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卵子冷冻在体外受精-胚胎移植中的实验研究
目的:研究人类不同成熟期卵子冷冻与复苏的实验条件,观察慢冻速融后卵子形态、存活状况, 探讨卵子冷冻的方法.方法:收集自愿捐赠获得的辅助生殖周期中的卵母细胞进行慢冻速融,观察成熟卵子(MII )和未成熟卵子(MI +GV ) 的形态学变化以及未成熟卵冻融后体外成熟情况.结果:本实验冻存卵子47例,存活18例,含13例成熟卵子(MII )和5例未成熟卵子(MI +GV ),存活率38.30%.结论:本法冻融卵子有部分卵子获得短期存活,为今后卵子冷冻研究提供了一定的实验依据.
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复方丹参对人离体肝组织低温保存的保护作用
目的探讨复方丹参对人离体肝组织低温保存下的保护作用.方法采集2001～2005年20例行肝叶切除或肝段切除手术病人的正常肝组织,采用同体对照,分别放入复方丹参液(实验组)及平衡盐液(对照组)中,保存1,3,6h,分别进行常规病理检查,比较相同保存时间实验组和对照组标本的病理改变程度,同时将实验组和对照组各自不同保存时间段标本的病理改变程度进行组内比较.结果实验组不同时间段比较,其中保存1h组与保存3h组标本的病理改变无显著差异,保存6h组与保存3h组及保存1h组标本比较,病理改变有显著性;对照组不同时间段比较,随时间延长,病理改变有显著性;对照组与实验组同时间段比较,病理改变有显著性,且在相同保存时间段内,实验组的病理改变较对照组轻.结论复方丹参对低温保存下的人离体肝组织有保护作用,能延长人离体肝组织保存时间.
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一种适用于食品卫生采样的便携式冷藏箱
目前,由于没有便携式冷藏装置,在食品卫生监督检测工作中,常会碰到这样的情况:如有些熟肉制品(主要指烧烤肉、酱卤肉、肴肉)、冷饮制品、处理食物中毒时采集的可疑食品等,在取样后需要立即转入低温保存(要求0～4℃).以使微生物处于休眠状态,保证微生物检验项目结果的准确性.现由于没有可随手携带的冷藏设施,取样时,由于路途远、办理手续及其它原因耽误时间或遇特殊情况等,致使样品在车内常温放置时间长(特殊情况时长达8～12小时).
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日照市自然人群流行性乙型脑炎抗体水平调查
为了解不同人群流行性乙型脑炎(下称乙脑)的抗体水平,为乙脑疫苗的应用和预防乙脑提供可靠的参考依据,于1999年12月对日照市部分区县人群进行了抗体检测和免疫成功率的调查.1 材料与方法1.1 材料采用按不同年龄组和不同性别随机抽样的方法分别在莒县、五莲县和东港区共抽取445人作为检测对象.1.2 方法采集静脉血,分离血清低温保存备检.采用血凝抑制试验,血球由鹅血球改用鸽子血球,抗体滴度1:10以上为阳性,血凝素等试剂均由山东省卫生防疫站供给.
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红细胞深低温保存方法的比较研究
探寻可替代甘油并简化复温后洗涤过程的较理想的红细胞低温保护剂,为低温保存红细胞临床应用提供便利.依据血红蛋白溶液浓度与其在波长为412nm处吸光度的关系曲线,建立红细胞回收率评估方法,研究比较了使用5种低温保护剂实现人类红细胞液氮深低温保存效果的优劣.结果表明: 35.5% (w/v)甘油的保存效果佳,其回收率为97.84%; 其次为25% (w/v)右旋糖酐40, 其回收率为85.08%; 再次之为1M海藻糖(加载并孵育17.5h), 其回收率为55.35%; 回收率低的两组为1M海藻糖(未经孵育)和10% (w/v)的二甲亚砜,对应的回收率均不足35%.初步推断:右旋糖酐40是一种可望替代甘油的红细胞低温保护剂.
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血细胞的深低温保存与临床应用
本文对血细胞深低温保存的机制作一概述,介绍了近年来各血液成分的深低温保存技术、效果和临床应用.
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提高胚胎胰岛冷冻保存质量的实验研究
目的:研究三维组织细胞旋转培养系统(RCCS)对胚胎胰岛冷冻保存复苏后质量的影响.方法:将胚胎胰岛平均分为实验组1、2和对照组,实验组1、2冷冻保存胰岛,冷冻保存前后分别用RCCS培养和普通培养,对照组经RCCS培养新鲜胰岛.切取胚胎胰腺,经胶原酶V消化、纯化,培养3 d,然后进行标准冷冻保存,复苏后继续培养,并检测各组胰岛数量及活性.结果:纯化后每个胚胎收获胰岛多5 115.43 IEQ,少2 331.98 IEQ,平均(3 551.27±253.76) IEQ.实验组1胰岛细胞存活率、胰岛素释放量、胰岛素刺激指数均高于实验组2.结论:RCCS培养有利于胰岛细胞的生长繁殖,使其具有更好的分泌胰岛素能力,该方法同胰岛冷冻保存相结合,可以进一步提高胰岛的冷冻保存效果,为胰岛库的成功建立探索出一条新的途径.
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兔卵巢组织玻璃化冷冻的实验研究
目的:探讨玻璃化冷冻法保存兔卵巢组织的效果.方法:随机将25只新西兰雌兔分为对照组(5只)、慢速冷冻组(10只)和玻璃化冷冻组(10只),比较各组冻融前后卵巢组织学、超微结构、卵泡凋亡(原位末端标记法,TUNEL)和子宫系膜内移植后卵巢功能的恢复情况.结果:新鲜组织、慢速冷冻复苏组织和玻璃化冷冻复苏组织中正常形态卵泡比例分别为87.36%、81.96%和82.72%,两冷冻组正常卵泡比例均低于对照组,差异有统计学意义﹙P﹤0.05),但玻璃化冷冻组与慢速冷冻组差异无统计学意义(P＞0.05).3组间卵泡凋亡比率分别为21.4%、13.5%和17.1%,差异无统计学意义(P＞0.05);3组移植后兔动情周期出现率均为100%,动情周期出现天数差异无统计学意义﹙P＞0.05);移植存活的卵巢组织内可见各级形态正常的卵泡发育.结论:玻璃化冷冻可有效保存卵巢组织的结构和功能,是一种简单、可行的兔卵巢组织冷冻保存法.
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人卵巢组织冷冻保存的实验研究
目的:探讨冷冻保存对人卵巢皮质内各级卵泡形态及对组织体外培养的影响.方法: 取手术切除的30例患者的卵巢皮质,放入二甲基亚砜配制的冷冻保护液中,应用程序冷冻法保存于液氮内.冷冻前后取部分卵巢皮质行组织学检测;同时培养部分组织块观察上清中雌二醇分泌的变化.结果:冷冻后存活的始基卵泡,与新鲜组比较无显著改变(P＞0.05),初级卵泡的存活率显著下降(P＜0.05);而冷冻保存不会明显降低始基卵泡与初级卵泡总的存活率(P＞0.05).复温后卵巢组织中仅见1枚形态正常的次级卵泡.冷冻后培养上清中雌二醇水平与新鲜组比较无明显差异(P＞0.05).结论:程序冷冻法可以较好地保存人卵巢皮质内的始基卵泡,且不影响冷冻后卵巢组织的激素分泌.
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整体卵巢冷冻及移植的研究进展
卵巢组织冷冻是保存女性生育能力和内分泌功能的一种极具潜力的方法。卵巢组织移植后的缺血损伤导致卵泡大量丢失，同时由于小块卵巢组织所含的卵泡少，因此移植术后难以长久维持卵巢功能。整个卵巢行显微血管吻合移植术可避免移植后的缺血性损伤。适宜的整体卵巢的冷冻保存方法是施行整体卵巢移植的难点，目前未有统一的标准方法。综述国内外对整体卵巢冷冻及移植的研究进展，探讨如何选择合适的冷冻方法。
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卵巢移植的研究进展
卵巢移植是伴随肿瘤治疗技术的发展而逐渐建立起来的一项技术。卵巢组织冷冻及移植后健康婴儿的出生证明了此技术的可行性，特别是近年癌症患者低龄化趋势渐趋明显，以及大剂量放化疗导致的患者生育力严重下降、丧失，内分泌失调等诸多副作用，严重影响了癌症幸存者的生活质量。因此，作为一种年轻女性生育力的保存方法，卵巢组织冻存和移植技术成为近年的研究热点。目前该技术尚未完全成熟，移植效果会因冷冻方法、卵巢组织块大小、移植部位、抗氧化损伤、生长因子、机械因素等诸多因素的影响而不易确定。此外，卵巢移植技术也面临成功率较低，移植后将冻存卵巢组织内残存肿瘤细胞重新植入体内的风险，以及移植相关的伦理问题等许多亟待解决的问题。总之，目前尚未形成规范、统一的卵巢组织冻存、移植技术和效果评定标准，但可以相信，随着医学技术的发展和进步，卵巢组织冷冻及移植技术将会为女性肿瘤患者生育力和内分泌功能的保存带来福音。
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冷冻保存对人卵母细胞的影响
卵母细胞冷冻解冻后因存活率低、受精率低、胚胎发育能力差等,影响了它在辅助生殖医学中的应用.卵母细胞在冷冻过程中由于受到温度改变、渗透压改变、冷冻保护剂作用、冰晶形成等影响,可能会出现纺锤体分布和结构异常,染色体非整倍体和多倍体发生,透明带硬化,线粒体变化,细胞膜破裂等.研究并解决上述问题有助于提高卵母细胞冷冻技术.
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不同解冻液对冻融胚胎移植的影响
随着辅助生育技术的发展和完善,体外受精、胚胎移植(IVF-ET)技术已广泛用于临床,有40%以上IVF-ET患者有剩余胚胎冷冻[1].由于胚胎冷冻技术日趋成熟,增加了患者一次取卵妊娠率.如何增加冷冻胚胎复活率,提高冻融胚胎的妊娠率,是生殖医学领域医师不断探索的课题.我们利用两种不同配方解冻液对61个周期、58例患者的冷冻胚胎分2组进行冻融胚胎移植,以比较两种解冻液对冻融胚胎复活率、妊娠率的影响,以便更好地用于临床,提高冻融胚胎的妊娠率.
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冻存颗粒脂肪组织移植成活率的实验研究
目的 探讨以二甲基亚砜和海藻糖作为低温保护剂在低温储存后的颗粒脂肪组织的活性和自体脂肪移植两周、四周后的成活率.方法 将实验动物分组,获取脂肪并处理,分别通过葡萄糖转移检测法测定脂肪细胞活性.低温保护剂组加入等体积的二甲基亚砜和海藻糖,放置于-80℃深低温冰箱中冻存,两周后取出,复温后测定细胞活性,并进行移植设为冻存脂肪移植组.生理盐水组加入等体积的生理盐水,冻存复温、测定活性,并同步进行新鲜脂肪移植,设为新鲜脂肪移植组.并于自体移植两周、4周后获取移植物,比较移植物的体积和成活率.应用SPSS17.0软件,所获数据采用方差分析和t检验.结果 冻存前两组比较,P>0.05;冻存两周后两组比较,P<0.0005.两组不同时期脂肪移植物体积比较,P>0.05;移植后两周比较,P<0.0005;移植后4周,P>0.05.结论 -80℃条件下应用低温保护剂储存的脂肪,移植后较好地保持了体积和活性,适用于临床短期内重复移植需求.
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冷冻保存对人始基卵泡中颗粒细胞的影响
目的:探讨冷冻保存对人始基卵泡中颗粒细胞的形态及存活率的影响.方法:程序冷冻法保存人卵巢组织,采用常规组织学检测冷冻前后卵泡中颗粒细胞形态,并采用胶原酶消化联合镜下机械分离卵巢组织中的始基卵泡,采用双荧光标记,检测冷冻前后人卵巢组织分离始基卵泡中颗粒细胞的存活比例.结果:形态学检测发现,冷冻前卵巢组织中颗粒细胞发生损伤的始基卵泡占12.4%,卵母细胞损伤20.6%;冷冻后两者的比例分别为23.3%与24.4%.荧光标记的冷冻前卵巢组织中颗粒细胞存活的始基卵泡占72.7%,＜50%颗粒细胞存活的卵泡仅占3.6%,卵母细胞存活率为85.5%;冷冻组中颗粒细胞存活的始基卵泡占79.5%,＜50%颗粒细胞存活的卵泡仅占2.5%,卵母细胞存活率达86.1%.结论:冷冻复温的过程主要破坏卵泡中的颗粒细胞,而对卵母细胞的损伤很小.
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改良Hemi-straw与Cryoleaf法对人卵和胚胎玻璃化保存效果的比较
目的 比较改良的Hemi-straw与Cryoleaf法对人卵子和胚胎的玻璃化保存效果.方法 将接受体外受精-胚胎移植周期中剩余的98枚未受精卵和76枚废弃胚胎,分别采用Cryoleaf(A组)与改良的Hemi-straw(B组)为载体进行玻璃化冷冻,复苏后观察并计算两种玻璃化载体的卵子存活率,24 h继续存活率与卵裂率;胚胎存活率,24h继续存活率及囊胚形成率.结果 Cryoleaf与改良的Hemi-straw法保存人未受精卵分别为43、55枚,复苏存活分别为29(67.4%)、31(56.4%)枚,24 h继续存活分别为23(53.5%)、25(45.5%)枚,卵裂分别为3(7.0%)、1(1.8%)枚,两种载体差异不明显(P>0.05).Cryoleaf与改良的Hemi-straw法保存废弃胚胎分别为39、37枚,复苏存活分别为29(74.4%)、33(89.2%)枚,24h继续存活分别为28(71.8%)、33(89.2%)枚,形成囊胚分别为5(12.8%)、1(2.7%)枚,两种载体差异不明显(P>0.05).结论 改良的Hemi-straw与Cryoleaf法具有相似的保存效率,但前者具有材料来源广泛,价格低廉的优越性.
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Rh阴性红细胞的低温保存及临床应用
冷冻红细胞虽已用于临床,但-196℃保存[1]需要大容量液氮罐及制氮设备,方法复杂,设备昂贵.自2000年以来,我们应用甘油作保护剂,-80℃保存Rh阴性红细胞134 U,临床输用134 U,取得良好的临床效果,现报告如下.
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猪主动脉脱细胞血管基质制备及保存
目的 探讨脱细胞血管基质的制备和保存方法.方法 采用酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法处理猪胸主动脉制备脱细胞血管基质, 标本行苏木精-伊红染色,大体、光镜及扫描电镜、透射电镜观察.并将标本放入液氮中保存,于保存1、2、3月分别取标本用20 g/L戊二醛固定,扫描电镜观察.结果 经该法处理的猪血管细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好.液氮保存后1、2、3月扫描电镜观察与新鲜标本无明显差别.结论 酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法,制得的脱细胞血管基质可放入液氮中保存.
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二甲基亚砜和1,2-丙二醇对深低温保存兔颈总动脉平滑肌细胞的影响
①目的用二甲基亚砜(Me2SO)和1,2-丙二醇(PROH)深低温保存兔颈总动脉,评价两种保护剂对深低温保存复温后血管平滑肌细胞再生能力和超微结构的影响.②方法将兔颈总动脉用含有1.5 mol/L的Me2SO或1.5 mol/L PROH的低温保护剂深低温保存,并在冰袋中缓慢复温,新鲜血管作为对照.复温后和新鲜血管的平滑肌细胞进行体外培养,观察平滑肌细胞的再生能力;同时在透射电镜下观察平滑肌细胞的超微结构.③结果体外培养结果显示,新鲜血管的平滑肌细胞体外培养24 h后开始生长,PROH保存血管的平滑肌细胞在培养24～36 h后开始生长;Me2SO保存血管的平滑肌细胞体外培养36～48 h开始生长,而且再生细胞的数目显著少于前者,生长速度慢.透射电镜下,与新鲜血管的平滑肌细胞相比,PROH或Me2SO冷冻保存后血管的平滑肌细胞的线粒体等细胞器均无显著变化.但是Me2SO保存血管的平滑肌细胞核染色质的电子密度发生显著变化,异染色质的电子密度明显降低,与新鲜或PROH深低温保存血管平滑肌细胞核常染色质的低电子密度和异染色质的高电子密度明显不同.④结论 1.5 mol/L PROH能够有效地保持平滑肌细胞的活性,并且对细胞的再生能力没有明显的损伤作用.Me2SO损伤平滑肌细胞的再生能力,同时引起平滑肌细胞核染色质超微结构的变化.
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细胞低温生物学研究进展
众所周知,离体的人体细胞、组织和器官在常规方式下不能长期保存.为保持这些离体生命材料的生物学功能,必须采用长期保存措施.而在生物医学研究中,比如细胞动力学、基因、干细胞治疗等,也希望某一阶段细胞能长期保持,以保证有充分的时间进行研究.本文简要讨论目前为止所发现的这些因素以及相应的低温损伤机制和预防措施.其中,包括著名的Peter Mazur关于低温损伤的两点假定.
