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PRL-3基因对结直肠癌细胞形态及粘附、运动能力的影响
目的 探讨PRL-3的过表达或敲低对结直肠癌细胞相应的生物学特性的影响.方法 常规进行细胞培养,应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞结构;应用运动小室实验检测PRL-3对结直肠癌迁移能力的影响;应用细胞粘附实验测定细胞在Ⅰ型胶原上的粘附性.结果 粘附实验结果表明,与SW480/EGFP/mock和SW480/EGFP细胞相比,SW480- EGFP- PRL-3细胞的粘附能力增强,而SW480-PRL-3-KDI细胞的粘附能力减弱,差异有统计学意义( F=22.013,P<0.01).运动小室实验证明,SW480/EGFP、SW480-EGFP-PRL-3、SW480/EGFP/mock及SW480-PRL-3-KD1细胞的运动能力差异有统计学意义(F=21.368,P<0.01),说明PRL-3与结直肠癌细胞的运动迁移能力有关.结论 PRL-3基因是结直肠癌细胞粘附、迁移的促进基因.
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军团菌入胞影响因素及过程
军团菌(Legionella)属于胞内寄生菌,其粘附、侵入细胞是军团致病的第一步,也是关键步骤,多种因素影响这一过程,如Lcl、Flagellin、Pilin、MOMP、MIP、Hsp60、Hsp70等蛋白、rtxA和enhC基因、棘阿米巴和金属离子Zn+等.本文旨在对影响军团菌入胞的因素及方式做简要概述,帮助初步探索军团菌的研究者提供系统的认识,以及通过对入胞机制的认识,利于军团菌病的预防和治疗.
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芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与转移的影响
目的:研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与转移的影响.方法:MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;细胞-基质粘附试验检测AE对MDA-MB-231细胞粘附纤连蛋白(FN)、层连蛋白(LN)能力的影响;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力的影响;伤口愈合试验检测AE对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响.裸小鼠模型观察AE对MDA-MB-231细胞实验性转移的影响.结果:80 μmol/L AE能显著抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力,显著抑制MDA-MB-231细胞粘附FN、LN的能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(34.99±2.63)%,(28.73±7.00)%.作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE能显著抑制MDA-MB-231细胞的迁移,80 μmol/L AE处理的MDA-MB-231细胞在裸小鼠中形成肺转移结节的数量、体积明显减少.结论:AE抑制MDA-MB-231细胞的转移,其作用机制与抑制MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力有关.
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龙葵对人结肠癌RKO细胞粘附、移动和侵袭的影响
目的:研究龙葵对人结肠癌RKO细胞粘附、移动及侵袭的影响.方法:不同浓度龙葵作用RKO细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测龙葵对RKO细胞增殖作用,CytoSelectTM 48-Well Cell Adhesion Assay检测RKO细胞与基质粘附能力,划痕实验检测RKO细胞移动能力,CytoSelectTM 24-Well Cell Invasion Assay检测RKO侵袭能力.结果:终浓度400~1 600 μg/mL龙葵可以显著抑制RKO细胞增殖,终浓度100~400 μg/mL龙葵可以抑制RKO细胞粘附、移动及侵袭能力.结论:龙葵可以抑制RKO细胞增殖,降低RKO细胞粘附、移动及侵袭能力.
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复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响
目的:研究复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响.方法:体外培养胃癌细胞系SGC-7901,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用粘附试验、Transwell趋化运动和Matrigel侵袭实验,研究复方苦参注射液及其不同浓度下对SGC-7901细胞的粘附、运动以及侵袭能力的影响.结果:复方苦参注射液浓度在0.25、0.5、1.0、1.5 mg/ml时均有一定的抑制胃癌SGC-7901细胞增殖的作用,且呈明显的量效和时效关系.复方苦参注射液不同浓度处理SGC-7901细胞后,体外粘附、侵袭和运动能力呈剂量依赖性下降.经复方苦参注射液(1.5 mg/ml)作用后SGC-7901细胞CD44V6蛋白表达减弱,胞浆棕黄色颗粒减少.结论:复方苦参注射液可以抑制胃癌细胞生长,降低细胞粘附、侵袭和运动能力,其机制可能与抑制CD44V6蛋白表达有关.
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当归对黑色素瘤细胞粘附、侵袭、运动和转移能力的影响
目的:研究中药当归对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-BL6生长、粘附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用MTT法测定当归对B16-BL6细胞增殖能力的影响,采用细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察当归对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响.结果:当归水提液能显著抑制B16-BL6细胞的增殖;对B16-BL6细胞与基底膜成分LN的粘附有双向调节的作用;对B16-BL6细胞穿越基底膜的运动能力有显著抑制作用但对B16-BL6细胞侵袭基底膜能力没有显著影响.低剂量当归能明显减少小鼠肺转移结节数目,减轻肺转移程度.结论:当归提取液能够抑制黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的转移,作用可能与其能够抑制B16-BL6细胞外基质的粘附以及降低B16-BL6的运动能力有关.
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白藜芦醇影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的实验研究
目的:研究白藜芦醇对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响.方法:以MTT法检测白藜芦醇对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的细胞毒作用;用Transwell小室法检测白藜芦醇对HO-8910PM细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验检测白藜芦醇对HO-8910PM细胞粘附能力的影响.结果:白藜芦醇作用细胞6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外趋化运动和粘附能力,其中100 μmol/L抑制率分别为(30.1±10.8)%,(34.27±1.28)%,但白藜芦醇并不影响HO-8910PM细胞侵袭人工基底膜能力.结论:白藜芦醇能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的运动和粘附能力,是潜在的抗肿瘤转移药物.
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茶黄素对Ox-LDL诱导单核-内皮细胞粘附作用影响的研究
采用硫酸铜诱导低密度脂蛋白(LDL)氧化,细胞粘附实验,细胞ELISA方法测定内皮细胞间粘附因子(ICAM-1)和血管内皮细胞粘附因子(VCAM-1)表达水平,研究了茶黄素(TFs)对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)损伤血管内皮细胞导致单核细胞粘附的影响.结果显示,茶黄素(TFs)能显著抑制由Ox-LDL诱导的单核细胞-血管内皮细胞粘附效应以及细胞间粘附因子(ICAM-1)和血管内皮细胞粘附因子(VCAM-1)的表达,并呈现浓度剂量正相关性.提示,TFs抑制ICAM-1和VCAM-1的表达是其抑制单核-内皮细胞粘附和抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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糖尿病大鼠红细胞在脑微血管的粘附
红细胞(red blood cell, RBC)是血液中极其重要的细胞成分,糖尿病时红细胞可以与血管内皮细胞(endothelial cell, EC)粘附,RBC对EC的粘附增强与糖尿病血管并发症严重程度有关.
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呼吸道上皮细胞与致病菌相互作用--上皮细胞内吞细菌实验研究
目的:呼吸道上皮细胞在防御这类机会致病菌感染时发挥了重要的作用.本研究旨在探讨上皮细胞能否清除胞内的绿脓杆菌,胞内模式识别受体Nods蛋白家族是否参与胞内杀菌,防御素是否能通过促经克雷伯杆菌粘附到上皮细胞而被上皮细胞内在化而清除.
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一种测定癌细胞迁移能力的便捷方法
目的和方法:用聚四氟乙稀制作内径1.4 c的小圆筒,以一片聚碳酸酯核孔膜(孔径8μm,中国科学院上海原子核研究所提供)和一片醋酸纤维酯微孔滤膜(孔径5μm,上海医药工业研究院提供)将小圆筒分隔成上下二个小室,上室高1.8 cm,下室高0.3 cm,二室间以螺丝固定.将1 mL 1640培养液培养的人胃腺癌细胞(SGC-7910)或B16黑色素瘤细胞(二细胞株均由中国科学院上海药物研究所提供)置于上室,下室加同样的培养液,保持上下二室的培养液液面相平.CO2培养箱37℃培养.培养结束后取出微孔滤膜,用70%乙醇固定,H.E染色.将滤膜等分为四个象限,用光学显微镜随机计数每个象限中二个视野内穿过核孔膜并粘附在微孔滤膜上的癌细胞数.结果:如此处理的二类癌细胞都有能力迁移通过核孔膜均匀地粘附在微孔滤膜上.计数观察清晰容易.并且随着癌细胞孵育时间(5~30 h)的延长,迁移到膜上的细胞数也增加.随着所用细胞浓度(5×104~4.5×105细胞数/mL)的增加,迁移到微孔滤膜上的细胞数也增加.将药物(阿霉素,甲2巨球蛋白-广谱蛋白酶抑制剂)置于上室与癌细胞同孵育,可以观察到药物的不同浓度和不同的持续作用时间,能够明显地影响癌细胞的迁移能力.结论:采用此种微孔滤膜腔法测定癌细胞的迁移能力,较之以往使用的琼脂糖移植法和毛细血管法方法更简便,加入的癌细胞体积可达1 mL,并且用化学蚀刻扩孔制成的核孔膜,微孔呈直筒状,孔径一致,膜耐高温,化学稳定性极好.这些均为实验结果的准确性提供了保障.癌细胞的迁移能力与其转移特性密切有关.这一方法的建立,将为在离体条件下观察癌细胞转移特性及药物对癌细胞转移能力的影响提供了可行的手段.
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血管平滑肌细胞对联合培养内皮祖细胞黏附、增殖与形态的影响
目的:探讨血管平滑肌细胞对联合培养的内皮祖细胞黏附、增殖与分化的影响.方法:从人脐血中分离纯化内皮祖细胞并鉴定;建立内皮祖细胞和平滑肌细胞的联合培养模型;细胞粘附实验测定内皮祖细胞的粘附能力;形态学观察内皮祖细胞的分化与增殖.结果:与血管平滑肌细胞联合培养的内皮祖细胞的粘附能力比单独培养时提高了63%,长梭形细胞数量增加,同时克隆形成单位的数量下降了约60%.结论:血管平滑肌细胞促进了内皮祖细胞的粘附与分化,同时抑制了内皮祖细胞的增殖能力.
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金黄色葡萄球菌对中性粒细胞粘附特性的影响
目的:研究中性粒细胞在外源病原微生物金黄色葡萄球菌及其分泌物刺激而免疫激活状态下的粘附特性,考察不同的细菌浓度对中性粒细胞粘附特性的影响.材料与方法:采用微管吸吮技术测量大鼠中性粒细胞经不同浓度金黄色葡萄球菌及其分泌物刺激后与内皮细胞的粘附特性.结果:中性粒细胞经金黄色葡萄球茵免疫激活后与内皮细胞的粘附力和对照组比较均显著增高,但随着细茵浓度的提高而表现出饱和效应;用金黄色葡萄球茵分泌物(培养液)处理中性粒细胞后,其与内皮细胞的粘附力和对照组比较却有所降低.将经细菌处理后的中性粒细胞分离出再与内皮细胞黏附.黏附力增加幅度更大.结论:中性粒细胞经金黄色葡萄球菌免疫激活后粘附分子表达增加,但金黄色葡萄球菌分泌物可能对中性粒细胞粘附分子表达起抑制作用.在此过程中,内皮细胞可能受到金黄色葡萄球菌及其分泌物的损伤.
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肾小管上皮细胞与基底膜的粘附力学特性
目的:研究模拟缺血、缺氧、缺血缺氧三种条件下肾小管上皮细胞与基底膜的粘附力学特性。材料与方法:利用微管吸吮技术测定肾小管上皮细胞与人工基底膜的粘附力。结果:模拟缺血、缺氧、缺血缺氧三种模型中肾小管上皮细胞与基底膜的粘附力均较正常情况明显降低。结论:不同模拟损伤因素对粘附力的影响不同,其中缺血缺氧组粘附力小,单纯缺血组的影响较小。这些结果提示,在一定条件下,氧缺乏比缺血情况更能影响肾小管上皮细胞与基底膜的粘附作用。
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幽门螺杆菌对胎儿胃粘膜组织粘附作用的研究
目的了解不同幽门螺杆菌(Helicobacetr pylori)的粘附能力与粘附特征,探讨Hp的粘附机理及其致病.方法用10株临床分离Hp对四个6~8月龄胎儿胃粘膜组织进行粘附试验.结果不同Hp的粘附能力有很大差别.存在强粘附株和弱粘附株;不同Hp对不同胎儿胃粘膜组织各个部位的粘附特征亦有差别.结论Hp可分泌多种粘附素,机体分泌的粘附素受体亦多样,它们表达的种类以及数量影响粘附结果.
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幽门螺杆菌与消化性溃疡关系的研究进展
消化性溃疡是多因素引致的疾病,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是主要的致病因素之一.Hp系定植于人体胃黏膜表面与粘液层之间的微需氧菌,通过粘附、毒力因子对黏膜细胞的直接损伤,以及机体对细菌的免疫反应等机制而引起消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌、胃MALT淋巴瘤.
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rhBMP-2对骨骼肌卫星细胞增殖与粘附的影响
目的探讨人重组骨形态发生蛋白(rhBMP)-2对骨骼肌卫星细胞增殖与粘附的影响.方法体外分离与培养骨骼肌卫星细胞,分别用0、50、100、500、1000 ng/ml的rhBMP-2诱导培养基培养48h.利用MTT法测定细胞增殖能力的变化,通过荧光法测定接种后1h的粘附细胞率.结果rhBMP-2可促进骨骼肌卫星细胞的增殖,这种作用从BMP浓度为500ng/ml即可表现出来,并随着浓度的增加而越发明显.在rhBMP-2作用下骨骼肌卫星细胞的粘附率增高,在500ng/ml的浓度时达高,但当BMP浓度进一步增大时,细胞粘附率却不再增加.结论rhBMP-2可促进骨骼肌卫星细胞的增殖,增强其粘附特性.
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shRNA沉默COX-2基因表达对人肝癌细胞生物学特性的影响
背景与目的:环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在肝癌组织中呈高表达,参与肝癌的发生发展.本研究探讨COX-2短发夹状RNA(shrt hairpin RNA,shRNA)对人肝癌细胞株HepG2中COX-2表达及细胞粘附侵袭力的影响.方法:以人COX-2 mRNA编码区中两条不同序列作为RNA干扰靶点,分别构建两个以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的shRNA真核表达载体质粒WBH1和WBH2,应用阳离子脂质体转染HepG2细胞,分别观察转染后24 h、48 h、72 h和96 h COX-2 mRNA和蛋白表达的变化,检测抑制效果.MTT法观察HepG2细胞与Matrigel胶粘附性的变化.Transwell小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HepG2细胞体外侵袭力的变化.结果:质粒在HepG2细胞的转染率约为60%.质粒WBH1导人细胞24 h、48 h、72 h和96 h后,COX-2mRNA表达抑制率分别为18.5%、88.6%、52.8%和42.4%(P<0.01),蛋白表达抑制率分别为10.3%、80.5%、45.3%和39.0%(P<0.01).转染WBH2质粒的HepG2细胞COX-2表达无明显变化(P>0.05).转染后48 h,转染WBH1质粒的HepG2细胞与Matrigel胶的粘附率为(6.0±0.4)%,与空白对照组(11.4±0.2)%相比明显下降(P<0.01),抑制率为47.4%.转染WBH1质粒的细胞穿膜数为(8.2±1.5),与空白对照组(22.8±1.7)相比有显著性差异(P<0.01),抑制率为63.7%.转染WBH2质粒的HepG2细胞粘附率和穿膜细胞数均无明显变化(P>0.05).结论:shRNA真核表达载体明显干扰HepG2细胞的COX-2表达,能有效抑制HepG2细胞的体外粘附侵袭力.
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斑蝥素抑制人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的体外实验研究
背景与目的:斑蝥素在治疗癌症方面显示出其独特的疗效,已有较多文献证实核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)与肿瘤侵袭转移关系密切.本研究旨在观察斑蝥素对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响,并探讨其作用机理.方法:MTT法及细胞粘附人工重组基底膜实验检测斑蝥素对HO-8910PM细胞的细胞毒作用及粘附能力的影响;用Transwell小室法检测斑蝥素对HO-8910PM细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响;Western blot法分析斑蝥素对HO-8910PM细胞中NF-κB和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响.结果:20μmol/L的斑蝥素作用6h对HO-8910PM细胞抑制率及体外侵袭、趋化运动和粘附的抑制率分别为(8.4±2.2)%及(38.8±1.7)%、(40.3±5.6)%和(55.1+6.7)%.20μmol/L斑蝥素能明显下调HO-8910PM细胞中NF-κB和VEGF的表达.结论:斑蝥素能抑制HO-8910PM细胞的侵袭、运动和粘附能力.斑蝥素抗肿瘤侵袭转移的作用机制与NF-κB和VEGF蛋白的表达下调有关.
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MUC1的表达与乳腺癌细胞粘附的关系
背景与目的:近年研究认为,肿瘤的转移与肿瘤细胞膜上粘液型糖蛋白的大量形成有关.本实验研究糖基化抑制剂苯甲基 -α-N-乙酰半乳糖胺对粘蛋白-1( mucin1,MUC1)形成的抑制作用及其对乳腺癌细胞株 MDA-MB-231细胞的粘附、侵袭转移能力的影响.方法:免疫细胞化学法检测 MUC1表达 ,噻唑蓝比色法( MTT)检测细胞对人工基底膜 (Matrigel)的粘附能力 ,明胶酶谱法 (zymography)检测MDA-MB-231细胞 MMP-2、 MMP-9的分泌变化. 结果:经苯甲基 -α-N-乙酰半乳糖胺去糖基化处理后的肿瘤细胞组与相应对照组比较 , MUC1表达降低 ,对基底膜的粘附力明显降低( P< 0.01) ,同时细胞中 MMP-2和 MMP-9的分泌量显著下降.结论: MUC1表达水平与肿瘤细胞的粘附能力相关, MUC1的抑制使乳腺癌 MDA-MB-231细胞粘附能力,分泌Ⅳ型胶原酶能力明显减弱.