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RDPCR检测DNA损伤定位于核苷酸水平的研究
目的 简化RDPCR建立程序,并在核酸序列水平精确定位DNA损伤. 方法 培养TK6细胞,抽提基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针.扩增k-ras基因外显子2(以下称短片段).酶切短片段和基因组DNA构建损伤模型,前者经依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)扩增,每一步产物作凝胶电泳,终产物与单链探针杂交显色,并进行测序;后者以短片段建立的实验条件进行RDPCR扩增,产物与单链探针杂交显色,并进行测序. 结果 凝胶电泳可见酶切短片段在RDPCR中每一步骤的目的 产物条带;酶切短片段和酶切基因组DNA的RDPCR产物均在相应位置出现杂交条带,测序证实损伤均位于Hinfl在k-ras外显子2上的酶切位点. 结论 短片段建立RDPCR的实验条件简单易行;并首次利用RDPCR检测DNA损伤精确定位于核酸序列水平的碱基位置.
关键词: 依赖随机化末端连接物PCR DNA损伤 定位检测 核苷酸 -
胃癌与Wnt/β-连环素信号通道活化的关系
多种人类癌肿的发生与Wnt信号传导通道活化有关[1,2].我们对胃癌病例进行了β-连环素(Catenin)的胞浆聚集及核定位检测并探讨了与多种临床病理学指标的关系,发现β-Catenin作为Wnt信号传导通道的阳性调节因子参与部分胃癌的发生.
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前哨淋巴结定位检测在结直肠癌中的临床应用
淋巴结转移是影响结直肠癌预后的重要因素,同时也是制定术后辅助治疗方案的重要依据.但是,目前临床上通过常规方法检出的阳性淋巴结的数量和位置与实际的淋巴结转移情况常存在一定的差距,导致分期过低.其原因除了与病理科医师取材的方法和认真程度有关外,还在于淋巴结中存在常规病理检查无法检测到的隐匿转移[1-2].虽然,通过多层连续切片、免疫组织化学(IHC)及反转录聚合酶链(RT-PCR)等技术,能够提高对淋巴结转移检测的准确性,发现隐匿转移的淋巴结,但尚不能对手术获取的所有淋巴结均采用这些昂贵而复杂的检测方法.因此,需要更准确的评估方法帮助判断肿瘤周围淋巴结的转移情况,从而针对不同患者实施个性化治疗.
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前哨淋巴结定位检测在早期诊断进展期胃癌中的作用分析
目的:研究前哨淋巴结定位检测在早期诊断进展期胃癌中的作用.方法:选择本院接诊的100例进展期胃癌患者进行研究.使用亚甲蓝对前哨淋巴结(SLN)进行定位,再取活检,在术后行常规的HE病理活检.结果:100例进展期胃癌患者中,SLN检出患者98例,检出率98.00%.98例SLN患者中,SLN对于胃癌预测的敏感性为90.74%(49/54),总的准确率为94.90%(93/98),总特异性为100.00%(44/44),总假阴性率为9.26%(5/54);随胃癌浸润深度的逐步增加,SLN用来预测胃癌的敏感性及准确率逐步降低,假阴性率逐步增高,差异均具有统计学意义(P<0.05);从L区、M区到U区,SLN用来预测胃癌的敏感性及准确率逐步升高,假阴性率逐步降低,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:前哨淋巴结定位检测对于早期诊断进展期胃癌的敏感性准确率都很高,特别是对于早期胃癌的筛查具有重要价值,值得临床推广.
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睾丸恶性肿瘤P-糖蛋白定位检测及临床意义
睾丸恶性肿瘤是泌尿生殖系统中主要恶性肿瘤之一.Ⅰ期精原细胞瘤(SGCT)对放疗敏感,而Ⅱ、Ⅲ(Ⅳ)期精原细胞瘤及非精原细胞(NSGCT)却常需化疗预防及治疗其全身播散及转移.而肿瘤的耐药性常使常规化疗药物不能有效杀伤恶性肿瘤细胞,从而导致肿瘤的复发.因此,研究睾丸肿瘤的耐药机理,对提高睾丸恶性肿瘤的化疗疗效具有重要意义.本文采用JSB1 P-糖蛋白(P-gp)单克隆抗体,免疫组化法检测12例睾丸恶性肿瘤组织P-gp表达部位及强度,探索睾丸恶性肿瘤耐药机理.以胞浆或胞膜棕黄色着色为阳性细胞,根据有无着色及着色深浅分为4个等级.
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小儿颅内恶性肿瘤P-糖蛋白定位检测及临床意义
小儿颅内肿瘤体外MTT药敏实验结果表明肿瘤细胞对药物非常敏感,然而临床资料显示手术后或放疗后化疗与否与患儿生存期无关.因此,探讨小儿颅内肿瘤化疗失败的原因,对提高儿童颅内肿瘤化疗疗效具有重要意义.本文采用JSB1P-糖蛋白单克隆抗体,免疫组化法检测20例小儿颅内恶性肿瘤组织P-糖蛋白表达部位及强度,探索颅内恶性肿瘤耐药机理.以胞浆内棕黄色着色为阳性细胞,根据阳性细胞百分率分为4个等级.
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核酸序列水平定位DNA损伤的实验研究
目的 研究在核酸序列水平定位DNA损伤的方法.方法 培养TK6细胞,抽提基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针.酶切基因组DNA构建损伤模型,应用依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)进行Southern blot,对产物进行测序.结果 酶切DNA的RDPCR产物在相应位置出现杂交条带,测序证实损伤位于HinfⅠ在k-ras外显子2的酶切位点.结论 将RDPCR和测序技术结合在一起,可在核酸水平上准确定位DNA损伤的碱基位置.
关键词: DNA损伤 定位检测 K-ras基因 依赖随机化末端连接物PCR -
前哨淋巴结定位检测在结肠癌中的应用
前哨淋巴结(sentinel lymph node,SLN)的概念早在1863年由Vichow提出,是指第一个接受从肿瘤原发部位引注的淋巴结.