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食品中4种常见致病菌的磁珠吸附-PCR检测方法研究
目的 研究磁珠粒子在食品样品中对常见致病菌的吸附效果.方法 以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、阪崎克罗诺杆菌为研究对象,通过一系列优化,确定磁珠佳吸附条件,并研究了其在模拟添加样品中的吸附效率.结果 佳吸附条件为:磁珠粒径2.0 ～3.0 μm,磁珠用量50 μl,孵育时间60 min,吸附温度37℃.磁珠粒子对模拟添加样品,如果汁、牛奶和鸭肉中大肠杆菌、单核细胞增生李斯特菌、阪崎克罗诺杆菌、金黄色葡萄球菌的吸附效率分别为50％～84％、46％ ～66％及54％～74％.结论 磁珠分离技术操作简单、吸附效率高,可满足后续PCR检测的需要.
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树脂法分离纯化喜树果中喜果苷的研究
自从1966年Wall等首次从喜树中分离出喜树碱并发现其具有显著抗癌活性后[1],至今已有20多种化学成分从中分离出来,包括喜树碱(camptothecine,CPT)、10-羟基喜树碱、11-羟基喜树碱、10-甲氧基喜树碱、喜树次碱、白桦脂酸、喜果苷(vincoside-lactam VCS-LT)等[2,3].人工合成也取得了可喜的进展[4].研究发现喜树果中喜果苷明显高于喜树碱及其他类似物[5].目前由喜树果中分离提取喜果苷采用溶剂萃取和氧化铝柱色谱法,过程复杂,收率很低,且尚处于实验室阶段.大孔树脂具有理化性质稳定、吸附选择性独特,吸附效率高、易再生等优点.本实验采用树脂吸附分离法从喜树果中分离纯化喜果苷.
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大孔吸附树脂对龙胆中龙胆苦苷吸附分离研究
龙胆是一种常用中药,有清湿热、利肝胆的功能,所含龙胆苦苷等水溶性成分是主要活性成分.分离龙胆苦苷的方法多为硅胶或聚酰胺柱色谱[1～3],往往需多次上柱,提纯效果不理想.大孔树脂具有理化性质稳定、吸附选择性独特,吸附效率高、不受无机盐类存在的影响、易再生等优点.本实验选择7种大孔树脂分离龙胆中龙胆苦苷,并采用HPLC法测定龙胆苦苷含量.
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空气中贲亭酸甲酯测定方法的研究
[目的]建立空气中贲亭酸甲酯的监测分析方法.[方法]贲亭酸甲酯用硅胶吸附,丙酮解吸,GC-FID测定,以保留时间定性,外标法定量. [结果]以5L含90μg贲亭酸甲酯模拟气体作实验,吸附效率为82%.以18μg贲亭酸甲酯作实验,解吸效率为94%,采样体积为10L时,仪器低检出限约为0.02mg/M3.[结论]该方法定量准确,灵敏度高,操作简便,能满足空气中微量贲亭酸甲酯监测需要.
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免疫磁珠捕获法检测志贺菌的模拟研究
目的 评估所制备的志贺菌免疫磁珠特异性富集作用,为建立基于免疫磁珠捕获法的志贺菌检测流程提供技术依据.方法 制备志贺菌属细菌(鲍氏志贺菌除外)、非目标菌(大肠埃希菌、产气肠杆菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、弗尼斯弧菌、表皮葡萄球菌)的菌悬液,利用志贺菌特异性多抗免疫磁珠进行捕获,接种平板后进行菌落计数,并计算免疫磁珠的特异性及非特异性吸附效率.设计干扰试验,在含有104 cfu/mL的大肠埃希菌悬液中,加入不同浓度的目标菌,用所制备的磁珠进行捕获,评估免疫磁珠的特异性富集效率.在经3和6h预增菌的含有已知量目标菌的奶粉模拟标本及未增菌的粪便模拟标本中,分别加入所制备的磁珠进行捕获,评估基于免疫磁珠捕获法的志贺菌检测流程的可行性.结果 菌落计数表明,制备的志贺菌免疫磁珠对痢疾志贺菌、福氏志贺菌和宋内志贺菌的捕获效率均超过30％,对6种非目标菌的非特异性吸附效率＜3％.干扰试验结果显示,与常规直接平板接种法相比,免疫磁珠捕获法的敏感性提高了约100倍；奶粉和粪便模拟试验的结果显示,免疫磁珠捕获法的低检测限分别可达101 cfu/25 g和101 cfu/mL,并对标本中目标菌的检出率有一定提高.结论 志贺菌免疫磁珠对志贺菌属细菌(鲍氏志贺菌除外)具有一定特异捕获与富集作用,可应用于实验室的日常检测工作.
