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甘油醛-3-磷酸脱氢酶——神经变性疾病发病机制及药物治疗的新热点
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是糖酵解途径中的一个关键酶,催化3-磷酸甘油醛生成1,3-二磷酸甘油酸.体内各种组织或细胞的能量代谢均需GAPDH参与.
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甘油醛后巩膜交联治疗豚鼠形觉剥夺性近视眼的研究
目的 探讨甘油醛对巩膜生物力学特征的影响及其对实验性近视眼的抑制作用.方法 实验研究.选取50只3周龄三色豚鼠,按随机数字表法分成5个组,每组10只.右眼为实验眼,左眼为对照眼.A组:右眼遮盖7d;B、C、D组:右眼遮盖21 d后分别给予0.9％生理盐水、0.05 mol/L甘油醛、0.5 mol/L甘油醛第1、8、15天Tenon囊下球后注射;E组:正常对照组.在每组中采用随机数字表法选取7只豚鼠行实验前及剥夺后7、14、21d的眼轴、屈光度及生物力学参数极限应力、极限应变、6％弹性模量的测量,其余3只豚鼠行组织学检查.实验眼和对侧眼之间数据的比较采用配对t检验,对眼轴与屈光度进行二元变量相关分析.结果 形觉剥夺后,A、B、C组实验眼玻璃体腔长度分别为(2.991±0.078)、(2.961±0.038)、(2.936±0.021) mm,眼轴长度分别为(7.263±0.133)、(7.732±0.099)、(7.665±0.055) mm,屈光度数分别(-2.214±2.881)、(-4.525±2.415)、(-1.607±0.866)D,与对侧眼相比,差异有统计学意义(t玻璃体腔=3,234,4.758,7.608;P玻璃体腔=0.018,0.002,0.001;t眼轴 =3.198,4.758,7.608;P眼轴=0.019,0.002,0.000;t屈光=-7.120,-4.020,-6.334;P屈光=0.000,0.005,0.001).D组、E组玻璃体腔长度、眼轴长度与对侧眼相比,差异无统计学意义(t玻璃体腔=0.542,-0.646;P玻璃体腔=0.607,0.539;t眼轴=0.542,-0.646;P眼轴=0.607,0.539).D组实验眼屈光度为(-3.921±0.874)D与对侧眼(-3.321±1.205)D相比差异有统计学意义(t屈光=-3.154,P屈光=0.020).在实验第21天结束时,B、C、D、E组实验眼的屈光度变化值总体差异有统计学意义(F=61.249,P=0.000),B、C、D组的屈光度变化值分别为(8.800±0.616)、(7.236±2.198)、(6.271±1.112)D,较正常对照组(0.934±0.158)D大,差异有统计学意义(PB=0.000,PC=0.000,PD=0.000).试验结束时,B组实验眼的极限应力和6％弹性模量分别为(7.988±3.677) MPa(P =0.002)和(19.938±4.871)MPa(P =0.001),较对侧眼分别降低了34.21％和34.38％,极限应变实验眼为(28.6±3.6)％(P =0.034),较对侧眼增加了19.17％.甘油醛交联后,C组实验眼的极限应力和6％弹性模量分别为(9.244±0.806) MPa(P=0.001)和(26.180±4.388) MPa(P =0.031),较对侧眼分别降低了23.13％和13.34％,极限应变实验眼为(26.2±1.0)％(P=0.016),较对侧眼增加了12.93％;D组实验眼的极限应力为(12.476±2.507)MPa(P=0.580),较对侧眼降低了5.50％,6％弹性模量为(30.446±3.410) MPa(P =0.314),较对侧眼增加了6.53％,极限应变为(23.8±1.8)％(P=0.253),较对侧眼降低了4.42％.不同浓度甘油醛交联与对照组实验眼的应力-应变曲线有明显的梯度变化.组织学检查:甘油醛交联后出现了巩膜组织的厚度变薄,细胞密度增加.无炎性细胞浸润.MMP-2在浅层巩膜、脉络膜实质层以及视网膜外丛状层的阳性表达明显降低.结论 甘油醛是一种安全有效的交联剂,能够显著增强巩膜的生物力学强度.采用甘油醛交联的方法能够有效控制形觉剥夺性近视眼(FDM)动物模型眼近视眼的发展.
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疼痛刺激神经生长因子基因在大脑皮层的过量表达
本文用福尔马林(Formalin)制作了小鼠疼痛及炎症模型,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因为内参照,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察了疼痛刺激神经生长因子基因(NGF mRNA)在大脑皮层的变化以及硫酸镁(MgSO4)对NGF mRNA表达的影响.
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甘油醛与葡萄糖滴眼对大鼠角膜生物力学特性影响对比观察
目的 通过甘油醛与葡萄糖滴眼,意在评估糖基化交联对大鼠角膜生物力学特性的影响.方法 实验研究.将25只SD大鼠随机分为五组,每组五只,两组分别给予浓度为0.005 mol/L、0.05 mol/L.的甘油醛,另两组分别给予浓度为0.5％、5％的葡萄糖滴右眼,每天2次,第五组为空白对照.7天后处死大鼠,应用微材料力学性能测试系统进行生物力学条带实验比较极限应力σ max(MPa),极限应变εmax(％),6％弹性模量E(MPs),并观察大鼠角膜的透明度和组织学检查.结果 甘油醛滴药组大鼠角膜生物力学强度明显增加.对照组角膜极限应力、极限应变、6％弹性模量分别为(2.053±0.853) MPa、(43.87％±1.89)％、(3.252±1.717) MPa.大鼠角膜极限应力0.005 mol/L、0.05 mol/L甘油醛组分别为(6.043±2.084) MPa (P =0.026)、(10.759±3.337) MPa (P =0.000);0.5％、5％葡萄糖组分别为(2.101±0.463) MPa (P =0.976)、(2.373±0.569) MPa (P =0.847).四个实验组的极限应变分别为(36.57％±3.09)％(P =0.276)、(28.53±1.89)％(P =0.009)、(34.80±8.14)％(P=0.090)和(34.32％±4.33)％(P=0.072).6％弹性模量分别为(7.718±1.076) MPa (P=0.004)、(14.102±4.011) MPa (P =0.000)、(3.927±0.314) MPa (P =0.629)、(5.492±0.659) MPa(P =0.120).组织学检查提示甘油醛滴药组胶原纤维间隙变窄,且与浓度有一定相关性,葡萄糖滴药组胶原纤维密度变化不大,5％葡萄糖组角膜上皮出现水肿,而透明度无明显变化.结论 糖基化交联可以有效促进角膜胶原交联,增加其生物力学强度.甘油醛交联力比葡萄糖强,其作为治疗圆锥角膜的交联剂有待于进一步的动物实验和临床研究.
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D、L-甘油醛对27项常规生化项目检测的影响
目的 研究新型血糖保护剂D、L-甘油醛对27项常规生化检测的影响及其机制,初探用血糖管检测常规生化的可行性.方法 病人血清30份,每份配成含甘油醛高低浓度(终甘油醛含量为5 mmol/L、2 mmol/L)的血清及1份加有同体积水的血清为对照.在3台生化分析仪上分别用不同的试剂、方法检测27项常规生化.用肌酐检测的3种方法:苦味酸速率法及2种酶法(酶紫外法及酶偶联Trinder显色法)来讨论此种影响的机理.结果 甘油醛含量为5 mmol/L,对Ure、TP、Alb、Glu、ALP、D-Bil、apoA Ⅰ、apoB、K+检测与对照组没有差异(P＞0.05).而对Cr、UA、ALT、γGT、ChE、T-Bil、CK、HDL-C、CK-MB、LDH、HBDH、Ch、TC、Na+、Cl-、Ca2+、iP检测有显著性差异(P＜0.05).甘油醛含量为2 mmol/L,对T-Bil、UA、TG、Cr测定仍有显著性差异.结论 甘油醛具有还原性,对Cr、UA、ALT、γGT、ChE、T-Bil、CK、CK-MB、LDH、HBDH、TC、TG、Na+、Cl-、Ca2+、iP检测有干扰.干扰与甘油醛的含量有关,含量愈低干扰愈小.干扰与检测方法有关,选择适当的检测方法可避免干扰,初步达到用血糖管同时检测生化项目的目的.
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甘油醛在全血样品中抗糖酵解的实验分析
目的了解甘油醛(D,L-GA)在全血样品中抗糖酵解的作用以及对其他常规生化检测项目的影响.方法在肝素抗凝管中分别加入不同量的甘油醛原液,配制成不同含量的肝素/甘油醛抗凝管.样品放置室温(23℃)孵育0、2、4、6、8 h后,以2 000 r/min离心5 min分离血浆,测定葡萄糖.结果(1)不同浓度的D,L-GA对葡萄糖浓度影响的观察:不加D,L-GA的样品葡萄糖浓度到8 h已下降42.1%,而含有10mmol/LD,L-GA样品中的葡萄糖浓度8 h仅下降1.7%.(2)病人样本,加D,L-GA葡萄糖浓度与初始葡萄糖浓度的回归式为:y=1.032X-0.2.(3)肝素/甘油醛样品与肝素/氟化钠样品放置时间的观察:含有10mmol/L D,L-GA样品中的葡萄糖浓度24h仅下降1.7%.(4)全血肝素样品和肝素/甘油醛样品对常规生化检测项目的影响观察:全血肝素样品与肝素/甘油醛样品比较,肌酐(碱性苦味酸法)t=9.322,P＜0.01,差别有高度显著性;ALT(速率法)t=2.580、尿酸(酶法)t=2.340,均0.05＞P＞0.01,差别有显著性.其他检测项目均P＞0.05.结论甘油醛在全血样品中有良好的抗糖酵解作用.
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糖酵解引起血糖测定前误差的原因及对策
血葡萄糖测定是临床实验室的常规检测项目,对某些疾病的诊断、治疗、病情监测具有非常重要的临床意义.目前,血葡萄糖的测定大多数实验室采用葡萄糖氧化酶(GOD-POD)法或己糖激酶(HK)法,两种方法都易于实现标准化,后者的特异性比前者高,实验中的误差得到了很好的控制,是目前公认的测定血葡萄糖的参考方法.
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甘油醛与氟化钠抑制离体血血糖降低作用的评价
目的用电极法直接测定全血血糖及乳酸,比较甘油醛与氟化钠对血葡萄糖的保护作用和对血乳酸生成的抑制作用.方法采集20份血标本,每份分别用肝素抗凝加甘油醛抗糖酵解处理、草酸钾抗凝加氟化钠抗糖酵解处理及肝素抗凝加生理盐水对照,观察甘油醛组、氟化钠组和对照组在4、25 、37 ℃时即刻、2 h、4 h与8 h血中葡萄糖、乳酸的变化情况.结果离体肝素抗凝全血血糖下降及乳酸上升的速度与放置时间、温度成正比.传统的氟化钠保护剂作用缓慢,在4 h后才完全发挥作用,25 ℃2 h加与未加氟化钠的抗凝全血血糖下降率基本相同(7.40%、7.36%).25 ℃时,甘油醛组在8 h内血糖基本稳定.4 ℃氟化钠组乳酸基本稳定.结论在4 ℃和25 ℃的温度下,甘油醛能在8 h内保持血糖基本稳定,对血糖的保护效果明显优于氟化钠,应取代氟化钠用于临床血糖的准确测定,但不能作为乳酸测定抑制剂.
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甘油醛局部应用对大鼠角膜生物力学特性的短期影响
背景 目前已有一些角膜胶原交联的方法可用于圆锥角膜的治疗,但其安全性均存在一定问题.甘油醛是一种效果好、不良反应少的交联剂,但其对角膜生物力学特点的作用尚不清楚. 目的 评估甘油醛点眼对大鼠角膜生物力学特性的影响.方法 将15只SD大鼠按随机数字表法分为3个组,分别为0.005 mol/L甘油醛组、0.050 mol/L甘油醛组和空白对照组,每组5只,均取右眼为实验眼；每日点眼2次,连续7d.实验终点处死大鼠,获取大鼠角膜,采用读字法评估各组大鼠角膜的透明度,然后切取两端附带2 mm巩膜组织的角膜中央2 mm×6 mm的条带进行生物力学检测,比较各组大鼠角膜6％弹性模量E(MPa)、极限应力σmax (MPa)、极限应变εmax(％)等指标变化,并行组织病理学检查. 结果 0.005 mol/L甘油醛组、0.050 mol/L甘油醛组和空白对照组均可透过大鼠角膜清晰显示文字.采用6％应变时,0.005 mol/L甘油醛组角膜的平均应力为(0.463±0.065) MPa,0.050 mol/L甘油醛组为(0.846土0.240)MPa,均较空白对照组的(0.195±0.103)MPa明显升高,差异均有统计学意义(P=0.029、0.000)；0.005 mol/L甘油醛组、0.050 mol/L甘油醛组、空白对照组角膜极限应力分别为(6.043±2.084)、(10.759±3.337)、(5.295±1.313) MPa,其中0.050 moL/L甘油醛组较空白对照组明显升高,差异均有统计学意义(P=0.007),0.005 mol/L甘油醛组与空白对照组间比较差异无统计学意义(P=0.660).0.005 mol/L甘油醛组、0.050 mol/L甘油醛组角膜极限应变分别为(36.57±3.09)％、(28.53±1.89)％,均较空白对照组的(43.87±1.89)％明显降低,差异均有统计学意义( P=0.009、0.000).0.005 mol/L甘油醛组、0.050mol/L甘油醛组6％弹性模量E值是(7.718±1.076) MPa和( 14.102±4.011) MPa,明显高于空白对照组的(3.252±1.717)MPa,差异均有统计学意义(P=0.029、0.000).空白对照组大鼠角膜组织切片显示胶原纤维密度低,0.050 mol/L甘油醛组较0.005 mol/L甘油醛组大鼠角膜胶原纤维密度致密,角膜上皮层及内皮层完整.结论 甘油醛交联明显改善了角膜的生物力学指标和胶原纤维密度,但如用于对圆锥角膜的治疗仍需进一步研究角膜交联的长期效果及其安全性.
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肝素-甘油醛抗凝保护剂应用于血糖和血生化指标测定的结果分析
血糖测定时,由于全血标本红细胞不停地进行糖酵解代谢,在转送或处理过程中葡萄糖浓度会大幅降低,给临床带来误导.我们参照有关文献[1],应用肝素-甘油醛抗凝保护剂阻止全血标本中葡萄糖的体外分解,获得了较好的效果.结果报道如下.
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Menin在胃癌细胞中的表达
我们选取5株不同分化程度的人胃癌细胞,检测Menin的表达,现报道如下.一、材料与方法1.材料和细胞培养:Trizol、逆转录(RT)试剂盒、聚合酶链反应(PCR)试剂盒、荧光二抗、辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗、Menin和甘油醛-3-磷酸脱氢酶( GAPDH)抗体购自美国Santa公司.人胃癌细胞AGS、BGC-823、SGC-7901、MKN-28和人胃黏膜上皮细胞GES-1均为本实验室保存,细胞常规培养并进行后续实验.2.RT-PCR检测:采用Trizol试剂,按说明书提取细胞总RNA,应用鼠白血病病毒(MMLV)逆转录酶将总RNA逆转录成cDNA并进行扩增和琼脂糖凝胶电泳分离,用Tanon-2500凝胶成像进行检测.
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探讨三种血糖稳定剂抗葡萄糖酵解稳定效果的比较
目的 比较三种血糖稳定剂抗葡萄糖酵解的稳定效果.方法 对72例受检者血液标本,分别测定其普通肝素锂抗凝管、氟化钠-草酸钾抗凝管、D.L甘油醛肝素锂抗凝管、分离胶采血管在25℃室温放置0、1、2、4、8、12、24、48h和不及时离心的分离胶-促凝剂采血管各时段的血糖浓度,并对结果进行统计分析.结果 与0h测定值比较,在24h、48h血糖测定值逐渐降低,差异有显著性(P<0.05);甘油醛抗凝管在24h内血糖测定值稳定,差异无显著性(P>0.05),在48h血糖测定值降低,差异有显著性(P<0.05).其他时段的三种血糖稳定剂与0h比较差异均无显著性(P>0.05).结论 作为血糖测定稳定剂甘油醛起效快,稳定时间长,优于氟化钠-草酸钾,而分离胶-促凝剂管必需及时离心,各有优缺点.建议依据本院血样运送情况和检验目的 情况选择合适的采血管.
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D,L-甘油醛抑制葡萄糖酵解的探讨
目的探讨D,L-甘油醛具有抗糖酵解的作用从而保持了血液中葡萄糖浓度.方法用含有D,L-甘油醛的肝素抗凝剂作为抗凝和抗酵解剂,加入甘油醛的全血标本孵育不同的时间再用日立7170A测定糖及其他分析物.结果甘油醛对红细胞的糖酵解有很好的抑制作用从而保持了葡萄糖浓度的8 h恒定,其佳浓度在4～5 mmol/L,并且甘油醛作为葡萄糖酵解抑制剂对甘油三脂和肌酐有明显的影响作用.结论甘油醛能有效地保护全血标本中的糖浓度长达8 h,除对甘油三脂和肌酐有明显影响之外,对其他常规生化检验指标无影响.
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三种血糖稳定剂抗葡萄糖酵解的效果比较
目的 比较三种血糖稳定剂抗葡萄糖酵解的稳定效果.方法 对72例受检者血液标本,分别测定其普通肝素锂抗凝管、氟化钠-草酸钾抗凝管、D.L甘油醛肝素锂抗凝管、分离胶采血管在25℃室温放置0、1、2、4、8、12、24、48h和不及时离心的分离胶-促凝剂采血管各时段的血糖浓度,并对结果进行统计分析.结果 与Oh测定值比较,在24h、48h血糖测定值逐渐降低,差异有显著性(P<0.05);甘油醛抗凝管在24h内血糖测定值稳定,差异无显著性(P>0.05),在48h血糖测定值降低,差异有显著性(P<0.05).其他时段的三种血糖稳定剂与Oh比较差异均无显著性(P>0.05).结论 作为血糖测定稳定剂甘油醛起效快,稳定时间长,优于氟化钠-草酸钾,而分离胶-促凝剂管必需及时离心,各有优缺点.建议依据本院血样运送情况和检验目的 情况选择合适的采血管.
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甘油醛抗血葡萄糖酵解的观察
血液葡萄糖是临床实验室常用的检验项目,对许多疾病的诊断、治疗和病情检测有很重要的临床意义,是糖尿病诊断的可靠依据.但由于全血中红细胞不停地进行糖酵解,因此在转送或处理过程中葡萄糖浓度会大幅度下降,影响测定结果的准确性,甚至给临床带来误导,以往人们采取一些措施以减少全血样本中糖的丢失、这些方法有:样品收集后马上离心,分离血浆;样品在装运过程中保持低温(但不能冰冻);床旁检测;加入抗糖酵解剂,如氟化物,碘乙酸盐、甘露糖、甘油醛等,参考有关资料[1]我们采用国产甘油醛进行了一些工作,现报道如下:
