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血小板4℃保存能改善其功能吗?
1969年,Murphy与Gardner报道,4℃条件下保存的血小板输人人体后会迅速地被血液循环清除.他们以及其他人也证明了室温(22C)保存的血小板具有更好的恢复功能和生存的特点,低温保存的血小板生存时间为2天～3天,室温保存的生存时间长达7天～9天.低温保存的血小板在人体内会迅速被清除,这对血液的保存产生了深刻的影响.数十年来,所有的血小板制品均在室温下保存,为防止细菌生长,将血小板保存期限制到5天.
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2种血浆速冻方法的比较
血浆速冻是采供血过程中的一个重要环节,有冷链时间链的要求.血浆速冻方法主要有平板接触式血浆速冻机法和-50℃低温保存箱法,我们对这2种方法进行了比较,报告如下.1材料与方法1.1材料我站采集的400 ml全血中所分离的血浆.1.2仪器,平板接触式血浆速冻机BMS-BOS F型(德国BMS血液技术公司).-50℃低温保存箱MDF-U460BR(日本三洋公司).智能血液温度蕊片(上海若骊).
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低温保存提纯人DNA质量评价
在中华造血干细胞志愿捐献者资料库的建设中,常常需要对入库样本的HLA分型结果进行核查鉴定或进行高分辨检测,因此常需要将所用DNA进行长期保存.这些长期保存的DNA在浓度、纯度及DNA分子结构方面有无变化或变化情况如何,由于我国造血干细胞资料库建库时间较短,这方面未见详细报道.为了解长期冰冻保存人体提纯DNA的质量情况,我们对低温保存2a前后的提纯人DNA进行了质量评价,现报告如下.
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改良血小板添加液低温(10℃)保存血小板的动物实验研究
目的 对添加海藻糖的血小板添加液替代70%血浆冷藏的血小板进行动物体内输注效果评价.方法 采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板,将浓缩血小板分3组保存.血浆常温组:添加100%血浆,22℃保存;添加液低温组:添加70%PAS-ⅢM/30%血浆,10℃保存;冰冻保存组:添加100%血浆,-85℃保存.以新鲜血小板为对照,常温血浆保存组在d 3,添加液低温保存组在d 3、7、9,冰冻保存组在d 20复苏后分别检测血小板缺乏兔模型的血小板24 h回收率和生存率.结果 除保存9 d的添加液低温组血小板存活率明显低于新鲜血小板存活率(P<0.05)外,血浆常温组、添加液低温组以及新鲜血小板的24 h回收率和存活率相互比较差异均无显著统计学意义(P>0.05).冰冻保存组血小板24 h回收率和存活率均低于其他各组(P<0.05).结论 改良的PAS-ⅢM能够替代血浆在低温条件下用于血小板的保存,能维持血小板的体内功能.
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临床应用低温保存血小板的8年回顾性研究
目的 探讨低温保存血小板应用于临床应的有效性和安全性.方法 对本院内外科8年来因血小板减少引起出血以及有严重出血倾向、并输注了低温保存血小板的病例,作回顾性分析:1)低温保存血小板的临床使用比例;2)低温保存血小板在临床各病种的应用情况;3)低温保存血小板的输注疗效;4)低温保存血小板输注的不良反应比例.结果 低温保存血小板在本院的用量逐年增加,8年间其平均用量占总用血量的12%(23 857/197 793);输注的低温保存血小板的A、B、O及AB红细胞血型的比例分别为27%、31%、33%和9%;抽取8年间临床使用低温保存血小板的病例1 900例,输注了低温保存血小板的主要病种主要有14种疾病(严重复合伤、颅脑外伤、DIC、肝硬化食管静脉曲张破裂出血、产后大出血、髋关节置换术、冠状动脉搭桥子宫内膜癌、卵巢肿瘤、腹膜后肿瘤、急性白血病、再生障碍性贫血、化疗和放疗所致的血小板减少、其他原因所致的血小板减少);追踪356例输注低温保存血小板的病例,其96%(341/356)患者0.5-2 h内出血完全或基本停止,止血效果很明显,72%(256/356)血小板计数(Plt)比输注前明显升高;输注低温保存血小板后发生过敏反应者6例,发热反应者9例.结论输注低温保存血小板具有明显止血和提高外周血Plt的效果.
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低温保存血小板在外科手术的应用
目的研究低温保存血小板在外科应用的有效性和安全性。方法输注对象为外科患者术中、术后出血或血小板减少引起出血以及有严重出血倾向患者。观察指标①输注前、后2h出血时间；②输后伤口停止出血时间；③输注前、后1h患者血小板计数；④根据①、②和③的结果判断输注低温血小板是否有效；⑤术前、术后血小板计数；⑥不良反应。结果出血时间：输前（9±3）min，输后（4±2）min(P＜0.01)；输后1h比输前血小板升高(5～42)×109/L；止血有效率为95％（226/238）。血小板计数，术后比术前下降(130±69)×109/L。过敏反应4例，发热反应5例。结论输注低温保存血小板具有明显止血和提高外周血血小板计数的效果。
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冰冻保存血小板的研究
目前国内外通用的血小板保存方法及供应数量、供给及时性远不能满足临床输用血小板需求量的增加,常规保存方法(22℃,5d)极大地限制了血小板的临床应用.20多年来,人们一直在探索长期、稳定保存血小板的方法[1].冰冻保存可能是维持生物细胞、组织活性的理想的方法之一,也是许多研究人员目前致力研究的重要方向[2].然而血小板以其寿命短、易激活、不稳定等特殊生物学特性,使这一方法的具体实施困难重重.至今冰冻保存血小板领域仍有许多问题未得到共识,关于它的应用和操作等仍在探讨与优化之中.本文仅就这一方面的研究进展做一综述.
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手工采集血小板的制备与临床应用
近年来,随着血细胞分离机的推广应用,我国机采血小板的用量逐年上升,而手工采集的血小板在临床的应用越来越少,造成手工采集全血中血小板资源的严重浪费.而在国外,尤其是欧美国家,手工采集的血小板始终占血小板用量的大多数.何以手工采集的血小板在我国不能大量应用?手工采集的血小板有无比较优势?笔者就国内外手工采集血小板的应用研究进展作一介绍.
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三七总皂苷对大鼠肝脏低温保存作用的实验研究
目的研究三七总皂苷(PNGS)对大鼠肝脏低温保存的影响及其作用机理.方法采用大鼠离体肝脏再灌注模型(IPRL),用Fura-2法测定DMEM液中加入不同浓度的PNGS置低温保存2 h后肝细胞内钙离子浓度; 将含有不同浓度PNGS的乳酸林格氏液(LR)低温保存24 h的肝脏再灌注30 min后检测肝脏功能、氧自由基代谢产物、能量物质和胆汁流量并进行形态学观察.结果大鼠肝细胞内钙离子浓度、MDA、AST、ALT及LDH浓度明显低于对照组,而SOD、ATP、TAN、EC含量及胆汁引流量则高于对照组(P＜0.01),NGS对大鼠肝脏的保护作用显示出剂量依赖性,在200～600 mg范围内随剂量增加保护作用随之增强(P＜0.01),在800～1 000 mg范围内虽有增强,但差异无显著性意义(P>0.05).结论 PNGS可通过抑制钙超载、抗氧自由基损伤、促进能量物质代谢等多种机理减轻大鼠肝脏在低温保存时的损伤.
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钙超载对低温保存肝脏细胞的损伤作用
目的探讨钙离子对肝脏的损伤作用.方法应用含胶原酶保存液灌注大鼠肝脏制成不同细胞成活率的肝细胞悬液,低温保存肝脏细胞.应用Fura-2/AM标记测细胞内钙. 结果①低温保存2小时肝细胞: 实验1组(细胞成活率为5%)肝细胞内钙值为(1055.0±30.79) nmol/L; 实验2组(细胞成活率为10%)肝细胞内钙值为(853.0±20.42) nmol/L; 实验3组(细胞成活率为30%)肝细胞内钙值为(616.0±13.20) nmol/L; 实验4组(细胞成活率为50%)肝细胞内钙值为(562.0±26.06) nmol/L; 实验5组(细胞成活率为70%～80%)肝细胞内钙值为(318.0±13.01) nmol/L; 实验6组(细胞成活率为90%)肝细胞内钙值为(114.6±6.11) nmol/L.②低温保存24小时肝细胞: 实验A组(细胞成活率为10%)肝细胞内钙值为(1704.0±70.11) nmol/L; 实验B组(细胞成活率为50%)肝细胞内钙值为(1125.0±23.22) nmol/L.随着细胞成活率的降低,细胞内钙值逐渐升高; 在同样细胞成活率情况下,随着保存时间延长(2小时与24小时)细胞内钙值增高1倍左右.结论在低温保存过程中,钙超载是造成肝脏细胞缺血再灌注损伤的一个主要因素.
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不同温度对体外模拟体内生理环境寄养断肢系统的影响研究
目的 探讨不同温度对体外模拟体内生理环境寄养断肢系统的影响. 方法 健康成年雄性巴马小型猪6只,体重22～30 kg.取6只猪24个肢体随机分为4组(n=6),将肢体置于体外模拟体内生理环境寄养断肢系统,A组于常温(26℃)下,B、C、D组分别于4、10、18℃低温下体外寄养断肢.12h后取各组肢体骨骼肌,行组织学及透射电镜观察骨骼肌结构,实时定量RT-PCR检测TNF-a及IL-1β mRNA表达. 结果 组织学观察示,A组肌纤维变性,肌细胞严重破坏,断裂肌纤维间有大量炎性细胞浸润;B、C、D组组织间轻度水肿,肌膜完整,血管周围偶见炎性细胞浸润,其中C组细胞形态良好.透射电镜观察示,A组肌纤维排列紊乱,可见多处局灶溶解性坏死；B组肌纤维排列较整齐,肌膜尚完整,线粒体轻度肿胀,絮状变性；C组可见大量肌纤维排列整齐规则,肌节清晰；D组肌纤维排列紊乱、不规则,肌纤维溶解.实时定量RT-PCR示,A组TNF-t、IL-1β mRNA表达水平均显著高于B、C、D组(P＜0.05)；B、C组表达均低于D组,C组低于B组,比较差异亦均有统计学意义(P＜ 0.05). 结论 在体外模拟体内生理环境寄养断肢系统中,温度对断肢的保存具有重要作用,其中10℃保存离断肢体可显著抑制再灌注致骨骼肌细胞损伤.
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低温保存的组织工程骨修复骨缺损的实验研究
目的探讨低温保存的组织工程骨修复骨缺损的能力及低温保存的可行性. 方法 将人源性生物衍生骨材料复合成骨细胞构建的组织工程骨,在4℃ 和-196℃的温度环境中保存3个月和6个月,同时以未行低温保存的组织工程骨和生物衍生骨材料作为对照,分别修复实验兔桡骨的长段骨缺损.80只成年日本大耳白兔,随机分为4个实验组(左前肢植入材料)A3组:组织工程骨在4℃ 保存3个月;A6组:组织工程骨在4℃ 保存6个月;B3组:组织工程骨在-196℃ 保存3个月;B6组:组织工程骨在-196℃ 保存6个月.2个对照组(右前肢植入材料)C组:组织工程骨未行低温保存;D组:单纯生物衍生骨材料.于术后2、4、6和12周行大体和组织学观察,并于6周和12周行X线片检查和生物力学检测. 结果 术后大体观察,A3、A6、B3、B6和C组间无显著差异,D组骨痂少且断端更为明显.各时间点组织学观察,A3、A6、B3、B6和C组植入材料周围胶原及骨痂均较D组明显,术后12周组织学评分,D组与其它各组比较 P值＜0.05.X线片示D组植入材料皮质骨无明显变化,骨痂较少;余各组12周植入材料与自体骨融合,髓腔开通,骨折线消失,塑形好.生物力学检测D组与其它各组比较P值＜0.05. 结论 以4℃和-196℃保存方法能有效保存组织工程骨,对修复骨缺损有明显效果,这一方法适宜推广应用.
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组织工程肌腱保存过程中细胞存活率研究方法初步探讨
目的探讨组织工程肌腱保存过程中细胞存活率研究的方法. 方法采用碘化丙啶(PI)将第4代人成纤维细胞的死细胞染色,双苯并咪唑染料(Ho)染色活细胞后经适当波长紫外光激发,分别产生红色荧光和蓝色荧光,利用流式细胞仪区分活细胞和死亡细胞;将组织工程化肌腱种子细胞悬液4 ml(6.0×105个/ml)平分成两管,其中一管反复冻融,将细胞冻死;另一管不冻.再将两管细胞按不同比例混合,采用荧光染色流式细胞仪分析,研究其量效关系;并用荧光摄影,图像分析,即刻及2小时荧光标记到流式细胞仪,检测对细胞存活率的影响. 结果荧光染色流式细胞分析可反映加入冻融死细胞比例与存活细胞的量效关系,即细胞存活率与未冻融细胞和冻融细胞比例分别成正、负相关,相关系数r=0.970(P＜0.05);荧光摄影后图像分析也显示了同样的量效关系,r=0.982(P<0.05);荧光标记后2小时检测比即刻检测细胞存活率降低,但差异无统计学意义(P>0.05);通过荧光显微镜可直接观察组织工程化肌腱上的细胞. 结论 PI和Ho荧光染色后流式细胞仪分析及荧光摄影是组织工程肌腱保存过程中细胞存活率研究的较好方法.
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冷冻保存胎兔颅骨骨膜修复关节软骨缺损的实验研究
为探讨关节软骨缺损的修复方法,采用家兔30只,平均分成两组.在每个动物的双侧髌股关节股骨关节面作4 mm×7 mm全层软骨缺损.将经二步冷冻法保存的胎兔颅骨骨膜移植于一组动物一侧后肢作为实验组,另一侧用自体骨膜移植作为自体对照组.在另一组动物的一侧后肢用新鲜胎兔颅骨骨膜移植作为新鲜对照组,另一侧关节软骨缺损不修复作为空白对照组.术后肢体不作外固定.16周后取材,经大体观察、组织学观察及氨基酸成分分析.结果发现,经冷冻保存的胎兔颅骨骨膜移植后能形成透明样软骨,与自体对照组无显著性差异(P>0.05),与新鲜对照组及空白对照组主要指标有显著性差异(P<0.05).氨基酸分析示实验组新生物接近纤维软骨(P>0.05).认为,冷冻胎兔颅骨骨膜移植为关节软骨缺损的修复提供了实验依据.
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同种瓣的制作与临床应用
目的报告液氮深低温下保存同种带瓣血管的制作方法、组织活性及临床应用效果.方法制作同种瓣24个、抗生素灭菌、梯度降温后置于液氮中保存,并测定冷冻保存后同种瓣的组织活性.同种瓣临床应用5例,其中法洛四联症、肺动脉闭锁2例,先天性主动脉瓣狭窄1例,法洛四联症术后发生室间隔缺损残余漏伴肺动脉瓣重度关闭不全1例,Bentall术后发生感染性心内膜炎1例.结果抗生素灭菌、液氮深低温技术保存同种瓣具有良好的组织活性,糖代谢测定24h葡萄糖消耗大于16mg/dl,组织培养见成纤维细胞生长良好.临床移植5例均成功,术后随访3～8个月,同种瓣无狭窄或关闭不全.结论液氮深低温保存同种瓣安全可靠,临床应用早期效果良好.
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低温保存对山羊大动脉细胞形态的影响
目的观察低温保存过程对山羊动脉细胞形态的影响. 方法将12段山羊动脉按不同的降温速率分成4组,分别用透射电子显微镜和扫描电子显微镜观察冻存前后的动脉细胞形态. 结果与正常血管组织相比,0.5 K/min组和0.1 K/min组虽细胞间连接紧密,但内皮细胞附着松散,出现大的空泡,有的平滑肌细胞肿胀,细胞质苍白多水,线粒体收缩;还有的虽平滑肌细胞轻微肿胀,但细胞器肿胀严重破坏. 5 K/min组和2 K/min组内皮细胞与基膜大量脱离,内皮细胞和平滑肌细胞破坏严重,出现核溶解及线粒体一些不能恢复的变化. 结论经低温保存后的山羊主动脉与新鲜组织的区别明显,细胞组织形态被破坏,低温保存的降温速率越快,破坏越严重.
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深低温保存人视网膜的酶组织化学及超微结构观察
目的 观察深低温保存不同时期人视网膜的酶组织化学及超微结构变化.方法 以酶组织化学染色法测定深低温保存不同时期(275、704 d)及对照组视网膜琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase, SDH)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)、腺苷三磷酸酶(ATPase)活性,并观察视网膜组织结构及超微结构改变.结果 深低温保存不同时期及对照组的人视网膜SDH、LDH及ATPase活性差异无显著性意义;光镜下见深低温保存组视网膜神经纤维层、外网层及杆锥层积液略多;透射电镜下神经纤维结构正常,细胞核形态、结构正常,线粒体不同程度肿胀,个别空泡形成.结论 深低温法是视网膜的活性保存方法之一,有望为临床视网膜移植提供材料.
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低温状态下人乳对人类精子的保护作用
本课题研究人乳对人类精子低温状态(0℃-4℃)下的保护作用.方法 取正常人精液30份,每份精液平均分为2个标本,成为实验组(A组)、对照组(B组).A组中加入等量人乳,对照组加入等量冷冻保护液,将两组同时慢速降温(0.8℃-1℃/分钟),终降至0℃-4℃保存2天.结果 实验组精子保存24小时,活率、活力分别由(77.7±4.3)%,(70±3.5)%降至(66.5±3.8)%,(62.3±3.4)%.而对照组精子已全部死亡.结论 人乳对人类精子低温(0℃-4℃)下有明显保护作用.
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人乳在人类精子低温状态下的保护作用
目的 研究人乳对人类精子低温状态(O～4℃)下的保护作用.方法 取正常人精液30份,每份精液平均分为2个标本,分为实验组(A组)、对照组(B组).A组中加入等量人乳.B组加入等量冷冻保护液,将两组同时慢速降温(0.8～1℃/min).终降至0-4℃保存2d.结果 实验组精子保存24h,活率、活力分别由(77.7±4.3)%、(70±3.5)%降至(66.5±3.8)%、(62.3±3.4)%.而对照组精子已全部失活.结论 人乳对人类精子低温(0～4℃)下有明显保护作用.
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低温保存灭活同种异体颅骨修补颅骨缺损
目的 探讨低温保存灭活同种异体颅骨修补颅骨缺损的临床价值.方法 对7例颅骨缺损患者采用低温保存灭活同种异体颅骨修补颅骨缺损,并对治疗效果进行评价.结果 本组7例患者均手术修补成功,切口一期愈合,头颅外形美观,骨瓣固定牢固,无感染、出血、皮瓣坏死及排异现象,远期可见骨瓣与受体骨部分融合.结论 采用低温保存灭活同种异体颅骨修补颅骨缺损操作简单,费用低廉,能减轻患者经济和心理负担,尤其适合基层医院开展.
