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大鼠脑组织中神经生长因子基因克隆
目的：克隆大鼠脑组织中神经生长因子基因。方法：采用 RT-PCR方法，大鼠脑组织中的mRNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，扩增NGF基因片段，克 隆入T载体，并经序列测定。结果：RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度 504bp相符，T载体克隆测序与大鼠NGF基因100%同源。结论：采用RT-PCR和 T载体技术获得了大鼠脑组织中的NGF基因克隆，为在分子水平对NGF mRNA的研究奠定了基础 。
关键词： 神经生长因子基因 T-A克隆 逆转录聚合酶链式反应 大鼠 -
白细胞介素6 mRNA在突出腰椎间盘中的表达及临床意义
目的探讨白细胞介素6(IL-6)mRNA在突出腰椎间盘组织的表达及临床意义.方法以RT-PCR技术测定不同类型椎间盘髓核、纤维环、软骨终板组织标本IL-6 mRNA表达.结果椎间盘突出症组IL-6 mRNA表达水平明显高于正常对照组,差异非常显著(P＜0.001).病变组髓核、纤维环、软骨终板不同部位IL-6 mRNA的表达有显著差异(P＜0.05).根据Norbet Boos的病理组织学分级,轻度病变者11例,重度者14例,重度组IL-6 mRNA的表达明显高于轻度者,有显著统计学意义.不同突出病理类型椎间盘突出类椎间盘型IL-6 mRNA的表达有显著差异,游离型高于突出型,突出型高于凸起型,有显著统计学意义.髓核组织中IL-6mRNA的表达与患者的直腿抬高程度(SLR)呈负相关(γ=-0.457,P=0.003).在不同病程阶段患者椎间盘组织中IL-6 mRNA的表达无明显差异.结论IL-6参与腰椎间盘突出的病理过程,随病情的加重而分泌增多.IL-6 mRNA高水平表达与腰椎间盘突出症患者腰腿痛发生有关.
关键词： 椎间盘突出症 白细胞介素6 退变 逆转录聚合酶链式反应 -
胃癌基质金属蛋白酶7基因表达及与病理特点关系
[目的]探讨基质金属蛋白酶7(MMP-7)基因在胃癌中的表达及与胃癌病理特点的关系.[方法]用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MMP-7 mRNA在45例胃癌中的表达,并与相应的病理特点进行对照.[结果]随着胃癌分化程度的降低,MMP-7mRNA的表达逐渐升高(从高分化癌至未分化癌阳性率分别为57.1%、60.0%、90.9%、91.7%);随着癌细胞由黏膜层或黏膜下层向深部侵犯肌层和浆肌层时,MMP-7mRNA的表达阳性率大幅度提高(从黏膜层至浆膜外阳性率分别为25.0%、33.3%、84.6%、90.0%、91.7%);有淋巴管、淋巴结及静脉转移MMP-7mRNA表达的阳性率与无转移病例比较差异均有显著性(P＜0.01).[结论]MMP-7 mRNA可作为胃癌侵袭、转移、复发的标志物,对预后评估具有重要意义.
关键词： 胃肿瘤 基质溶解因子 逆转录聚合酶链式反应 病理学 -
FAT10基因在原发性骨肉瘤组织中的表达及意义
目的 探讨双泛素(FAT10)在原发性骨肉瘤发生发展中的可能作用机制,为以FAT10指标对原发性骨肉瘤的诊断和以FAT10为靶点进行原发性骨肉瘤生物学治疗提供理论依据.方法 收集22例原发性骨肉瘤及其骨肉瘤旁骨组织和12例同期接受手术的良性病变骨组织的新鲜标本,采用RT-PCR检测组织中FAT10 mRNA的表达.结果 FAT10mRNA在原发性骨肉瘤组织、原发性骨肉瘤旁组织和良性病变骨组织中的阳性表达率分别为81.82％ (18/22)、13.64％(3/22)和8.33％(1/12).原发性骨肉瘤旁组织FAT10mRNA阳性表达率与良性骨组织组织相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；原发性骨肉瘤中FAT10 mRNA阳性表达率明显高于原发性骨肉瘤旁组织和良性病变骨组织,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 FAT10mRNA在原发性骨肉瘤中的表达明显上调,其可能成为一个诊断原发性骨肉瘤的检测指标,并为开发骨肉瘤化疗提供新的靶点.
关键词： 骨肉瘤 FAT10基因 逆转录聚合酶链式反应 -
膀胱移行细胞癌中促红细胞生成素及其受体的表达
目的 探讨促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在膀胱移行细胞癌(TCC)组织中的表达,并探讨其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法、RT-PCR方法检测70例膀胱TCC组织、15例癌旁组织、10例正常膀胱组织中EPO和EPOR的蛋白和mRNA的表达.结果 70例膀胱TCC组织有44例(62.9%)EPO蛋白阳性表达,有29例(41.4%)EPOR蛋白阳性表达;15例膀胱TCC癌旁组织及10例正常膀胱组织均未见EPO、EPOR蛋白的表达.EPO蛋白表达强度与膀胱TCC的组织学分级相关(rs=0.329,P＜0.05),而与临床分期则无明显的相关性.膀胱癌组织中EPO与EPOR表达具有相关性(rs=0.346,P＜0.01).RT-PCR检测发现膀胱移行细胞癌组织中EPO及其受体mRNA的表达明显高于正常膀胱组织、癌旁组织中EPO及其受体mRNA的表达(P＜0.01).结论 EPO、EPOR在膀胱TCC组织中过表达,提示EPO、EPOR在膀胱TCC的发生、发展过程中可能起重要作用;EPO蛋白表达强度与膀胱TCC的组织学分级有明显相关性,可能成为膀胱TCC不良预后的指标之一.
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雷帕霉素诱导Balb/c小鼠CD4+CD25+foxp3+调节性T细胞增殖
目的 探讨雷帕霉素对Balb/c小鼠CD4+CD25+foxp3+调节性T细胞的作用.方法 取8wk龄的SPF级Balb/c小鼠30只,随机分为两组,实验组每只灌胃雷帕霉素0.4mg·d-1,对照组灌胃每天予等体积无菌水,共3wk.无菌条件下肝素抗凝心脏采血,分离脾脏,制备单细胞悬液.采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾细胞CD4+ CD25+T细胞,实时定量PCR检测小鼠脾细胞foxp3 mRNA的表达.结果 实验组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+T细胞的比例分别为(9.95±4.65)%和(24.13±10.06)%,对照组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+T细胞的比例分别为(5.01±1.49)%和(8.48±3.19)%,差异均有显著性(P＜0.01).实验组小鼠脾细胞foxp3 mRNA的表达水平明显高于对照组,是对照组的6.029倍,差异有显著性(P＜0.01).结论 雷帕霉素能够明显诱导Balb/c小鼠体内CD4+CD25+T细胞的增殖,并能提高foxp3+ mRNA的表达.
关键词： 雷帕霉素 逆转录聚合酶链式反应 T细胞 CD4+CD25+ FOXP3 -
大明胶囊对糖尿病大鼠心肌 L型Ca2+通道蛋白mRNA表达的影响
目的探讨大明胶囊对2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达的影响.方法建立2型糖尿病大鼠模型,筛选空腹血糖值大于16.7 mmol·L-1的大鼠随机分组:大明胶囊大(200 mg·kg-1·d-1)、中(100 mg·kg-1·d-1)、小(50 mg·kg-1·d-1)剂量组、糖尿病模型组、苯乙双胍(75 mg·kg-1·d-1)组,连续用药14 d,用快速血糖仪测空腹血糖值.提取心肌总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法,观察大明胶囊治疗后2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA水平的变化.结果 2型糖尿病组大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达高于正常组大鼠(P<0.01),经大明胶囊治疗后的心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达降低(P<0.05),空腹血糖也明显下降.结论大明胶囊对2型糖尿病大鼠有明显的降糖作用,并且可以降低2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA的表达.
关键词： 大明胶囊 Ca2+通道蛋白 2型糖尿病 逆转录聚合酶链式反应 -
HSP90α、HSP90β在人胃癌组织中的表达
目的 探讨HSP90α、HSP90β蛋白与mRNA在人胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系.方法 采用免疫组化SP法检测两者蛋白在胃癌组织及癌旁正常组织的表达.采用RT-PCR法检测两者的mRNA在胃癌组织及癌旁正常组织的表达.结果 HSP90α、HSP90β主要定位于细胞质,其阳性率分别为82.9％和80.0％ (P ＜0.01),与胃癌分化、浸润、分期、转移相关.HSP90α、HSP90β mRNA在胃癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.01),并与胃癌的分化、分期、淋巴结的转移相关.结论 HSP90α、HSP90β蛋白在胃癌组织中的阳性表达以及其与胃癌生物学行为的关系提示HSP90α、HSP90β可能作为判断胃癌恶性程度的重要指标.HSP90α、HSP90β mRNA的高表达,且两者均与胃癌的发生、发展关系密切,可能与胃癌组织中的转录调控相关.
关键词： HSP90α HSP90β 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应 胃肿瘤 -
GRP78、GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨GRP78及GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义.方法 收集胃癌手术标本183例,制成组织芯片,用免疫组化法检测GRP78和GRP94的蛋白表达;取30例胃癌新鲜组织用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GRP78、GRP94 mRNA相对表达.结果 免疫组化法检测结果显示:GRP78、GRP94蛋白的阳性表达率分别为80.1%和73.8%,与癌旁正常胃黏膜比较差异有统计学意义(P<0.05);与肿瘤的大小、浸润、转移、分期有关(P<0.05);与性别、年龄和组织分化无关.半定量RT-PCR结果显示癌组织和癌旁组织中的GRP78、GRP94 mRNA均有表达,胃癌组织的表达明显高于癌旁组织(P<0.05).结论 GRP78、GRP94蛋白在人胃癌中呈高表达并与胃癌的转移和侵袭有关,可作为判断胃癌恶性程度的有用指标.GRP78、GRP94 mRNA的高表达可能与胃癌组织中的转录调控相关.
关键词： 胃肿瘤 GRP78 GRP94 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应 -
结直肠癌组织中BRMS1 mRNA的表达及意义
目的:探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)mRNA在结直肠癌组织中的表达及临床意义.方法:采用RT-PCR法分别检测40例结直肠癌组织和20例正常结直肠组织中BRMS1 mRNA的表达,并分析其与各临床病理特征之间的关系.结果:BRMS1 mRNA在结直肠癌组织中低表达0.420±0.133,在正常结直肠组织中高表达0.836±0.102,差异有统计学意义(P<0.01).结直肠癌组织中BRMS1 mRNA的表达水平与病人年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度及浸润深度无关(P>0.05),而与淋巴结转移呈负相关关系(P<0.01).结论:BRMS1 mRNA在结直肠癌组织中呈低表达,并有可能成为反映结直肠癌转移潜能的参考指标之一.
关键词： 结直肠肿瘤 转移抑制基因 BRMS1 逆转录聚合酶链式反应 -
痛泻要方颗粒对腹泻型肠易激综合征的结肠黏膜5-HT3受体表达的影响
目的 观察腹泻型肠易激综合征(IBS-D)患者服用痛泻要方颗粒前后症状评分及5-羟色胺3受体(5-HT3受体)Mrna表达丰度的变化,探讨痛泻要方颗粒治疗IBS-D的临床疗效及可能作用机制.方法 运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测IBS-D患者治疗前后及健康对照组结肠黏膜5-HT3受体Mrna的表达丰度,并观察IBS-D患者经痛泻要方颗粒治疗后各腹部症状积分、总积分的变化.结果 IBS-D患者5-HT3受体Mrna的表达水平较对照组显著提高,2组比较有统计学意义(P<0.05);IBS-D患者经痛泻要方颗粒治疗后各腹部症状积分、总积分及结肠黏膜5-HT3受体Mrna的表达丰度均低于治疗前,治疗前后比较差异有统计学意义.结论痛泻要方颗粒可能通过下调IBS-D患者结肠黏膜5-HT3受体Mrna的表达,降低5-HT3受体的表达活性,从而改善IBS-D患者的腹部症状,达到治疗腹泻型肠易激综合征的效应.
关键词： 肠易激综合征 腹泻型 痛泻要方颗粒 5-HT3受体mKNA 逆转录聚合酶链式反应 -
脑囊虫病细胞因子基因检测方法的建立
目的建立检测相关细胞因子的方法.方法设计6对用于IFN-γ,IL-2,IL-10,IL-13和β-actin基因扩增的引物,建立可用于相关细胞因子检测的技术.结果用RT-PCR检测30例脑囊虫病人外周血单个核细胞发现27例有细胞因子表达,3例未检到细胞因子,在27例有细胞因子表达的患者中IFN-γ,IL-2,IL-10 IL-13的表达分别为7例、6例、16例、17例和14例,27例均IL-10和(或)IL-13表达,Th2型细胞因子表达水平明显升高.结论RT-PCR技术是检测脑囊虫病相关细胞因子的有效方法.
关键词： 脑囊虫病 细胞因子 逆转录聚合酶链式反应 -
胃癌腹腔微转移的检测及其预后意义
目的评估用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测胃癌腹腔微转移的临床病理意义.方法采用RT-PCR方法检测50例胃癌腹腔冲洗液中角蛋白CK-20 mRNA的表达情况,同时作涂片细胞学检查.结果 RT-PCR方法检测腹腔冲洗液中CK-20 mRNA阳性率(54.0%,27/50)明显高于涂片细胞学检查的阳性率(32.0%,16/50).CK-20 mRNA阳性率与胃癌浸润深度及组织学类型有关(P<0.05).CK-20 mRNA阳性、阴性胃癌患者3年生存率分别是25.9%和65.2%(P<0.01).结论 RT-PCR方法是检测胃癌腹腔微转移灶的敏感方法,有助于指导术后治疗及预后判断.
关键词： 胃癌 逆转录聚合酶链式反应 细胞角蛋白20 腹膜微转移 -
胃癌患者外周血中CEA mRNA的检测及其临床意义
目的探讨胃癌患者外周血中CEA mRNA表达的临床意义.方法采用巢式RT-PCR法,检测42例胃癌患者外周血中的CEA mRNA表达情况.采用化学发光法检测血清中CEA水平.以胃腺癌细胞株SGC-7901作为阳性对照,以20例正常人外周血作为阴性对照.结果 42例胃癌患者CEA mRNA阳性率为45.2%(19/42),其中25例行根治术的胃癌患者肿瘤切除术后血CEA mRNA阳性率明显高于术前(56.0%V.s 28.0%,P=0.039).胃癌患者外周血中CEA mRNA表达与肝转移相关,但与血清CEA值、肿瘤部位、UICC分期及分化程度无关.胃腺癌细胞株SGC-7901中CEA mRNA均呈阳性表达;20例正常人外周血中CEA mRNA均呈阴性表达.结论胃癌患者外周血中CEA mRNA表达可作为癌细胞血道播散的标志,对判断其预后及指导临床治疗具有重要意义.胃癌手术中应采用"不接触技术"以减少术中癌细胞播散.
关键词： 逆转录聚合酶链式反应 胃癌 微转移 癌胚抗原 外周血 -
IGF-IR反义基因抑制乳腺癌细胞内源性IGF-IR表达的研究
目的探讨重组的人胰岛素样生长因子I型受体(IGF-IR)的反义基因,对乳腺癌细胞内源性IGF-IR表达的抑制作用.方法体外构建人IGF-IR的反义基因真核表达载体pIGF-IR/As,并转染人MCF-7乳腺癌细胞,经G418筛选而获得稳定表达外源性反义基因的新细胞株MCF-7/As,在基因水平和蛋白质水平检测内源性IGF-IR的表达情况.结果人IGF-IR的反义基因真核表达载体pIGF-IR/As构建成功.RT-PCR显示MCF-7转染前后IGF-IRmRNA的表达水平分别为(0.71±0.04)和(0.43±0.06),表达明显下降(P<0.05);Western blot显示其蛋白质的表达水平呈相同的变化趋势(P<0.01).结论本实验构建的载体pIGF-IR/As能够稳定转染MCF-7细胞,所表达的IGF-IR的反义基因能够在基因和蛋白质水平显著抑制内源性IGF-IR的表达.
关键词： 胰岛素样生长因子I型受体 基因克隆 逆转录聚合酶链式反应 细胞转染 -
巢式RT-PCR检胃癌患者外周血循环癌细胞的研究
目的分析胃癌患者外周血中CK20 mRNA及CEA mRNA的异常表达及意义.方法采用RT-PCR方法检测52例胃癌患者术前外周血中CK20 mRNA及CEA mRNA的表达.结果胃癌患者外周血中CK20 mRNA、CEA mRNA阳性表达率分别为42 3%(22/52)及51.9%(27/52),CK20 mRNA和CEA mRNA两者中至少1个基因为阳性的表达率为63.5%(33/52).胃癌患者外周血中CK20mRNA表达与胃癌的远处转移有关,CEAmRNA表达、CK20mRNA和CEAmRNA都表达、CK20mR-NA和CEA mRNA两者中至少1个表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移和远处转移相关(P＜0.05).结论胃癌患者外周血CK20和CEA的RT-PCR检测有助于患者预后的判断;联合检测CK20 mRNA和CEA mRNA可增加外周血循环癌细胞检测的敏感性.
关键词： 逆转录聚合酶链式反应 胃癌 细胞角蛋白20 癌胚抗原 外周血 -
RAGE与Col4在多囊卵巢综合征患者中的表达
目的 探讨糖化终末产物受体(RAGE)与IV胶原(Col4)在多囊卵巢综合征患者中的表达.方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对20例正常卵巢组织和40例多囊卵巢综合征[其中胰岛素抵抗组(IR)22例,非胰岛素抵抗组(NIR)18例]的卵巢组织进行RAGE和IV胶原a1(Col4A1)表达情况的半定量检测.结果 RAGE在PCOS患者IR组和NIR组中表达均高于对照组(P<0.001,P<0.05),在PCOS患者IR组的表达高于NIR组(P<0.05);Col4A1在PCOS患者IR组和NIR组中表达均高于对照组(P<0.001,P<0.05),在PCOS患者IR组的表达高于NIR组(P<0.05).结论 RAGE与Col4在多囊卵巢综合征患者中的高表达可能与其发病机制存在一定的关系.
关键词： 多囊卵巢综合征 糖化终末产物受体 IV胶原 逆转录聚合酶链式反应 -
内皮素受体基因表达与肝硬化门脉高压症内脏血流动力学的关系
目的探讨肝硬化患者肝组织中内皮素受体 (ETAR及ETBR) mRNA的表达及其与内脏血流动力学的关系.方法肝硬化组(n=15例),组织学检查证实为肝硬化;对照组为肝外伤病人(n=10例),组织学检查证实为正常肝组织.采用原位杂交及RT-PCR技术检测肝组织中ETAR及ETBR mRNA的表达,同时测定门静脉压力(Pp)、门脉血流量 (Qp)、平均动脉压 (MAP)和心率(HR).结果肝硬化患者肝组织中ETAR及ETBR mRNA的表达均显著高于外伤肝组织,ETAR及ETBR mRNA的表达与Pp呈直接相关,ETBR mRNA的表达与Qp呈直接相关.结论 ETAR及ETBR mRNA的表达与门脉高压症的严重程度直接相关,ETAR及ETBR可能在门脉高压症内脏高动力循环的形成和维持中起重要作用.
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JNK1、TRAF2在多囊卵巢综合征患者脂肪组织中的表达及意义
目的 研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者腹部脂肪组织中c - Jun氨基端激酶1(JNK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的表达,探讨PCOS发生胰岛素抵抗(insulin resistance IR)的分子机制.方法 分别选择PCOS组(肥胖13例和非肥胖15例)、对照组(肥胖、非肥胖各20例).放射免疫法检测各实验组血清黄体生成激素(1uteinizing hormone LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone FSH)、睾酮(testosterone T)、血清空腹胰岛素(fasting insulin FINS)的水平;用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(fasting plasma glucose FPG);采用稳态模型胰岛素抵抗(Homeostasis model assessment-insulin resistance HOMA-IR)模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测PCOS组和对照组患者腹部脂肪组织中JNK1、TRAF2 mRNA的表达情况.结果 (1)所有PCOS组 LH、LH/FSH、T、FINS、HOMA-IR均高于对照组(均P<0.05); (2)JNK1、TRAF2mRNA的相对表达量在 PCOS肥胖组高于对照肥胖组(均P<0.01),在PCOS非肥胖组高于对照非肥胖组(均P<0.01),且PCOS肥胖组较PCOS非肥胖组高(均P<0.01).结论 JNK1、TRAF2 在多囊卵巢综合征中的高表达可能与PCOS发病机制存在一定关系.
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14-3-3蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及意义
目的:研究14-3-3蛋白各亚型mRNA及蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿(ECO)的表达,探讨14-3-3蛋白与ECO发生发展的关系.方法:取ECO患者的异位子宫内膜组织(实验组)和正常子宫内膜组织(对照组)标本各30例.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组中14-3-3蛋白各亚型mRNA的表达；对两组表达差异的亚型,采用Western blot法检测其蛋白表达.结果:14-3-3蛋白7种亚型在ECO异位子宫内膜组织和正常子宫内膜组织均有表达.ECO异位子宫内膜组织中14-3-3σ-亚型mRNA及蛋白表达显著下调(P＜0.05),14-3-3ε、ζ亚型mRNA及蛋白表达显著上调(P＜0.01).结论:ECO异位内膜组织中14-3-3σ表达显著下调,14-3-3ε和14-3-3ζ表达显著上调,提示这3种蛋白亚型均可能与ECO的发生发展有关.
