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去甲肾上腺素预处理对大鼠心脏低温保存作用的实验研究
目的 探讨去甲肾上腺素预处理是否可诱导心肌热休克蛋白70(HSP70)的合成,研究其对离体大鼠心脏低温保存的保护作用,并探讨其发挥保护作用的可能机制.方法 雄性Wistar大鼠20只,随机分为2组:对照组(n=10),腹腔注射生理盐水0.5mL,24 h后取离体心脏灌注HTK心肌保护液,4℃保存3 h.然后行Langendorff离体心脏灌注,灌注Krebs-Hcnseleit(K-H)液10min.实验组(n=10),腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1umol/kg(0.53 mg/kg),腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法同对照组.心脏灌流结束后取材测定各组心肌HSP70表达,计算心肌肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)10min漏出率、心肌含水量(MWC)等相关生化指标并做统计学处理比较.观察心肌细胞先镜结构和电镜下的超微结构.结果 实验组心肌组织HSP70表达明显高于对照组(t=21.24,P<0.01),MWC、CK/LDH 10min漏出率均显著低于对照组(t=5.45～11.38.P<0.01).实验组心肌组织光镜下结构以及电镜下超微结构的损伤较对照组明显减轻.结论 去甲肾上腺素预处理能诱导心肌组织HSP70高表达,对离体大鼠心脏经过低温保存后具有明显的保护效应,能够明显保护心肌的结构和功能,减轻低温保存带来的心肌损伤.去甲肾上腺素预处理诱导HSP70高表达是其发挥心脏保护作用可能的机制之一.
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三七总皂甙和维拉帕米对大鼠肝脏低温保存作用的比较研究
目的 比较三七总皂甙(PNGS)及维拉帕米(Ver)对大鼠肝脏低温保存的效果和机制.方法 采用大鼠离体肝脏再灌注模型(IPRL),用Fura-2法测定低温保存2h后肝细胞内钙离子浓度;经乳酸林格氏液(LR)低温保存24h的肝脏再灌注30min后进行肝脏功能检测、氧自由基代谢产物、能量物质和胆汁流量测定及形态学观察,乳酸林格氏液(LR)和DMEM液中加入不同浓度PNGS和Ver 20mg.结果 大鼠肝细胞内钙离子浓度、MDA、SOD、AST、ALT、LDH、ATP、TAN、AEC及胆汁流量等项指标各实验组明显好于对照组(P＜0.01),PNGS对大鼠肝脏的保护作用显示出剂量依赖性,在200～600mg范围内随剂量增加保护作用随之增强(P＜0.01),在800～1000mg范围内虽有增强,但无明显差别(P＞0.05).维拉帕米20 mg对大鼠肝脏的保护作用仅同PNGS 200～400mg时的作用相当(P＞0.05).结论 PNGS对大鼠肝脏低温保存的保护作用总体上优于Ver20 mg,估计与其抑制钙超载和抗氧自由基损伤机制不同有关.
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介绍一种新鲜牛奶保存菌种的好方法
目的 菌种的保存是医学微生物学实验室的一项重要工作.探索一种简便、实用、并能较长期保存菌种的方法,以便更好地为教学、科研提供标准菌株,切实为提高实验室工作效益带来具有可操作性的新思路和新途径.方法 将复苏的25种细菌,用接种环取2～3环细菌分别接种于无菌新鲜牛奶培养基中,形成菌悬液置普通冰箱-20℃低温保存,并定期复苏进行鉴定.结果 所有菌种一次接种可保存3年以上,通过对细菌存活情况、形态结构、染色特性、生化反应及血清学试验观察和鉴定等与初始鉴定结果一致.结论 新鲜牛奶低温保存细菌是一种简便易行有效的好方法,易于推广.
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X-J超级化心脏保存液的研制及作用效果
目的研究和探讨含尼可地尔的X-J超级化心脏保存液对离体兔心低温保存的有效时限和保存效果.方法将32只健康成年兔平均分成4组,每组动物摘取心脏后用X-J超级化液进行低温保存离体供心;Ⅰ组,离体供心低温保存4 h;Ⅱ组低温保存6h;Ⅲ组低温保存8h;Ⅳ组低温保存10 h.采用离体工作心模型,观察保存前后离体兔心的心功能、心肌细胞Ca2+、Ca2+-ATPase活性,心肌肌钙蛋白Ⅰ、心脏冠脉流量、心肌含水量及超微结构的变化.结果随着离体心脏低温保存时间的延长心功能遂渐减弱,心肌细胞Ca2+浓度升高,Ca2+-ATPase活性降低,心肌含水量增加.在低温保存4～6h心肌超微结构均呈轻度损伤;在低温保存8h和10 h心肌超微结构变化呈中度损伤.结论 X-J超级化保存液对离体心脏低温4h、6h保存效果与保存前无差异.8h、10h组分别与6h组相比保存效果有明显差异.
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164例患者输注低温保存血小板临床疗效分析
目的对164例输注低温保存血小板的患者进行疗效分析.方法对急性白血病(63例),多发性骨髓瘤(15例),再生障碍性贫血(20例),肝硬化食管静脉曲张破裂出血(25例),DIC(14例),肿瘤化疗或放疗所致的血小板减少等(27例)输注低温保存血小板.结果血小板升高和有显著止血效果,且无明显的副作用.结论低温保存血小板在临床应用中从数量保证、供给及时和安全有效等方面是其它方法获得血小板所不能比拟的.
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钙通道阻滞剂对大鼠肝移植冷保存再灌注损伤中细胞内钙的影响
目的研究钙通道阻滞剂对减轻肝移植中冷保存再灌注下肝细胞的钙超载及保护肝脏的作用.方法 64只Wistar大鼠行原位肝移植,按灌洗保存液的不同成分分组:⑴对照组:高渗枸椽酸盐腺嘌呤液(HCA);⑵实验I组:HCA液+维拉帕米;⑶实验II组:HCA+硝苯地平;⑷实验III组:HCA+硫氮卓酮,测定冷保存再灌注后的大鼠肝细胞内钙和肝功能,并在光镜和电镜下观察肝脏的结构.结果细胞内钙及肝功能测定,各实验组与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05);组织学观察,各实验组损伤轻于对照组.结论钙通道阻滞剂对肝移植中冷保存再灌注损伤的肝脏有保护作用,且三类药物中维拉帕米强,硝苯地平和硫氮卓酮次之.
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两种胚胎冷冻载体冻存囊胚的临床效果比较
目的 比较玻璃化冷冻中Cryotop与CryoLogic CVM两种胚胎冷冻载体的临床效果.方法 回顾性分析2014年1月至2015年8月在本院接受首次冻融囊胚移植治疗患者的临床资料,按囊胚冷冻载体分为Cryotop组(n=114)和CVM组(n =232),比较两组患者的胚胎复苏率、临床妊娠率、胚胎种植率、多胎率、宫外孕率、流产率、活产率、早产率、出生缺陷发生率以及新生儿出生体重.结果 Cryotop组的临床妊娠率、胚胎种植率、活产率均显著高于CVM组(P＜0.05);两组的胚胎复苏率、多胎率、宫外孕率、流产率、早产率、出生缺陷发生率以及新生儿出生平均体重差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Cryotop与CVM用于人类囊胚的冷冻保存安全有效,使用Cryotop冷冻载体保存的冷冻胚胎冻融后比CVM有更高的临床妊娠率、胚胎种植率及活产率.
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自制GPC-Ⅱ-3液对兔肝低温延时保存的形态学观察
目的探索对供肝具有较长时间保护作用的器官保存液.方法20只新西兰大白兔(体重2.5～3.0 kg)随机分为实验组(15只)和实验对照组(5只).用自制的器官保存液(GPC-Ⅱ-3液),低温冷藏连续保存兔肝0～192 h,观察其组织结构的变化.结果保存0～120 h的兔肝,其组织结构基本正常;保存到144h兔肝,电镜下见肝细胞的线粒体出现轻度肿胀和嵴少;随着保存时间的延长肝细胞出现明显的细胞变性.结论用GPC-Ⅱ-3液以低温冷藏的方法能够在组织结构上保存兔肝120 h.
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移植用微囊化细胞低温保存的研究
目的:探索移植用微囊化细胞低温保存的可行性.方法:以海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微胶囊(APA微胶囊)为研究体系,以转内皮抑素重组中国仓鼠卵巢细胞(rCHO)为模型细胞,观察低温保存过程中降温方式、预平衡方式、冷冻保护剂浓度等关键条件对微囊化细胞复苏活性的影响,以及低温保存后微囊膜对IgG的通透性及微囊内细胞的存活、增殖及产物分泌情况.结果:包埋功能细胞的APA微囊经一定时间的低温保存后,微囊膜仍可屏蔽IgG,并未改变其原有的免疫隔离特性,且囊内细胞具有较高的细胞活性,能够正常生存并保持增殖和产物分泌能力.结论:微囊化细胞进行低温保存是可行的.
关键词： 低温保存 海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微胶囊 CHO细胞 -
蟾蜍胃组织冻融碱性磷酸酶活性组化研究
本文用光镜组织化学分析方法分析了不同情况下冻融胃组织碱性磷酸酶活性.选择处于冬眠状态下蟾蜍,体温10℃～15℃,体重50～70 g,性别不限,随机分为4组,每组5只,将蟾蜍分为整体冷冻组,开胸冷冻组,冷冻复温组,正常对照组.在蟾蜍心跳呼吸停止,肢体僵直状态下,将冷冻蟾蜍放于500 mL溶液实验杯内.30℃复温.复温溶液为4%任氏溶液,10%甘油,5%葡萄糖.冷冻蟾蜍2～10 min复活.蟾蜍心跳呼吸胃肠蠕动正常,速将胃取出.用冷丙酮固定24 h.经组织化学常规处理,光镜组化:冷冻3组,胃组织结构清楚可见.粘膜下层,斜行,纵行肌玻璃样变.这可能是冷冻冰晶所致.胃上皮,小动脉,小静脉,毛细血管周围酶活性反应物,呈膜状分布.但比正常对照组酶活性低.实验结果表明;蟾蜍胃组织可以在低温-25℃内保存活性和功能.低限度为60 min以上,胃组织酶有活性.组织复温为30～60℃/min为宜.我们认为:利用组织化学和生物化学方法测定器官低温保存的活性,对于细胞、组织和器官保存和移植,有一定意义.
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物理场辅助生物材料冷冻保存技术研究进展
低温保存技术对于胚胎干细胞、血液、珍稀动植物物种资源的长期保存,以及人体器官活体移植等具有重要意义,是现代生命科学中一个重要的研究领域.目前制约低温保存效果关键因素是冷冻保存过程对生物组织产生的低温损伤,主要有胞内外形成的冰晶造成的机械应力损伤及由此引起细胞内外渗透压的改变造成的溶质损伤等.抑制冰晶形成与生长的方法,除了传统的添加低温保护剂和提高降温速率外,近年来很多学者致力于通过一些物理因子(包括高压强、超声波、微波、静态或低频电磁场)干扰生物材料在低温冷冻过程中晶核的形成与冰晶的生长,目的是达到低损伤甚至无损伤低温保存效果.本文综述了不同物理场辅助低温冷冻保存技术在生物细胞、组织及食品保鲜等领域的应用进展.已有研究表明不同物理场均可影响生物材料低温冷冻过程中水分子的相变,进而影响冰晶的结构和组成,提高生物材料长期低温保存效率,但是其作用机制不同.
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深低温保存生物材料快速复温方法的研究进展
生物材料的深低温保存已经越来越广泛地应用于生物学、医学等领域,其主要特点是通过低温保存生物材料,从而缓解供求之间的矛盾.同快速降温一样,快速复温在提高冷冻保存的生物组织的活性中也扮演了重要的角色.快速复温冷冻生物材料能够有效避免其在复温过程中的重结晶现象,减小热应力,降低细胞损伤,提高细胞的存活率.近年来许多国内外学者在快速复温低温保存的生物材料方面做了很多研究,探索出多种可行的复温方法.本文对传统以及新出现的复温方法逐一论述.通过查阅大量国内外相关文献,同时结合本单位的相关研究成果分析总结进行综述.目前所使用的快速复温的方法主要有传统的水浴法、Cryotop法、微波法、激光法和磁热法等.通过对几种复温方法的综合分析,认识到它们的优势和不足,以及各种方法在应用上的局限性.所以有必要寻找一种新的可靠的复温方法来实现快速均匀的生物组织的加热,并提出了一种新的快速均匀复温生物材料的方法,该方法具有重要的研究意义和应用背景.
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关节软骨组织低温保存方法的研究进展
关节软骨组织的低温保存一直是国内外研究的热点,其大的困难在于如何保持软骨细胞的存活率及其代谢活性,突破这一技术瓶颈将有助于提高关节软骨损伤的移植修复效果,并为组织细胞库的建立提供实验依据.该文阐述关节软骨组织低温保存的原理及冷冻保护剂的作用机制,重点介绍关节软骨组织低温保存的主要技术——梯度降温法、程序降温法和玻璃化冻存法,并对关节软骨组织低温保存的前景进行展望.
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玻璃化冻存对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响
目的 探讨玻璃化冻存技术对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响.方法 对兔关节软骨细胞进行玻璃化冻存法(A组)、程序性降温法(B组)及梯度降温法(C组)低温保存,以新鲜未冷冻的兔关节软骨细胞作为对照组(D组),采用流式细胞仪检测各组兔关节软骨细胞存活率和凋亡率,通过改良Alcianblue染色沉淀法评估其生物活性改变.结果 A组兔关节软骨细胞存活率为(86.6±1.7)％,明显高于B组的(79.4±3.1)％以及C组的(62.1±8.4)％,差异有统计学意义(P＜0.05)；A组、C组的凋亡率[(7.9±3.2)％、(7.3±6.2)％]明显低于B组的(14.0±5.2)％,差异有统计学意义(P＜0.05)；A组上清液中糖胺多糖(GAG)浓度为(29.4±2.9) ng/mL,明显高于B组的(18.5±4.1) ng/mL以及C组的(19.4±6.3) ng/mL(P ＜0.05).结论 与传统程序性降温法、梯度降温法比较,玻璃化冻存法能显著提高冷冻保存复苏后兔关节软骨细胞的存活率,并能维持关节软骨细胞的生物活性,是一种较为理想的软骨细胞低温保存方法.
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组织工程骨低温保存后修复兔骨缺损的影像及形态学分析
目的探讨低温保存的组织工程骨修复兔骨缺损的能力以及低温保存组织工程骨的可行性.方法将人源性生物衍生骨材料复合成骨细胞构建的组织工程骨,在4℃和-196℃的温度环境中保存3个月和6个月,同时以未行低温保存的组织工程骨和生物衍生骨材料作为对照,分别修复实验兔桡骨的长段骨缺损,于术后2、4、6、12周时行大体和组织学观察,并于6、12周行X线检查.结果4℃和-196℃的温度保存组和未行低温保存的组织工程骨组在动物体内相同时间点影像学和形态学观察无明显区别,低温保存3个月与6个月组在动物体内相同时间点影像学和形态学无明显区别;组织工程骨各组与单纯生物衍生骨材料组比较,前者在骨缺损处产生更多的胶原与新骨,其修复骨缺损是通过多点方式成骨,成骨迅速,骨愈合更快;而单纯生物衍生骨材料组从两端"爬行替代"方式成骨;所有各组无明显排斥反应.结论本研究采用的低温(4℃和-196℃)保存方法均能有效保存组织工程骨,从影像学和形态学研究证实该保存方法是有效可行的.
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低温保存对人骨髓基质干细胞在脱钙骨上体外增殖及成骨能力的影响
目的 研究低温保存对人骨髓基质干细胞(BMSCs)在脱钙骨(DBM)上生长特性及成骨能力的影响.方法 取3例志愿者骨髓(3～5 mL),密度梯度离心、差速贴壁法获得BMSCs.第3代BMSCs在-196℃下保存24 h,37℃复苏,测定细胞成活率.低温保存前、后的BMSCs分别用成骨诱导液诱导培养,至90%融合时,收集细胞接种在DBM支架上,并测定细胞在DBM上的粘附率.DiI荧光染料标记BMSCs,倒置相差显微镜、荧光显微镜和SEM观察低温保存前、后的BMSCs在DBM上的生长及基质分泌情况,MTT法测定细胞在DBM上的增殖活性.通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量观察细胞在DBM上的成骨能力.结果 复苏细胞的存活率为(90.24±0.02)%.低温保存前、后的BMSCs在DBM上的粘附率分别为(97.25±1.17)%和(97.00±1.09)%.倒置相差显微镜及SEM观察显示低温保存前、后的BMSCs在DBM上粘附、生长良好,有大量细胞外基质分泌、沉积.低温保存前、后的BMSCs在DBM上MTY吸光度值和ALP活性的检测结果差异无显著性意义(P＞0.05);体外培养12 d时,MTT吸光度值及ALP活性同时达到峰值.低温保存前、后的BMSCs在DBM上分泌OCN的量差异无显著性意义(P＞0.05),OCN含量随着培养时间延长而不断上升,在观察期(16 d)内未出现平台期.结论 低温保存对人BMSCs在DBM上的体外增殖、粘附及成骨能力影响差异无显著性意义,低温保存的人BMSCs可作为组织工程骨的种子细胞.
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不同灌注液对常温体外灌流兔肾的影响
目前,肾脏体外保存主要是浅低温保存[1],低温保存有诸多局限性.我们不是按传统的思路降低保存肾脏的代谢,而是从尽量满足保存肾脏的代谢需求的角度研究肾脏的体外保存.
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UW液和HTK液低温保存大鼠后肢效果的对比研究
目的 比较UW液和HTK液4℃常规低温保存大鼠离断后肢的效果. 方法 将30只Wistar大鼠随机分为UW液组、HTK液组及对照组(每组10只),形成后肢离断模型后,分别采用UW液、HTK液及生理盐水灌注离断肢体后,4℃保存.收集不同时间点的肌肉匀浆液及组织,观察生化指标和光镜下结构变化.结果 与对照组比较,UW液和HTK液组于相同时间点发生病理损伤程度轻,前者又较后者发生病理损伤程度轻.保存12 h,3组均出现线粒体肿胀空泡变性,UW液组肌纤维损伤轻.保存24 h,对照组出现肌纤维断裂成碎片,损伤为严重,UW液组和HTK液组变化基本类似,对照组、HTK液组和UW液组ALP(U/L)分别为3.62±1.32、3.37±0.84和2.68±1.59,ALT(U/L)分别为542.25±129.36、521.82±97.32和462.53±74.18,AST(U/L)分别为2200.12±687.61、2002.20±632.27和1742.87±396.09,CK(U/L)分别为313190.83±42041.32、283173.50±31488.87和271319.67±41147.52;LDH(U/L)分别为32409.50±4253.20、30382.50±2337.18和30047.83±4628.78,GLU(mmol/L)分别为0.242±0.041、0.240±0.044和0.252±0.049;LAC (mmol/L)分别为1.790±0.160、1.792±0.196和1.993±0.366,SOD(U/mL)分别为80.82±9.46、91.62±14.97和73.71±10.60,UW液组与对照组比较,ALP和GLU变化差异有统计学意义(P＜ 0.05);UW液组SOD与HTK液组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其余生化指标间差异无统计学意义(P＞0.05).总体生化指标UW液较HTK液结果好. 结论 应用器官保存液对离断肢体进行灌注保护可以有效的减缓骨骼肌组织损伤,延长组织活性;UW液较HTK液对离断肢体的保护效果更好.
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普通冰箱低温保存自体颅骨回植应用于儿童颅骨缺损2例
目的探讨普通冰箱低温保存自体颅骨州植应用于儿童颅骨缺损的临床效果,并与其他方法进行比较.方法利用普通冰箱低温保存自体颅骨瓣,回植时经煮沸高压蒸气灭菌后,原位回植于颅骨缺损处.结果2例颅骨缺损患者经治疗,回植骨瓣顺利完成爬行替代过程,达到愈合.结论该法应用于儿童颅骨缺损患者是切实可行的,不受任何条件限制,可随时进行颅骨回植,克服了其他方法的局限性,并具有保存方法简单,无排斥反应,不影响儿童头颅发育等优点.
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授精第3天4细胞及5细胞期胚胎的冷冻价值
目的 分析授精第3天4细胞及5细胞期胚胎冻融及移植后对临床结局的影响,探讨其冷冻价值.方法 收集270个冻融胚胎移植(FET)周期,授精第3天胚胎采用程序化冷冻法冻存,快速解冻法复苏后移植,根据冷冻日胚胎所含细胞数比较各细胞数胚胎复苏存活率,并分为4、5细胞组与≥6细胞组,比较两组间的临床妊娠率、种植率及因胚胎因素取消周期率(简称周期取消率).结果 (1)270个周期共解冻胚胎939枚,复苏存活率为65.3%(613/939);移植胚胎561枚,临床妊娠率27.2%(67/246),种植率15.2%(85/561);(2)4、5细胞组周期取消率显著高于≥6细胞组(P<0.01),且移植_胚胎数显著低于≥6细胞组(P<0.05),但胚胎复苏成功并移植后两组妊娠率、种植率及活产率均差异无显著(P>0.05).结论 冻存4、5细胞期胚胎与≥6细胞期胚胎妊娠率差异无统计学意义,提示具有冷冻价值.
