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疼痛刺激神经生长因子基因在大脑皮层的过量表达
本文用福尔马林(Formalin)制作了小鼠疼痛及炎症模型,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因为内参照,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察了疼痛刺激神经生长因子基因(NGF mRNA)在大脑皮层的变化以及硫酸镁(MgSO4)对NGF mRNA表达的影响.
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静脉注射神经生长因子基因修饰的骨髓基质干细胞对辐射诱导小鼠肝细胞凋亡的影响
背景:研究发现神经生长因子能减少神经细胞和心肌细胞的凋亡.目的:假设神经生长因子基因修饰的骨髓基质干细胞对辐照诱导小鼠肝细胞凋亡具有保护作用,拟验证其可能性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-01/08在广东医学院实验动物中心实验室完成.材料:昆明小鼠120只,随机分细胞注射组40只、单纯照射组40只和正常对照组40只.方法:单纯照射组采用 60Coγ射线照射小鼠,吸收剂量率188.2 cGy/min,细胞注射组照射前2 d静脉给予神经生长因子基因修饰的骨髓基质干细胞5×1010 L-1;正常对照组不辐射损伤.观察小鼠30 d存活率和死亡动物存活时间;用原位末端标记法和流式细胞仪观察受照小鼠肝细胞凋亡及p53表达,再用Western blot进一步测定p53的表达水平.主要观察指标:①受照射小鼠30 d存活率.②受照射小鼠肝细胞凋亡情况.③受照射小鼠肝细胞p53表达.结果:细胞注射组30 d存活率高于单纯照射组.单纯照射组小鼠大量肝细胞发生凋亡,呈灶性.细胞注射组小鼠肝细胞凋亡少于单纯照射组, 凋亡细胞呈散在分布.细胞注射组肝细胞p53标记的荧光强度和细胞比例明显低于单纯照射组(P < 0.05).细胞注射组p53带灰度值低于单纯照射组(P < 0.05).结论:神经生长因子基因修饰的骨髓基质干细胞能明显抑制受照小鼠肝细胞凋亡及抑制肝细胞p53的表达.
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大鼠脑组织中神经生长因子基因克隆
目的：克隆大鼠脑组织中神经生长因子基因。方法：采用 RT-PCR方法，大鼠脑组织中的mRNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，扩增NGF基因片段，克 隆入T载体，并经序列测定。结果：RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度 504bp相符，T载体克隆测序与大鼠NGF基因100%同源。结论：采用RT-PCR和 T载体技术获得了大鼠脑组织中的NGF基因克隆，为在分子水平对NGF mRNA的研究奠定了基础 。
关键词： 神经生长因子基因 T-A克隆 逆转录聚合酶链式反应 大鼠 -
人神经生长因子基因血管内给药的安全性评价
目的:评价用高渗法向大鼠脑内导入二型重组腺相关病毒/人神经生长因子(NGF)β基因(rAAV2/hNGFβ)的安全性.方法:大鼠经颈外动脉输入甘露醇诱导血脑屏障开放,分别经颈外动脉输入生理盐水(对照组)、rAAV2/hNGFβ或rAAV2/GFP.对导入rAAV2/hNGFβ的大鼠,观察饲养期间的一般情况,d 60称重,测定痛敏感度、出血时间和凝血时间.麻醉后腹腔取血,行血液学、血液生化检测;脏器称重,计算脏器系数,并做病理组织学检查.对导入rAAV2/GFP的大鼠处死后用4%多聚甲醛-PBS原位灌注固定,脏器连续冰冻切片,用激光共聚焦显微镜观察rAAV2/GFP在各脏器中的分布及表达.结果:和对照组相比,导入rAAV2/hNGFβ大鼠的一般情况、痛敏感度、血液学和血液生化指标、脏器系数及各脏器病理组织学检查无明显差异.rAAV2/GFP分布器官包括肝、脾、肾、肾上腺、肺、甲状腺、垂体、胸腺、胃、小肠和胰腺组织.结论:经颈外动脉将rAAV2/hNGFβ导入大鼠脑内d 60,rAAV2/hNGFβ对大鼠全身无明显毒性;rAAV2/hNGFβ除在大鼠脑内有表达外,其在体内的生物学分布较为广泛.
