCs单克隆.结果 MOI为100、200和400作用24h时,感染效率较高,分别为88.94%、99.65%、99.42%;MOI为100和200时,感染对MSCs增殖无影响,MOI为400时,感染的MSCs增殖减慢.挑选MOI为200、作用24h感染组的单克隆细胞,其1月时感染效率为99.95%,且荧光均一、强度很强.结论 MOI为200作用24h是慢病毒载体介导GFP标记MSCs的理想条件;通过细胞单克隆技术可获得稳定高表达GFP的MSCs亚群.

抗金葡菌多肽单克隆抗体制备及初步鉴定

目的:研制抗金葡菌多肽单克隆抗体(mAb).方法: 抗金葡菌多肽(PH-SA)抗原采用脾内注射、醋酸纤维膜皮下包埋、完全佐剂3种方法免疫Balb/C小鼠,常规方法细胞融合,用ELISA间接法筛选阳性细胞并测定相对亲和力,双抗体竞争试验和双抗体竞争抑制试验识别PH-SA表位.结果:获4株可分泌PH-SA mAb的杂交瘤细胞株.免疫球蛋白亚类测定均为小鼠IgG1亚类,相对亲和力依次为G11＞B9＞H3,4株mAb可能抗相同抗原表位.结论:获4株PH-SA mAb的杂交瘤细胞株为PH-SA的鉴定提供了可能性.

抗肿瘤坏死因子单克隆抗体对持续缺血和缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨抗肿瘤坏死因子单克隆抗体对持续缺血和缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响.方法:采用大白鼠随机分为7组.用冠脉结扎法,建立急性心肌梗死动物模型.以活结结扎左冠状动脉的前降支,分别造成阻断冠脉血流和再灌注.以TUNEL标记凋亡细胞.结果:凋亡细胞原位标记与半定量分析表明:抗肿瘤坏死因子单克隆抗体处理组与持续缺血组、缺血再灌注组比较心肌细胞凋亡程度明显降低.结论:缺血再灌注损伤和持续缺血可导致心肌细胞凋亡,抗肿瘤坏死因子单克隆抗体预处理能明显减轻心肌细胞凋亡程度.

抗CD20单抗治疗难治性重症系统性红斑狼疮临床观察

探讨抗CD20单克隆抗体治疗难治性重症系统性红斑狼疮（SLE）的疗效及安全性。方法：难治性重症SLE患者6例，静脉滴注抗CD20单抗500mg ，每两周使用1次，共使用2～4次，同时根据病情联合使用激素或其他免疫抑制剂。采用英国狼疮评估小组指数（BILAG）和系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDAI）进行临床评估，同时监测24h尿蛋白定量和血清学指标变化、外周血B淋巴细胞清除情况以及不良反应的发生情况。结果：经抗CD20单抗治疗后，5例患者关节疼痛症状缓解明显，2例患者的癫痫以及精神症状得到控制，2例患者的蛋白尿减少、水肿减轻，1例患者皮肤紫癜消失、血小板数恢复正常。与治疗前比较，C3、C4、SLEDAI评分、BILAG 评分明显改善，激素用量减少（P＜0．05）。该临床观察中临床缓解率高达100％。结论：抗CD20单抗是治疗难治性重症SLE的有效方法，可以缓解临床症状，减少蛋白尿、降低狼疮活动度、减少激素用量，在毒副反应、疗效方面均显示出了潜在的优势和较佳的安全性。

CD147分子表达与前列腺癌恶性程度相关性研究

目的：探讨前列腺癌组织中CD147分子表达的变化及其与TNM分期的关系。方法：应用免疫组织化学的方法观察前列腺癌标本及各个TNM分期中CD147分子表达的变化。结果：前列腺癌标本中CD147分子表达显著升高（P＜0．001），其阳性率在各个TNM分期中分别为0．2％、45．3％、72．1％和94．8％。结论：CD147分子表达在前列腺癌组织中显著升高，并与其恶性程度正相关。

抗人肝癌细胞单克隆抗体的研制及鉴定

利用杂交瘤技术,以人肝癌细胞株HC108免疫Balb/c小鼠,4周后取其脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经细胞抗原ELISA和间接酶桥法筛选,获得一株能稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体的杂交瘤株,其染色体众数为96～110个,DNA指数为3.0.此单抗为IgM型,轻链为k链.免疫组化证实此单抗与2例胚胎肝脏组织、胚胎结肠组织呈现较弱的阳性反应;除与3例宫颈癌细胞有很弱的着色反应外,与5例肝癌组织和肝癌细胞株均呈明确的阳性反应,而与其他肿瘤细胞,胚胎组织,正常成人肝脏、心脏、肾脏、肺脏、结肠、胰腺等均未见反应.琼脂糖免疫双扩散和单抗吸收试验证实此肿瘤抗原与甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(Ferritin)、癌糖蛋白(CA19-9)无免疫相关性.免疫酶电镜染色显示此肝癌相关抗原定位于细胞膜,Western Blot显示其分子量为38kD.是一株特异性良好,阳性反应率较高的抗人肝癌单克隆抗体.

30例多发性骨髓瘤血清蛋白电泳及免疫分型

多发性骨髓瘤(MM)是恶性单克隆特异性免疫球蛋白增殖症,临床表现复杂、多样化,发病年龄偏低,总蛋白增高,易造成误诊[1].

轻链病(附12例分析)

轻链病(LCD)是多发性骨髓瘤(MM)的一种类型,其免疫球蛋白(Ig)异常在于产生过多的单克隆k型或λ型轻链.LCD因其临床表现的特殊性,误诊率较高[1],本组报告12例LCD并文献复习.

抗Toll样受体4胞外C端结构域单克隆抗体制备及其治疗脓毒症的初步效果

目的 制备针对Toll样受体4(TLR4)胞外C端结构域的单克隆抗体,并探讨抗TLR4 C端单克隆抗体对脓毒症的影响. 方法 原核表达、丙烯葡聚糖凝胶(Sephacryl S-100)纯化获得大鼠来源的TLR4 C端多肽(氨基酸序列:368-579,命名为TLR4-C),免疫6～8周雌性Balb/c小鼠,经细胞融合、抗体筛选、纯化等程序制备抗TLR4-C单克隆抗体,采用Western印迹、细胞免疫荧光对制备的TLR4-C单克隆抗体进行特异性检测.通过细胞实验和脓毒症动物模型实验进行抗体活性测定.(1)细胞实验:100 μg/ml抗体加入培养的NR8383作用1h,加入10 ng/ml 脂多糖(LPS)继续培养12 h后,ELISA检测培养基中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放水平;(2)脓毒症动物模型实验:40只SD大鼠按随机数字表法分为对照抗体组、B-D5抗体组,每组尾静脉分别注射50 mg/kg相应抗体,1h后经腹腔给予10 mg/kg致脓毒症剂量的LPS,4h后检测两组血清TNF-α含量,并连续72 h观察两组动物存活情况. 结果 获得3株特异性高、且能结合TLR4-C和TLR4全蛋白的抗TLR4-C单克隆抗体.细胞活性测定显示,1株单克隆抗体(B-D5)能明显抑制细胞TNF-α的释放,其余2株对抑制细胞TNF-α的作用较弱.动物模型实验显示,B-D5抗体组TNF-α水平为(1.54±0.18) ng/ml,明显低于对照抗体组的(0.51 ±0.10) ng/ml (P＜0.01),B-D5抗体组存活率(70％)明显高于对照抗体组(30％)(P＜0.05). 结论 制备的抗TLR4 C端单克隆抗体具有很好的TLR4中和作用,明显提高大鼠的存活率,对LPS诱发的脓毒症具有较好的保护作用.

胃癌阴性淋巴结微转移的检测及意义

目的 探讨胃癌阴性淋巴结微转移的检测及其意义.方法 应用鼠抗人细胞角蛋白(CK-19)单克隆抗体、鼠抗人癌抗原(CA72-4)单克隆抗体,免疫组化方法对65例可切除性胃癌病人的385个阴性淋巴结进行微转移检测,对相关临床病理因素及预后进行分析.结果 两种单克隆抗体联合检测共检出17例(26.2％)胃癌33个(8.6％)淋巴结有微转移.淋巴结微转移与胃癌组织分型、侵袭胃壁深度有关(x2=6.776、10.860,P＜0.05).随访28例病人,5例检出淋巴结微转移,其中无复发组2例,占9.5％(2/21);复发及死亡组3例,占42.9％(3/7),复发及死亡组微转移阳性率明显高于无复发组(x2 =3.977,P＜0.05).有微转移者5年生存率(65.3％)明显低于无转移者(87.4％),差异有显著性(x2=16.590,P＜0.01).结论 单克隆抗体联检可以提高胃癌淋巴结微转移检出率,提高临床病理分期准确性,指导术后综合治疗,并有助于判断预后.