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C反应蛋白对多发性骨髓瘤细胞系U266增殖机制的研究
为了观察C反应蛋白(CRP)对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖活性的作用机制,将液氮冻存的U266细胞复苏后,悬浮培养,第3天收集细胞备用,分别以不同浓度CRP(0、5、10、20 mg/L)培养24小时,采用血液分析仪检测细胞增殖情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测凋亡相关蛋白survivin和HSP90α的表达.结果发现:CRP处理的细胞组增殖率及survivin、HSP90α的表达量均高于对照组(P<0.05),20 mg/L CRP组作用显著;survivin、HSP90α之间表达具有显著相关性(r=0.737,P<0.0001).结论:CRP是通过调节凋亡抑制蛋白Survivin及HSP90α的表达发挥促进U266细胞增殖的作用.
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非小细胞肺癌血清标志蛋白HSP90α的鉴定及其临床意义
目的 证明HSP90α是否可以作为肺癌诊断的血清标志蛋白.方法 利用SDS-PAGE和基质辅助解吸附时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS),对具有不同转移能力的肺腺癌细胞系CL1-0(低转移)和CL1-5(高转移)的培养基上清进行分析,并对已鉴定的候选标志蛋白通过免疫印迹方法进行确定.此外,利用酶联免疫吸附技术(ELISA)对141例肺癌、37例良性肺病患者、及46例健康人血清对候选蛋白进行了进一步的分析.结果 HSP90α在CL1-5的培养基中高表达,进一步发现HSP90α在非小细胞肺癌的血清中特异性升高.当ROC曲线(receiver operating characteristic,ROC)临界值取为0.535时,HSP90α能区分肺癌以及良性肺病患者和健康人,其敏感性为0.817,特异性为0.919,总体精确性为80.14%.结论HSP90α有望成为区分肺癌、良性肺病患者和健康人以及肺癌分期诊断的血清标志蛋白.
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原发性肝癌中HSP90α的表达及意义
目的研究热休克蛋白90α(HSP90α)在人原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达并探讨其与肿瘤生物学行为、预后的关系.方法采用免疫组织化学方法检测了10例正常肝组织、40例HCC肿瘤组织及癌旁组织中HSP90α的表达.结果HSP90α在正常肝脏、癌旁组织、原发性肝癌中的阳性表达率分别为10%、52.5%、72.5%.原发性肝癌中的阳性表达率明显高于正常肝脏和癌旁组织(P＜0.05).HCC的HSP90α与肿瘤分化程度、肿瘤大小显著相关(P＜0.05);与病灶数目无关(P＞0.05);与预后亦有关,HSP90α阴性病人预后显著优于HSP90α阳性病人,术后平均无瘤生存期前者38.6个月、后者25.5个月(P＜0.05).结论HSP90α在原发性肝癌中表达增高,HSP90α可作为判断HCC分化程度和预后的指标.
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热休克蛋白90α在不同转移潜能人肝癌细胞株及HBV相关性肝细胞癌患者血清中表达水平的临床研究
目的 探讨热休克蛋白90α(HSP90α)在不同转移潜能人肝癌细胞株及乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞癌患者血清中的表达水平.方法 收集HBV感染肝病患者60例和同期体检的健康受试者12例的血清样本,采用Western blot技术检测不同转移潜能人肝癌细胞株中HSP90α的表达水平,采用ELISA技术检测HBV相关性肝癌患者、良性肝病患者、健康受试者血清中HSP90α的表达水平,采用统计学方法分析HSP90α的表达水平与HBV相关性肝细胞癌患者临床病理特征的关系.结果 高转移潜能人肝癌细胞株MHCC97H细胞中HSP90α的表达水平明显高于无转移潜能人肝癌细胞株HepG2细胞,差异有统计学意义(t=13.375,P=0.001);肝癌组与良性肝病组患者血清中HSP90α的表达水平均明显高于健康受试者,差异有统计学意义(F=11.357,P=0.002;F=9.633,P=0.005),但肝癌组与良性肝病组患者血清中HSP90α的表达水平比较,差异无统计学意义(F=0.859,P=0.983);42例伴HBV慢性感染肝癌患者血清中HSP90α的表达水平与性别有关,其中,女性患者血清中HSP90α的表达水平高于男性患者,差异有统计学意义(F=4.729,P=0.039),但患者年龄、HBeAg是否为阳性、甲胎蛋白(AFP)浓度、HBV DNA及临床分期之间比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).结论 HSP90α可成为抗癌治疗的新靶点,并为肝病的早期诊断、肝癌的侵袭转移、预后评估及科学治疗提供理论依据.
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HSP90α抑制剂17-AAG抑制甲状腺癌细胞增殖 和迁移机制探讨
目的 在体内,热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)对肿瘤的发生发展起着重要的作用.HSP90α抑制剂在体内可阻断肿瘤赖以生存的信号通路网络.本研究探讨HSP90α 特异性抑制剂烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德(17-allyl-amino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响及相关信号分子的调控机制.方法 体外培养甲状腺乳头状癌细胞TPC-1和甲状腺未分化癌细胞TAK,分别给予0.001～10.000μmol/L浓度的17-AAG作用24和48 h.MTT实验、划痕实验观察细胞生长和迁移情况.蛋白质印迹法检测细胞HSP90α 及信号传导及转录激活因子(signal transducers and activators of transcription,STAT3)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase,AKT)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)相关信号蛋白的表达及磷酸化水平变化.结果 与未处理的细胞相比,经0.001～10.000μmol/L浓度的17-AAG作用24和48 h的TPC-1和TAK细胞增殖能力降低,且有明显的时间和剂量依赖性.TPC-1(F=7.326,P=0.005)和TAK细胞(F=22.770,P<0.001)浓度组间比较差异有统计学意义,时间组间比较差异有统计学意义,F值分别为1048.000和663.800,均P<0.001.与未处理的细胞相比,经0.1和1.0μmol/L浓度的17-AAG作用24 h的TPC-1和TAK细胞迁移能力降低,各浓度组间比较差异有统计学意义,F=1.228,P<0.005;两细胞株间比较差异无统计学意义,F=0.365,P=0.578.经0.1和1.0μmol/L浓度的17-AAG作用24 h的TPC-1和TAK细胞以及STAT3、AKT、ERK蛋白磷酸化水平降低,却对STAT3和ERK总蛋白表达影响差异无统计学意义,P>0.05.结论 17-AAG通过下调甲状腺癌细胞HSP90α相关信号蛋白STAT3/AKT/ERK磷酸化水平,从而抑制甲状腺癌细胞的增殖和迁移能力.
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乳腺癌患者的HSP90α、CA153、CEA、Fer水平 变化及临床意义
目的 通过联合检测乳腺癌患者血清中的HSP90α、CA153、CEA、Fer水平浓度,提高乳腺癌在临床上的诊效能.方法 收集乳腺癌住院患者共85例,乳腺良性肿块患者96例和健康体检者120例.分别检测其血清中的HSP90α、CA153、CEA、Fer水平浓度.结果 HSP90α、CA153、CEA、Fer在乳腺癌组中的水平浓度均高于乳腺良性肿块组和健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).健康对照组和乳腺良性肿块组的各指标水平浓度差异没有统计学意义.结论 单独检测HSP90α对乳腺癌具有较高的诊断价值.HSP90α、CA153、CEA、Fer联合检测可提高乳腺癌的诊断价值.
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热休克蛋白HSP90α和miRNA-144在小鼠肾缺血再灌注损伤后的表达变化
目的 研究小鼠肾缺血再灌注后不同时间点热休克蛋白HSP90α和miRNA-144的表达变化.方法 用动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂45min建立肾缺血再灌注损伤模型,测定再灌注4、8、12、24、48h组及假手术组血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,光镜下观察肾组织形态学改变,采用定量RT-PCR的方法检测肾缺血再灌注各时间点HSP90α mRNA和miRNA-144的表达变化,Westernblot法检测HSP90α蛋白的表达变化.结果 HE染色显示假手术组小鼠的肾组织结构及肾功能正常,再灌注组可见肾小管管腔扩张,肾小管上皮细胞有不同程度的肿胀、坏死、刷状缘消失,管腔内有管型,肾间质充血水肿,组织损伤以24h重;肾功能指标显示再灌注组与假手术组相比,Scr、BUN水平随再灌注时间延长而升高,24h达峰值(P＜0.01).定量RT-PCR和Western blot法检测结果显示,再灌注4h后HSP90α的mRNA和蛋白表达开始逐渐增强,mRNA在12h达高峰,蛋白水平在24h达高峰(P ＜0.01);miRNA-144在再灌注后表达降低(P＜0.01).结论 HSP90α在缺血再灌注损伤的肾组织中表达增高,提示其可能参与肾缺血再灌注损伤的保护作用;miRNA-144可能为调控HSP90α功能的潜在miRNA.
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胃癌中Hsp90α和p53的表达及意义
目的:研究Hsp90α及p53在人胃癌组织中的表达,分析胃癌中Hsp90α和p53表达的关系.方法:应用免疫组化S-P法检测胃癌、慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎中Hsp90α及p53的表达.结果:Hsp90α在胃癌、慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎中的阳性率分别为70.0%(21/30)、60.0%(12/20)、30.0%(6/20).p53在胃癌、慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎中的阳性率分别为63.3%(19/30)、10.0%(2/20)、5.0%(1/20).胃癌中Hsp90α及p53的表达明显高于慢性浅表性胃炎(P<0.05);胃癌中Hsp90α及p53表达的关系:56.7%(17/30)的胃癌Hsp90α、p53均为阳性.23.3%(7/30)的胃癌Hsp90α、p53均为阴性,13.3%(4/30)的胃癌Hsp90α阳性但p53阴性,6.7%(2/30)的胃癌p53阳性但Hsp90α阴性,Hsp90α及p53表达呈正相关(P<0.05).结论:Hsp90α及p53的表达与胃癌的发生及发展有关;胃癌组织中Hsp90α及p53表达呈正相关.
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C反应蛋白对U266细胞凋亡相关基因survivin、HSP90α表达的影响
多发性骨髓瘤(MM)是一种浆细胞克隆性增生的血液系统恶性肿瘤,其发病机制尚未明确,虽然新型靶向治疗药物的使用取得了较好的治疗效果,但仍无法根治.目前认为β_2微球蛋白(β_2MG)水平、C反应蛋白(CRP)、白蛋白、浆细胞标记指数(PCLI)以及13号染色体异常是MM患者主要预后的因素,并提出CRF＞8.0 mg/L是MM的一个独立不良预后因素[1].CRF是一种由肝脏产生的急相期反应蛋白,在骨髓瘤患者中有不同程度的增高,研究表明其增高水平与肿瘤细胞生长相关的重要细胞因子IL-6的水平相一致,且可以反映IL-6的活性.
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新型肿瘤标志物Hsp90α 在肺癌患者中的应用探索
目的 :评价新型肿瘤标志物Hsp90α及其定量检测试剂盒在肺癌患者中的临床应用前景.方法:采用ELISA法测定33例不同荷瘤状态下肺癌样本的Hsp90α阳性率,对比临床常用肿瘤标志物,评价其在病情监测中的参考价值.结果:Hsp90α在肺癌患者中的总阳性率为27.27%,高于本实验其他肿瘤标志物;肺癌患者Hsp90α显著高于健康人(P<0.001);Hsp90α阳性患者术后检测值显著下降(P<0.05).结论:Hsp90α及其试剂盒体现了良好的肿瘤初筛阳性率,在病情监测中具有一定的参考价值.
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基于反向分子对接的桂枝汤调和营卫与HSP90α的相关性研究
目的:基于经方的“方证相应”关系和反向分子对接技术研究桂枝汤证与热休克蛋白90α的相关性.方法:通过文献检索获得桂枝汤相关的活性成份,采用PharmMapper server对活性成份进行反向分子对接,依据对接分数(fit score)排序发现桂枝汤的潜在受体,然后通过autodock vina进行正向分子对接试验观察配体与受体分子之间的亲和力,后用动物实验对发现的受体进行验证.结果:对桂枝汤的活性成份进行反向分子对接发现HSP90α为频繁出现的受体,对接分数较高的活性成份为没食子酰芍药苷等,正向分子对接实验证实没食子酰芍药苷、芍药苷等活性成分与HSP90α有较高的亲和力,动物实验显示模型组大鼠下丘脑HSP90α的表达比正常组低,差异有统计学意义;桂枝汤高、中剂量组与模型组比较可以显著提高模型大鼠下丘脑HSP90α的表达,差异有统计学意义;低剂量组作用不明显.结论:本研究证实桂枝汤调和营卫的机制与HSP90α有一定的相关性,同时也启示应用反向分子对接技术可以为“方证相应”关系的研究提供一条可行的技术途径.
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热休克蛋白90α、甲胎蛋白检测在原发性肝癌中的应用价值
目的:探讨热休克蛋白90α(Hsp90α)、甲胎蛋白(AFP)检测在原发性肝癌中的应用价值.方法:采用酶联免疫法检测105例原发性肝癌患者和54例健康体检者血浆中Hsp90α的表达,并通过回顾性数据收集血清中AFP的检测值,分析其表达水平及联合检测的临床应用价值.结果:Hsp90α、AFP相比于健康对照组在原发性肝癌患者血浆中高表达,差异均有统计学意义(P<0.05).原发性肝癌患者血浆中Hsp90α 的敏感度和特异度分别为91.4％、88.9％;AFP的敏感度和特异度分别为94.3％、83.3％;联合检测敏感度和特异度分别为99.5％、74.1％.结论:Hsp90α、AFP在原发性肝癌的诊断中有较好的临床应用价值,且联合检测可提高检测敏感度,具有更高的临床应用价值.
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氧化应激对Hsp90α、ARF1细胞内定位和相互作用的影响
目的:探讨氧化应激对热休克蛋白90α(Hsp90α)与ADP-核糖基化因子1(ARF1)细胞内定位、相互作用的影响.方法:应用500μM H2O2处理HepG2细胞,建立氧化应激模型,MTT比色法检测细胞活力,Western blotting检测Hsp90α和ARF1水平,细胞免疫荧光法、免疫共沉淀检测上述蛋白在氧化应激下的分布、共定位变化和相互作用.结果:MTT比色法结果提示,随氧化应激时间延长,细胞存活力降低;Western blotting结果显示,氧化应激可提高胞内Hsp90α和ARF1蛋白水平；免疫共沉淀结果显示,随氧化应激作用时间延长,Hsp90α与ARF1相互结合增多；细胞免疫荧光结果显示,随氧化应激作用时间延长,Hsp90α与ARF1荧光强度增强,并趋于沿胞膜分布.结论:提示氧化应激影响Hsp90α和ARF1的水平、胞内分布及相互作用.
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热休克蛋白90α在乳腺癌中的表达及与预后的关系
目的探讨热休克蛋白90α(Heat shock protein 90α,Hsp90α)在乳腺癌中的表达,评估其在乳腺癌预后中所起的作用.方法用免疫组织化学方法检测62例手术切除的乳腺癌组织中Hsp90α的表达,探讨其与临床病理特征的关系及对预后的影响.结果 (1)Hsp90α在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.9%(14/36).(2)Hsp90α表达与月经状况、肿瘤大小、淋巴结转移数以及组织学分级之间均不具相关性.(3)Hsp90α阴性表达组无病生存期及总生存期均明显优于Hsp90α阳性表达组(P=0.0079及P=0.0008).(4)Cox回归单因素分析显示淋巴结转移数目、组织学分级、肿瘤大小、Hsp90α表达及TNM分期与无病生存期及总生存期均明显相关;在Cox回归多因素分析中,发现腋淋巴结转移个数、组织学分级、Hsp90α表达、肿瘤大小与无病生存期及总生存期明显相关,而TNM分期末进入Cox回归模型.Hsp90α表达有减少生存时间的危险.结论 Hsp90α在乳腺癌中有一定的表达,Hsp90α有可能成为判断乳腺癌预后的有用指标.
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凋亡相关蛋白Livin、HSP90α在自身免疫性甲状腺疾病中的表达
Graves病(GD)和桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)是临床上常见的自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid diseases,AITD),但其发病机制尚未完全阐明.近年研究发现,细胞凋亡受体的激活及调节细胞凋亡的因子参与AITD的发病过程[1].大量研究证实Livin、HSP90α是体内重要的抗凋亡因子[2-3],Livin蛋白主要通过抑制caspase途径、激活TAK1/JNK1信号转导途径发挥抗凋亡作用[4],HSP90α蛋白通过阻止细胞分裂来发挥抗凋亡作用[5].关于Livin和HSP90α在GD及HT患者甲状腺中的表达情况,目前国内外均未见报道.本研究应用免疫组化S-P法对GD及HT甲状腺组织中凋亡相关蛋白Livin、HSP90α的表达进行研究,从细胞凋亡水平探讨GD和HT的发病机制.
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HSP90α和HSP90β在肝癌中共同上调表达
[目的]探讨热休克蛋白90α(HSP90α)和HSP90β在肝癌中的表达及意义.[方法]采用免疫组化法检测103例肝癌组织和79例非肝癌相关组织(正常肝组织,肝炎,肝硬化)中HSP90α和HSP90β的表达,并分析其与肝癌临床病理特征的关系.[结果]肝癌组织中,HSP90α和HSP90β的阳性表达率分别为82.52％和85.44％,均显著高于非癌组织(P＜0.05).HSP90α高表达与肝癌分化程度相关(P＜0.05),而与患者性别、病理类型、病理分期无关(P＞0.05).HSP90β高表达与肝癌分化程度和TNM分期相关(P＜0.05),而与患者性别、病理类型无关(P＞0.05).Spearman相关性分析显示,HSP90α和HSP90β在肝癌组织中协同表达(r=0.535,P＜0.001).[结论]HSP90α和HSP90β在肝癌组织中共同表达上调,可能可作为肝癌潜在的诊断和治疗靶点.
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胃癌组织中CTSD、HSP90α、EGFR的表达及临床意义
目的 检测组织蛋白酶D(Cathepsin D,CTSD)、热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)、表皮生长因子受体(epidemal growth factor receptor,EGFR)蛋白及其mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系,初步探讨CTSD、HSP90α、EGFR在胃癌发生、发展及浸润转移过程中的作用.方法 采用免疫组化及原位杂交(in situ hybridization,ISH)法检测110例正常胃黏膜组织、83例癌旁异型增生组织、110例胃癌组织及78例胃癌淋巴结转移组织中CTSD、HSP90α、EGFR蛋白及其mRNA的表达.结果 (1)CTSD、HSP90α、EGFR蛋白在110例正常胃黏膜组织、83例癌旁异型增生组织、110例胃癌组织及78例胃癌淋巴结转移组织中的阳性率分别为0、18.07％、80.91％、92.31％;0.9％、15.66％、75.45％、89.74％;0、12.05％、69.09％、84.62％.(2)相关分析结果显示,CTSD、HSP90α、EGFR在胃癌组织中的表达呈两两正相关(rs=0.853,P＜0.05;rs=0.639,P＜0.05;rs=0.734,P＜0.05).(3) CTSD、HSP90α、EGFR在胃癌中的表达均与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期相关(P＜0.05);与患者年龄、性别、肿瘤大小无显著相关性(P＞0.05).结论 CTSD、HSP90α与EGFR可能与胃癌发生、发展以及侵袭转移等恶性生物学行为密切相关.
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HSP90α、HSP90β在人胃癌组织中的表达
目的 探讨HSP90α、HSP90β蛋白与mRNA在人胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系.方法 采用免疫组化SP法检测两者蛋白在胃癌组织及癌旁正常组织的表达.采用RT-PCR法检测两者的mRNA在胃癌组织及癌旁正常组织的表达.结果 HSP90α、HSP90β主要定位于细胞质,其阳性率分别为82.9％和80.0％ (P ＜0.01),与胃癌分化、浸润、分期、转移相关.HSP90α、HSP90β mRNA在胃癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.01),并与胃癌的分化、分期、淋巴结的转移相关.结论 HSP90α、HSP90β蛋白在胃癌组织中的阳性表达以及其与胃癌生物学行为的关系提示HSP90α、HSP90β可能作为判断胃癌恶性程度的重要指标.HSP90α、HSP90β mRNA的高表达,且两者均与胃癌的发生、发展关系密切,可能与胃癌组织中的转录调控相关.
关键词： HSP90α HSP90β 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应 胃肿瘤 -
凋亡相关蛋白HSP90α和Clusterin在自身免疫性甲状腺疾病中的表达
目的 探讨凋亡相关蛋白HSP90α、Clusterin的表达与自身免疫性甲状腺疾病发生发展的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测26例Graves病(GD)、15例桥本甲状腺炎(HT)患者甲状腺组织标本和11例正常甲状腺组织中HSP90α、Clusterin的表达,并分析两者之间的相关性.结果 HSP90α在甲状腺滤泡上皮细胞胞质、胞核均有表达.HSP90α在GD、HT均以胞浆表达为主.Clusterin在GD、HT主要表达在甲状腺滤泡上皮细胞的胞浆和胞膜.GD和HT中HSP90α、Clusterin的表达均明显高于正常甲状腺组织.结论 HSP90α和Clusterin在GD中异常高表达可能主要通过抑制部分甲状腺细胞凋亡,间接促进甲状腺组织的增生;HSP90α和Clusterin在HT中甲状腺滤泡上皮的高表达可能是机体在病理情况下的一种代偿现象,能阻止部分甲状腺细胞凋亡,对机体产生保护作用.HSP90α、Clusterin的表达可能在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)的发生发展过程中起重要作用.
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HSP90α联合肿瘤标志物在早期肝癌诊断的应用研究
目的 探讨HSP90α联合肿瘤标志物在早期肝癌诊断中的应用价值.方法 以2012年1月至2017年8月我院收治的60例原发性肝癌患者为肝癌组,60例肝炎或肝硬化患者为肝病组,60例健康体检志愿者为对照组.检测各组AFP、CAI99、CEA及HSP90α[表达水平.结果 肝病组和肝癌组AFP、CA199、EA及HSP90α含量均显著高于对照组,且肝癌组明显高于肝病组.肝癌组AFP阳性率明显高于CEA、CA199(P＜0.01),HSP90α阳性率显著高于CEA(P=0.002),CA199(P=0.000).肝癌组的肿瘤标志物及HSP的阳性率均显著高于肝病组和对照组(P均＜ 0.01).60例肝癌患者50例肿瘤标志物检测显示为阳性,49例HSP90α为阳性,57例血清肿瘤标志物联合HSP90α检测为阳性.血清肿瘤标志物联合HSP90α检测敏感性均显著高于AFP、CA199及CEA三项合并检测(P＜0.05),而特异性值相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HSP90α联合多种血清肿瘤标志物,有效提高原发性肝癌诊断的敏感性,有利于原发性肝癌患者早预防早治疗的有效参考.
