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肝硬化患者外周血CD19+ CD25+细胞表达的临床意义
探讨肝硬化患者外周血CD19+ CD25+双阳性细胞表达的临床意义.采用流式细胞仪检测70例肝硬化患者和20例健康对照者外周血CD19+ CD25+细胞、T淋巴细胞以及B淋巴细胞的表达,免疫比浊法检测血清免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)水平.肝硬化患者外周血CD+3、CD+3 CD+8细胞表达率和CD+3、CD+3 CD4+、CD+3 CD+8细胞绝对数明显低于对照组(P均＜0.01);而CD+3 CD4+/CD+3 CD+8比值、CD19+、CD19+ CD25+细胞表达率以及免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)水平显著增高(P均0.05).肝硬化患者CD19+ CD25+细胞表达率与ALT、IgG、IgA呈正相关(r为0.548、0.541、0.334,P均＜0.05).食管胃底静脉曲张组CD+3、CD+3 CD4+细胞绝对数以及CD+3 CD+8细胞表达率和绝对数明显低于未曲张组(P均＜0.01);而CD+3 CD4+细胞表达率、CD+3 CD4+/CD+3 CD+8比值、免疫球蛋白(IgM、IgA)水平高于未曲张组(P均＜0.01).肝硬化患者Child-Pugh分级越差,CD19+ CD25+细胞表达率和IgG、IgM、IgA水平明显升高(P均＜0.01),而CD+3、CD+3 CD4+、CD+3 CD+8细胞绝对数明显降低(P均＜0.05).检测肝硬化患者外周血CD19+ CD25+细胞表达水平能反映患者的肝脏损伤程度和体液免疫状况,有助于指导临床治疗和预后判断.
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抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒的构建与瞬时表达
目的 构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行瞬时表达.方法 采用RT-PCR技术,设计针对信号肽的简并引物,钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因,以质粒PAG4622为模板,钓取人抗体IgG1重、轻链恒定区基因,分别将重、轻链可变区基因与相应的恒定区基因进行拼接,将完整的重、轻链嵌合基因分别与真核表达载体pOptiVEC和PcDNA3.3连接,构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,将其通过脂质体法共转染至293T细胞中进行表达.通过RT-PCR法检测嵌合抗体基因的转录水平,ELISA法检测嵌合抗体的表达,流式细胞术(FCM)分析嵌合抗体的结合活性.结果 抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒构建正确;RT-PCR显示嵌合抗体基因在293T细胞中成功转录;转染后48、72、96和120 h,细胞培养上清中嵌合抗体的含量分别为7.47、11.72、8.02和18.28 ng/ml;FCM检测其能特异性与IL-2Rα链结合.结论 已成功构建了抗CD25人鼠嵌合抗体基因的真核表达质粒,并能在293T细胞中瞬时表达.
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CD25抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析
目的获得抗人CD25分子单抗的轻链及重链可变区基因,并进行序列分析.方法采用RTPCR,从WuTac细胞总RNA中扩增出轻链、重链可变区基因,进行克隆并作核苷酸序列分析.结果构建的PMD18-T-VL和PMD18-T-VH重组克隆载体,酶切与预期结果相符.VH和VL基因序列与鼠抗体的同源性大于80%.克隆的重链可变区基因长度为351bp,属于鼠重链Ⅲ(C)亚类.轻链可变区基因长度为324bp,属于鼠轻链Ⅳ亚类.结论本研究采用RT-PCT法扩增出轻链及重链可变区基因,并进行了序列测定和分析,为进一步构建嵌合抗体以及单链抗体奠定了基础.
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紫杉醇对小鼠T细胞的影响
为研究抗癌药紫杉醇(PTX)对T细胞行为的影响及其分子机制,利用流式细胞术分析多克隆刺激剂Con A刺激下T细胞行为:羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记技术分析T细胞增殖相关指数;碘化丙锭染色分析细胞周期分布;Annexin V-PI染色检测T细胞凋亡;荧光标记的单克隆抗体染色检测T细胞活化表达CD25的百分率.结果显示,PTX对ConA刺激下小鼠T细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.该浓度范围PTX阻滞T细胞于G2/M期,诱导凋亡及抑制CD25表达.25 nmol/L的PTX与10 nmol/L的环孢素A(CsA)具有明显的协同抑制效应.以上结果表明PTX可明显抑制多克隆刺激剂ConA诱导的T细胞体外增殖,是G2/M期阻滞、凋亡诱导和CD25表达抑制等多种机制共同作用的结果.
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FTY720抑制ConA诱导小鼠T细胞CD25的表达
FTY720(以下简称FTY),是来自冬虫夏草抽提物的一种新合成的免疫抑制剂[1].FTY与目前常用的免疫抑制剂环孢素(CsA)有不同的药理作用.当在体外刺激大鼠脾细胞时,1 000 nmol/L的FTy对IL-2的产生没有抑制作用,而这一浓度的CsA已经可以完全抑制IL-2的生成[1].
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强直性脊柱炎并发葡萄膜炎临床分析
目的:探讨强直性脊柱炎(AS)并发葡萄膜炎的临床特点、诊断和治疗,提高对该病的认识.方法:回顾性分析近3年江苏省苏北人民医院风湿免疫科门诊及住院部301例AS患者的临床资料,将AS并发葡萄膜炎的患者及未并发葡萄膜炎的患者分别定义为葡萄膜炎组及非葡萄膜炎组,进行统计学分析.结果:301例AS患者中,男性218例,女性83例,男女比约2.6:1;曾经或就诊时有葡萄膜炎的患者为36例(11.96％).葡萄膜炎组及非葡萄膜炎组患者的性别(P=0.119)、发病年龄(P=0.563)、HLA-B27阳性率(P=1.000)以及疾病活动度方面差异均无统计学意义.而葡萄膜炎组平均病程[(7.84±7.45)年]长于非葡萄膜炎组[(4.14±4.43)年,P=0.006];葡萄膜炎组患者中CD25升高的患者比例(55.56％)高于非葡萄膜炎组(36.60％,P=0.029);Bath AS功能指数(BASFI)评分在葡萄膜炎组(2.29±2.36)高于非葡萄膜炎组(0.96±1.53,P=0.003);葡萄膜炎组中77.78％患者有外周关节受累,高于非葡萄膜炎组(47.55％,P=0.001).治疗方面,葡萄膜炎组生物制剂使用率为41.67％,高于非葡萄膜炎组(24.53％,P=0.029).结论:AS患者的葡萄膜炎发病与病程相关,随着病程的延长葡萄膜炎发病率升高.葡萄膜炎组中有较多患者CD25升高,提示CD25可能与葡萄膜炎相关.伴发葡萄膜炎的AS患者更易有躯体功能受损和外周关节受累.AS病程中若出现葡萄膜炎,需积极进行局部及全身治疗;若疗效不佳,可建议患者使用生物制剂.
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急性发作期和缓解期哮喘患者外周血CD4+CD25+CD127lo/-Treg的检测和意义
目的:通过检测健康人、急性发作期和缓解期哮喘患者外周血CD4+CD25+CD127lo/-Treg细胞的表达水平,探讨该细胞表达水平的变化与哮喘患者病情严重程度的关系.方法:采集急性发作期、缓解期哮喘患者及健康人外周抗凝血,用流式细胞术检测其外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg细胞占CD4+T细胞的比例.结果:哮喘急性发作组和缓解组患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg细胞占CD4+T细胞的百分比低于健康对照组(P<0.05);哮喘急性发作期组CD4+CD25+CD127lo/-Treg细胞占CD4+T细胞的百分比低于哮喘缓解组(P<0.05).结论:CD4+CD25+ CD127lo/-Treg细胞数量减少可能参与了哮喘的发病过程.
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肝癌患者外周血 CD4、CD25以及调节性 T细胞的临床研究
目的：对肝癌患者外周血 CD4、CD25以及调节性 T 细胞进行临床研究分析。方法选择2011年2月至2013年5月于我院治疗的肝癌患者50例肝癌患者作为观察组，另选择50例健康人群作为对照组，检测并比较 CD4、CD25以及调节性 T 细胞在两组病例中的表达情况。结果观察组 CD4CD25 Tr 占 CD4 T 细胞比例明显高于对照组，且观察组Ⅲ、Ⅳ期明显高于Ⅰ、Ⅱ期，差异有统计学意义（P ＜0．05）。经过大剂量 IL-2、CD3以及 PBMCs 的不断刺激后， CD4CD25Tr 以及 CD4CD25T 能够在体外进行培养并且进行扩增。观察组与对照组 CD4CD25Tr 增殖能力明显弱于CD4CD25T 细胞（P ＜0．05），然而两组之间比较无较大差异（P ＞0．05）。体外增殖抑制试验结果表明 CD4CD25Tr 能够明显抑制 CD4CD25T 细胞增殖，当两种细胞数目相同时，两组中两种细胞比例为1：1时，其抑制率高，且观察组抑制率明显高于对照组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论CD4CD25Tr 细胞能够抑制肝癌患者的免疫功能，且与肝癌发展密切相关，进一步提示清除 CD4CD25Tr 细胞能够提高治疗肝癌的效果。研究 CD4CD25Tr 细胞相关功能及作用机制，可为肝癌治疗提供新的靶点。
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CD19、CD25在新生儿缺氧缺血性脑病的表达及临床意义
目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿外周血B淋巴细胞亚群CD19、CD25的表达及临床意义.方法 收集62例HIE组新生儿和30例对照组新生儿股静脉血标本,采用流式细胞仪(FCM)检测外周血B淋巴细胞CD19+、CD25+、CD19+/CD25+百分率,同时应用流式直方图分析细胞表面CD19、CD25分子的表达密度.结果 HIE组新生儿外周血B淋巴细胞CD19+、CD25+、CD19+/CD25+百分率分别为17.93±3.10、1.26±1.04、0.64±0.42,均较对照组低(P<0.05);HIE组不同程度病情的CD19+、CD19+/CD25+百分率比较差异有统计学意义(P<0.05),重度HIE组降低较为明显;HIE组CD19、CD25的平均荧光强度分别为13.53±5.48、1.37±0.33,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 HIE组患儿CD19、CD25的表达异常,B淋巴细胞功能受抑制,检测CD19、CD25对了解HIE的免疫功能及病情具有重要临床意义.
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肝癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义
背景与目的:CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells)在自身免疫耐受、移植和抗肿瘤应答中起着重要的作用,它们在肿瘤患者中的作用机制尚未阐明.本研究分析、探讨肝癌患者肿瘤组织和外周血CD4+CD25+调节性T细胞频率的临床意义.方法:应用流式细胞仪分析肝癌患者的肿瘤组织、外周血和非肝癌对照组中单个核细胞(PBMCs)的CD4+CD25+调节性T细胞频率.结果:肝癌患者外周血CD4+CD25+T细胞占PBMCs(6.9±2.8)%,肝癌组织CD4+CD25+T细胞占(6.7±1.6)%,均较对照组显著增高.并且CD4+CD25+T细胞的阳性率与淋巴结转移率和TNM分期存在相关性.淋巴结转移阳性和TNM分期越晚,CD4+CD25+T细胞的阳性率越高.结论:CD4+CD25+调节性T细胞在肝癌患者中比例升高,可能是肝癌患者细胞免疫功能削弱的机制之一.
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CD4+CD25high调节性T细胞与器官免疫耐受
已经证明器官移植受者体内存在抑制性或调节性细胞,能下调抗原特异性的T细胞反应,进而有利于移植物特异性免疫耐受.1995年Sakaguchi[1]首次报道,表达IL-2受体α链(CD25)的CD4+T细胞亚群的数量的减少和功能的缺陷可引起自身免疫性疾病,具有免疫调节作用.
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来氟米特对胶原性关节炎大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响
目的:探讨来氟米特对胶原性关节炎中免疫抑制性CD4+CD25+调节性T细胞的作用.方法:II型胶原诱导Wistar大鼠,建立胶原性关节炎模型;检测关节炎大鼠多发性关节炎评分,每周2次;流式细胞仪检测脾淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞的比例;RT-PCR检测脾淋巴细胞中Foxp3 mRNA的表达.结果:与模型组比较,来氟米特(2 mg/kg,灌胃给药15 d)明显降低CIA大鼠多发性关节炎评分.与关节炎模型组比较,药物干预组CD4+CD25+调节性T细胞的比例升高,转录因子Foxp3 mRNA的表达增高.结论:来氟米特具有抑制关节炎大鼠关节肿胀的作用,该作用可能和促进CD4+CD25+Treg产生和增加Foxp3的表达有关.
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聚丙烯酰胺水凝胶注射隆乳术后乳腺组织免疫应答及细胞增殖的变化
目的:探讨长期聚丙烯酰胺水凝胶(PAAHG)注射隆乳患者术后乳腺组织免疫应答及细胞增殖的变化.方法:应用免疫组化法检测10例正常乳腺组织,12例无硬结及20例有硬结的注射式隆乳术后患者乳腺组织中CD68、CD25和PCNA的表达情况,结合常规H-E染色切片进行分析.结果:应用亲水性PAAHG注射隆乳术后3～8年,凝胶周围乳腺组织有不同程度的纤维组织增生,并出现炎性细胞及异物巨细胞浸润.CD68、PCNA和CD25阳性细胞极少见于正常乳腺组织中,应用亲水性PAAHG注射隆乳术后,凝胶周围乳腺组织中CD68、PCNA阳性细胞的数目增多,其中有乳房硬结的乳腺组织中CD68、PCNA阳性细胞增多更加明显,3组比较差异具有明显统计学意义(P＜0.01);而CD25阳性细胞数3组比较无统计学差异.结论:亲水性PAAHG长期植入人体后局部可引起一定程度的免疫应答反应及促进细胞增殖.
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T淋巴细胞亚群异常与特发性血小板减少性紫癜的关系
目的通过检测T淋巴细胞亚群及其凋亡,初步探讨T淋巴细胞亚群异常在特发性减少性紫癜(ITP)发病机制中的作用.方法采用流式细胞术对ITP患者及正常对照组的外周血淋巴细胞亚群进行检测;DNA琼脂糖凝胶电泳检测T淋巴细胞的凋亡.结果 ITP患者CD+3、CD+4和CD+4CD+25T细胞比例均显著低于正常对照组(P<0.05或P<0.01),而CD+8T细胞和CD+4T细胞表面Fas 表达均较正常组增加(P<0.01);T淋巴细胞凋亡敏感性增加.结论 ITP患者外周血T淋巴细胞亚群异常,T细胞免疫调控亚群(CD+4CD+25)凋亡增多,对自身反应性T细胞亚群免疫下调作用降低,破坏自身免疫耐受,在ITP的发病中起重要作用.
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自体灭活T细胞免疫后诱导Treg下调的机制
目的 探讨自体灭活T细胞免疫注射后诱导体内调节性T细胞(Treg)下调的机制.方法 自体T细胞体外用刀豆蛋白(ConA)刺激活化,照射灭活T细胞给小鼠进行皮下和腹腔免疫(每只小鼠5×10~6/次),每隔5 d免疫一次,免疫3次后检测小鼠体内Treg的数量及功能;对照组小鼠皮下注射PBS.ELISA法检测血清中抗鼠CD25抗体.免疫小鼠血清分离后经尾静脉注入未免疫小鼠体内,检测受体小鼠Treg的数量及功能变化.结果 免疫小鼠体内CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量较对照组减少(P<0.01),抑制功能也显著降低(P<0.01),但血清中抗CD25的抗体增加(P<0.01).正常小鼠接受免疫小鼠血清后,Treg的数量和抑制功能下调(P<0.01).结论 采用ConA 活化的自体灭活T细胞免疫,可诱导抗CD25抗体增加,进而减少体内CD4~+CD25~+Foxp3~+ Treg 细胞数量和功能.
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肺炎支原体感染和支气管哮喘患儿CD40L和CD25的表达研究
目的探讨肺炎支原体(MP)感染和支气管哮喘发作的关系以及CD40L和CD25的作用.方法分别对26例MP感染组、24例MP感染并支气管哮喘组、23例支气管哮喘组及25例正常健康儿童组,用PMA和离子霉素刺激外周血单个核细胞,采用流式细胞仪检测CD4+T细胞上CD40L和CD25的表达.结果支气管哮喘组和MP感染组CD4+T细胞上CD25的表达均有增高.MP感染并支气管哮喘组CD25在CD4+T细胞上的表达高于MP感染非支气管哮喘组(P＜0.05).未经抗PMA和离子霉素刺激时,MP感染组患儿和支气管哮喘组患儿CD4+T细胞中CD40L的表达比正常对照组显著增高(P＜0.0001).经PMA和离子霉素刺激3h后,MP感染并支气管哮喘组CD40L的表达高,与支气管哮喘非MP感染组有显著差异(P＜0.0001).结论MP感染后CD40L和CD25的表达显著增高,可能是诱导支气管哮喘发作或病情加重的机制之一.
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小鼠胸腺细胞发育过程中CD4+CD25+T细胞变化的体内外比较
目的 比较研究小鼠体内外胸腺细胞CD4+CD25+双阳性T细胞发育的动态变化,为天然调节性T细胞的研究提供基础数据.方法 采用14.5天龄胚鼠胸腺进行体外培养,以FACS检测不同时间点胸腺细胞的表型变化,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化.结果 胸腺在体内发育的第14.5、15、16、17、18、19天CD4+CD25+双阳性T细胞的比例、细胞的数量与在体外胸腺培养的第1～6天在胸腺细胞中的比例、细胞数发育趋势相似;CD4+CD25+双阳性T细胞占CD4+T细胞的比例分别为8.19%、16.41%、24.06%、13.62%、8.10%、2.35%,占CD25+细胞的比例分别为0.34%、1.08%、2.40%、10.59%、32.51%、34.04%.与体内结果相似,胸腺细胞体外培养的结果显示:在培养的第1～6天,CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例分别为58.29%、12.14%、6.08%、17.78%、9.06%、4.04%,占CD25+T细胞的比例分别为3.75%、10.81%、17.20%、51.93%、61.64%、80.06%.结论 体外培养的CD4+CD25+双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,在体外培养第4天(约等于18.5天胚鼠)和体内发育的第17天该群细胞比例大,这将为天然调节性T细胞的发生、发育学研究提供有效的参考.
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HLA-DR4、CD25和CD28在类风湿性关节炎致病中的作用
目的探讨HLA-DR4、CD25和CD28在类风湿性关节炎(RA)致病和诊疗中的作用.方法采用PCR- SSP法、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法(APAAP法)和免疫散射比浊法分别对78例RA患者和60例正常对照组的HLA-DR4基因、CD25+细胞、CD28+细胞、CRP和免疫球蛋白等进行检测.结果 RA患者HLA-DR4的阳性率显著高于正常对照组(P＜0.05);78.6%的HLA-DR4阳性RA患者CRP＞5 mg/L,HLA-DR4阳性的活动性RA患者(38.12±31.39)mg/L显著高于HLA-DR4阴性RA患者(16.86±11.10)mg/L;HLA-DR4阳性者以IgG和IgA增高为主,HLA-DR4阴性患者以IgM增高为主;活动性RA患者CD25表达上升而CD28表达下降.结论 HLA-DR4基因、CD25和CD28可能都与RA的发生发展有关.
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褪黑素对成人外周血CD4+T细胞活化的影响
目的 探讨褪黑素(melatonin,MLT)对成人外周血CD4+T细胞活化的影响.方法 采集健康成年人外周血10 mL(n=27),分离、获取单个核细胞,每份标本分成2组:空白对照组,MLT组.每组均加入对氯苯丙氨酸(parachlorophenylalanine,PCPA),以抑制淋巴细胞MLT的内源性合成,并在植物凝集素(PHA)刺激下培养.于20 h后取部分培养细胞用流式细胞仪测定CD4+CD69+细胞百分比和平均荧光强度;72h取剩余部分细胞用流式细胞仪测定CD4+CD25+和CD4+ HLA-DR+细胞百分比和平均荧光强度.经方差分析检验统计分析数据,观察MLT对CD4+T细胞活化的影响.结果 在PCPA抑制淋巴细胞内源性MLT合成和PHA的刺激下,外源性MLT能有效增强CD4+T细胞的活化,使得CD25、CD69、HLA-DR的CD4+T细胞表达的百分比显著增加(P＜0.05);但间接用于表示单个细胞表面分子数量的平均荧光强度并不明显增加(P＞0.05).结论 MLT能有效地增强PHA对成人CD4+T细胞的活化作用,但并不能增加单个CD4+T细胞表面CD25、CD69、HLA-DR分子表达的量.
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白癜风患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+和CD4~+CD25~+HLA-DR~+T细胞的测定
为了进一步研究调节性T细胞(Treg)在白癜风发病中的作用,我们对不同病期白癜风患者外周血CD4~+ T细胞中同时表达CD25和在Treg的发生与功能中处中心地位的义头转录因子p3(Foxp3)~([1-2])以及Treg的相天表型分子(HLA-DR)的百分比进行检测.
