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抗肝癌人源化Diabody在大肠杆菌中的可溶性表达及活性鉴定
目的:构建人源化抗肝癌双价抗体,并实现其在大肠杆菌中的可洛性表达.方法:缩短人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的连接肽为5肽,构建(hscFv25)2基因,克隆入原核表达载体后,转化入大肠杆菌表达,并纯化目的蛋白,细胞ELISA、免疫组织化学法检测其生物活性.结果:目的基因在大肠杆菌中得到了可洛性表达,纯化蛋白的相对亲和力比亲本抗体提高了10倍左右,对肝癌组织切片的免疫组织化学染色呈强阳性,阳性率为75%.结论:成功制备了人源化抗肝癌双价抗体,该抗体具有较高的亲和力,为进一步的临床研究奠定了基础.
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抗肝癌人源化单链抗体hscFv25的体外亲和力成熟
目的:提高人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的亲和力.方法:设计并合成人源化抗肝癌单链抗体hscFv25重链及轻链CDR3的半随机突变引物,构建突变体抗体库,竞争筛选亲和力更高的突变体抗体,对所得到的高亲和力的候选抗体,在大肠杆菌中进行可溶性表达,并采用细胞ELISA、细胞涂片免疫组织化学染色的方法,对该抗体进行初步的活性鉴定.结果:得到了3株候选高亲和力突变体抗体,其中的一株在大肠杆菌中获得了可溶性表达后,进一步的活性检测结果表明,该抗体的相对亲和力比亲本单链抗体提高了60倍左右,同时该抗体对肝癌细胞(SMMC-7721)的免疫组织化学染色呈强阳性,着色情况与亲本抗体相一致,而对正常肝细胞(HL-02)染色呈阴性.结论:成功地构建了人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的突变体抗体库,并筛选到了一株亲和力更高的突变体抗体.
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抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体相对亲和力的测定
目的:对3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力进行测定.方法:用纯化的O型口蹄疫病毒作为包被抗原建立一种检测方法,将3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)制备腹水并纯化,并用建立的检测方法测定3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力.结果:检测方法中抗原、酶标抗体的佳稀释度分别为1∶800和1∶10 000,单抗的相对亲和力分别为:4A9约在5.242 μg/ml(1∶600),4C3约在0.763 μg/ml(1∶5 000),9F12约在0.127 μg/ml(1∶40 000),即9F12>4C3>4A9.结论:用建立的ELISA方法测定了3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力,将为进一步研究口蹄疫病毒而选取合适的单抗提供理论依据.
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抗PH-SA单克隆抗体相对亲和力的测定
抗金葡菌多肽(PH-SA)是利用金黄色葡萄球菌信息素(pheromone)和大肠杆菌Ia(colicin)人工合成的新的蛋白质工程多肽(pheromonicin),主要是针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methecillinresistant Staphylococcus aureus,MRSA)及其他致病菌的新型生物信息导向抗菌药物.
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抗金葡菌多肽单克隆抗体制备及初步鉴定
目的:研制抗金葡菌多肽单克隆抗体(mAb).方法: 抗金葡菌多肽(PH-SA)抗原采用脾内注射、醋酸纤维膜皮下包埋、完全佐剂3种方法免疫Balb/C小鼠,常规方法细胞融合,用ELISA间接法筛选阳性细胞并测定相对亲和力,双抗体竞争试验和双抗体竞争抑制试验识别PH-SA表位.结果:获4株可分泌PH-SA mAb的杂交瘤细胞株.免疫球蛋白亚类测定均为小鼠IgG1亚类,相对亲和力依次为G11>B9>H3,4株mAb可能抗相同抗原表位.结论:获4株PH-SA mAb的杂交瘤细胞株为PH-SA的鉴定提供了可能性.