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幼年脊柱关节病患者血液及关节液中单核因子mRNA表达水平的测定
单核因子是由活化的单核/巨噬细胞分泌的,介导和调节免疫、炎症反应的小分子多大肽.近年来对单核因子在风湿性疾病发病机制中作用的研究多集中在类风湿性关节炎、成人脊柱关节病等,对其在细年脊柱关节病(JSpAs)中作用的研究在国内外罕见报道.
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HLA-G 与慢性炎症性疾病的研究进展
非经典人类白细胞抗原G( human leukocyte an-tigen-G, HLA-G)是机体内重要的免疫耐受分子,经选择性剪切可产生4种膜结合型 HLA-G 蛋白( mHLA-G,HLA-G1~G4)和3种可溶型HLA-G蛋白( sHLA-G, HLA-G5~G7)。相对于 HLAⅠ类分子,HLA-G具有有限的基因多态性,且存在多个位点和sHLA-G表达水平显著相关,其中研究多的是14 bp插入/缺失等位基因多态性(14 bp+/-多态性)。当HLA-G基因为14 bp插入纯合子时,外显子8起始区的一个92 bp片段将被剪切,从而有助于HLA-G mRNA转录水平更稳定。但HLA-G转录水平与蛋白表达存在不均一性,中国汉族人种基因型为14 bp+/+人群外周血 sHLA-G 较14 bp+/-、14 bp-/-人群外周血sHLA-G分泌水平显著降低,进一步提示HLA-G 14 bp+/-多态性在sHLA-G分泌过程中发挥了至关重要的作用[1]。
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含三联密码AAA的Kozak类似序列特异性增强口蹄疫DNA疫苗的免疫效果
目的 引入6种不同的Kozak类似序列制备口蹄疫DNA疫苗,比较分析Kozak类似序列中不同碱基组成对口蹄疫DNA疫苗表达水平及免疫效果的影响作用.方法 在口蹄疫DNA疫苗抗原编码基因VP1起始位点引入Kozak通用序列及所设计的5种Kozak类似序列(KZ1-KZ6),插入真核表达载体pVAX1,制备口蹄疫DNA疫苗,对6~8周龄BALB/c小鼠进行免疫,用间接ELJSA分析实验动物外周血VP1的抗体滴度;同时插入带有绿色荧光蛋白的融合表达载体pEGFP-N1构建6种体外表达质粒,转染HeLa细胞,进行瞬时表达并分析体外表达水平.结果 引入含三联密码AAA的Kozak类似序列KZ6的疫苗质粒pKV6接种动物后产生的免疫抗体滴度高于其他组;相应的体外表达质粒pKG6转染HeLa细胞后体外表达水平亦高于其他组.结论 含三联密码AAA的Kozak类似序列KZ6的口蹄疫DNA疫苗,能特异性地增强口蹄疫DNA疫苗的表达水平及免疫效果.
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RT-PCR酶联杂交法定量测定人PBMC中的IL-1βmRNA
IL-1β是由淋巴细胞和非淋巴细胞分泌的一种细胞因子,除参与免疫调控、神经内分泌及抗肿瘤等多种生理过程外,并与发热、炎症以及某些疾病的病理变化有关,因而在临床及科研中,很多情况下需要了解IL-1β mRNA的表达水平[1].目前,主要采用点杂交、RT-PCR标准曲线法及实时荧光PCR等对IL-1β mRNA进行定量.这些方法,仍存在着某些不足,本研究利用特制的DNA结合板,设计了一种酶联夹心杂交方法,能简便、准确地对RT-PCR扩增后的人外周血单个核细胞(PBMC)中的IL-1β mRNA进行定量.
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川崎病患者淋巴细胞P53基因的检测及临床意义
为探讨急性期川崎病(KD)患者外周血淋巴细胞凋亡延迟的机理,我们采用斑点杂交(Dot-blot)和流式细胞仪(FCM)分别检测KD患者淋巴细胞P53基因mRNA及蛋白质表达水平.
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哮喘儿童不同病期IL-12表达水平的检测
已经证实,哮喘气道高反应性及慢性炎症改变与淋巴细胞和细胞因子组成的免疫网络调控异常有关.在成人哮喘中,经肺泡灌洗技术及纤维支气管镜对气道粘膜活检发现激素敏感型、激素耐药型及哮喘急性期、缓解期IL-12的变化.肺泡灌洗及纤维支气管镜作气道粘膜活检,是判断气道炎症程度可靠的方法,但在儿科临床依从性差.
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结核病患者外周血T细胞亚群、mIL-2R与sIL-2R的测定
采用生物素-链霉亲和素(BSA)系统检测85例结核病患者T细胞亚群及经PHA诱导前后其mIL-2R表达水平,用ELISA法测定其血清sIL-2R水平,同时选取健康献血员25名为正常对照,操作按说明书进行.资料分析采用t检验.
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炎症介质表达水平对肾综合征出血热转归关系的研究
肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是由汉坦病毒感染引起的自然疫源性疾病.在病程极期血浆中常有一些致炎性细胞因子水平明显升高的现象[1],笔者观察了肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的变化,以期了解它们在HFRS发病中的作用和对预后的影响,现将结果报道如下.
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急性发作期支气管哮喘患者痰细胞因子水平与肺通气功能的相关研究
在一些过敏性疾病中表现出IL-12和IL-13表达失衡[1].支气管哮喘急性发作期气道局部IL-12和IL-13水平如何?以及它们的表达水平与肺通气功能有何关联?相关的研究尚少见报道.鉴于此,本研究旨在探讨支气管哮喘急性发作期痰中细胞因子IL-12、IL-13的变化与肺通气功能的关系,以便为研究哮喘提供更多的实验依据.
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硫化氢在急性胰腺炎患者血浆中的表达
H2S是续NO和CO之后的第三气体信号分子,在心血管疾病[1]、肠缺血-再灌注损伤大鼠肠黏膜屏障、肝脏功能障碍起保护作用[2-3],具有抗炎效应[1-4].然而硫化氢在炎症中的作用至今尚有争议.H2S在急性胰腺炎患者血浆表达水平及其意义,国内外文献鲜见报道.本课题对其加以探讨,现阐述如下.
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哮喘豚鼠肺组织T-bet基因表达及糖皮质激素的调节作用
支气管哮喘是由嗜酸细胞(EOS)、肥大细胞和T细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症,其发病机制颇为复杂.近来研究表明,哮喘发病机制与TH1/TH2比例失衡有关[1],而T-bet(T-box expressed in T cell)基因作为一种新发现的转录因子,可特异调控THO细胞分化,具有TH1/TH2转换开关的作用[2],在哮喘发病机制中可能也发挥重要作用.为探讨T-bet基因与哮喘发病机制之间的关系,2002年6月至2003年1月,本研究在建立哮喘豚鼠模型的基础上,应用RT-PCR技术检测了哮喘豚鼠肺组织中T-bet基因m-RNA的表达水平,并观察了糖皮质激素对T-bet基因表达的调节作用,现结果报告如下.
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创伤性脑损伤影响骨折愈合速度机制的研究进展
骨折修复的过程是正常胚胎骨发生过程的重演,是一系列的细胞和细胞外基质的变化过程,从细胞、血管和骨基质的损伤开始,然后到进行骨的完全重建.骨折愈合是一个复杂的过程,受到机体大环境以及局部小环境的多层面、多途径调节,而且在这个过程中有许多生长因子的参与,是骨折愈合的基础,无论何种促进骨折愈合的方式都以促进生长因子的变化为基础.创伤性脑损伤时通过何种机制影响生长因子表达水平的改变从而影响骨折愈合速度值得深入研究.
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CagA(+)幽门螺杆菌感染与心血管疾病
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)不仅与多种胃部疾病有着密切的关系,在其它疾病中也发挥重要的作用.其中细胞毒素相关基因(cytotoxin associated gene,CagA)阳性的HP对心血管疾病的影响是目前研究的热点之一.CagA是HP重要的毒力标志物,其表达水平与心血管疾病的发生、发展及疾病严重程度密切相关.CagA(+)HP感染是心血管疾病的独立危险因素之一[1].本文就CagA(+)HP的检测技术及与心血管疾病的关系研究进展做一简要综述.
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表皮生长因子受体在人胃癌组织中的表达及其与预后的相关性研究
目的:探讨EGFR在人胃癌中的表达及其与预后的相关性。方法选择2008年7月至2011年5月河南大学第一附属医院收治的有随访结果且资料完整的98例胃癌患者,采用免疫组化法对EGFR蛋白在胃癌组织与胃正常组织中的表达情况进行检测分析。分析EGFR蛋白在胃癌中各级表达情况、EGFR蛋白与临床病理学特征之间的关系、EGFR蛋白与患者预后之间的相关性。结果(1)EGFR蛋白各级分布情况如下:0级为56.12%(55/98),1级为23.47%(23/98),2级为11.22%(11/98),3级为9.18%(9/98);(2)EGFR表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤发生部位、分化程度方面无相关性(P>0.05),但是与肿瘤浸润深度、是否有淋巴结转移、是否发生远处转移、TNM分期方面存在显著相关性(P<0.05);(3)EGFR与患者预后呈显著相关性(P=0.019,r=0.66),EGFR阳性患者平均生存时间为22.76个月,阴性患者平均生存时间为39.39个月,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EGFR蛋白在人胃癌各级组织中均有表达,且与患者预后存在显著的相关性,可作为临床判断胃癌的一个重要指标。
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丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏 IRS-1的调节作用
目的::观察彩色蚕茧水提物-丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素受体底物-1( IRS-1)的调节作用。方法:48只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗高剂量组和丝胶治疗低剂量组,每组12只大鼠。采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法制作2型糖尿病大鼠模型,以空腹血糖≥11.1mmol/L作为成模标准。待模型成功建立后,丝胶治疗高(2.4g/kg/d)、低(1.8g/kg/d)剂量组大鼠分别给予不同剂量丝胶灌胃35天,正常对照组、模型组大鼠给予同等剂量生理盐水灌胃35天。釆用葡萄糖氧化酶法检测各组大鼠的血糖,采用Real Time PCR法检测各组大鼠肝脏IRS-1 mRNA的表达。结果:模型组大鼠的血糖为(29.45±4.82)mmol/L,明显高于正常对照组大鼠的血糖(10.83±2.03) mmol/L(P<0.05);丝胶治疗高、低剂量组大鼠的血糖分别为(13.20±4.09)mmol/L、(13.18±2.30)mmol/L,均明显低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠肝脏IRS-1 mRNA的表达水平为(0.0099±0.0040)拷贝数/μl,明显低于正常对照组大鼠(0.0251±0.0041)拷贝数/μl(P<0.05);丝胶治疗高、低剂量组大鼠肝脏的IRS-1 mRNA的表达水平分别为(0.0108±0.0039)拷贝数/μl、(0.0131±0.0036)拷贝数/微升,均明显高于模型组( P<0.05)。结论:IRS-1是胰岛素PI3 K/Akt信号通路的关键因子,本研究提示丝胶可能通过提高PI3 K/Akt信号通路IRS-1的表达发挥降低血糖的作用。
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丹参酮ⅡA可激活 Nrf2/ARE通路对帕金森病 MPTP模型小鼠多巴胺能神经元起保护作用
目的::研究Nrf2/ARE通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)所致帕金森病(PD)动物模型发病机制中可能的作用,探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性坏死的可能机制,以及丹参酮ⅡA对Nrf2/ARE通路的影响和对多巴胺能神经元的保护作用。方法:将60只C57 BL/6 N小鼠随机分为对照组、PD模型组和丹参酮ⅡA组,每组20只。 PD模型组和丹参酮ⅡA组小鼠采用MPTP制备PD小鼠模型,丹参酮ⅡA组制备PD模型后腹腔注射丹参酮ⅡA。观察各组小鼠行为学表现,采用免疫组织化学、免疫蛋白印迹和免疫荧光双标法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、核转录因子(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数和蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PD模型组小鼠出现典型的PD样症状。在MPTP后一次注射后48小时,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显下降,Nrf2、NQO1和GFAP阳性细胞数量和蛋白表达水平明显增加( P<0.01),在MPTP后一次注射后7天,黑质区TH 阳性神经元数量和蛋白表达水平较对照组减少约45%和50%( P<0.01)。与PD模型组比较,丹参酮ⅡA组小鼠PD样症状减轻,在MPTP后一次注射后48小时,中脑黑质区Nrf2、NQO1和GFAP阳性细胞数量和蛋白表达水平进一步升高( P<0.01),在MPTP后一次注射后7天,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显升高( P<0.01)。结论:Nrf2/ARE通路在急性PD模型DA能神经元内可能被激活,其可能通过上调NQO1的表达对黑质DA能神经元起到保护作用,丹参酮ⅡA可能通过激活Nrf2/ARE通路对小鼠多巴胺能神经元起到一定保护作用。
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肺部铜绿假单胞菌(PAE)感染患者前后肺角质细胞生长因子(KGF)的变化
目的::探讨患者在肺部铜绿假单胞菌( PAE)感染前后肺角质细胞生长因子( KGF)的变化情况。方法:选取肺炎患者62例为观察对象,对其PAE感染前后肺组织进行检测,观察其KGF水平变化情况。结果:对本组患者进行免疫印迹定量测试后,结果表明,所有患者在PAE感染后,肺组织KGF蛋白表达水平同感染前对比,明显较高,差异存在统计学意义(P<0.05),且随时间推移,患者KGF表达水平呈较明显上升趋势,在72 h后,KGF值达到高水平。本组患者中PAE感染前,肺组织KGF蛋白含量较为稳定,PAE感染后各时间段,患者肺组织KGF含量均明显高于感染前,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论:在PAE感染后,患者肺组织KGF水平会出现明显变化,随病程发展而增长。对KGF水平进行严密监测,同时采取辅助干预措施,能有效改善症状,促进患者痊愈。
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大鼠初级感觉神经元内 Nogo-A在炎症痛的痛觉敏化过程中对于 TRPV1通道功能的调控研究
目的:众所周知背根神经节DRG中辣椒素受体TRPV1在炎症痛中的表达快速而显著地升高,并介导了炎症痛的痛觉敏化过程。然而对于此过程中的TRPV1受体功能是如何调控的知之甚少。方法:采用免疫组织化学染色和Western Blot的实验方法证实,正常大鼠的DRG神经元中高浓度表达有Nogo-A蛋白。该蛋白在CFA诱导的大鼠炎症痛模型中与TRPV1受体同时期显著增加。结果:行为学的实验表明,大鼠蛛网膜下腔注射Nogo-A的拮抗剂NEP1-40,可以明显缓解大鼠CFA同侧的缩足潜伏期,缓解痛觉敏化。Western blot 的实验结果显示大鼠蛛网膜下腔注射NEP1-40可以显著下调TRPV1的表达水平。另外,对于急性分离培养的DRG神经元进行钙成像的实验研究发现,给予NEP1-40处理后减弱Nogo-A的作用可以造成DRG神经元对于辣椒素的反应性显著性下降。结论:Nogo-A蛋白的作用对于TRPV1在痛觉敏化过程中的作用是不可或缺的。 Nogo-A蛋白在炎症痛的过程中,通过调控TRPV1的蛋白上调过程以及其通道功能参与了痛觉敏化的过程,其具体机制尚需要进一步研究。
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二氮嗪预处理对 H2 O2损伤 L6骨骼肌成肌细胞的作用及机制研究
目的::研究二氮嗪( diazoxide, DZ)预处理对H2 O2损伤L6骨骼肌成肌细胞( skeletal myoblast, SKM)的保护作用,并探讨其与磷脂酰肌醇3激酶( phosphatidylinositol-3 kinase, PI3K)/Akt信号通路的关系。方法:体外培养的L6 SkMs随机分为4组:对照组、H2O2损伤组(H2O2 group;0.40mmo1/L H2O2作用24 h),DZ预处理组(DZ group;200μmol/L DZ预处理30 min后,0.40mmo1/L H2O2作用24 h),LY294002抑制剂组(LY group;200μmol/L DZ和50μmol/L LY294002共同孵育30 min后,0.40mmo1/L H2O2作用24 h)。采用MTT比色法检测各组细胞存活率;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western blot-ting法检测各组细胞P-Akt、Caspase-3、Caspase-9的表达水平。结果:与对照组相比,H2 O2损伤可诱导细胞凋亡,显著降低细胞存活率,降低P-Akt蛋白表达而增加Caspase-3,9蛋白表达。与H2 O2组比较,DZ组的细胞存活率显著上升,凋亡率显著下降, P-Akt蛋白表达明显增加而Caspase-3,9表达明显降低。而PI3 K抑制剂LY294002能够显著抑制DZ预处理对细胞的保护和抗凋亡作用,同时使P-Akt蛋白表达显著降低, Caspase-3,9蛋白表达显著增加。结论:DZ预处理可激活PI3 K/Akt信号通路,下调凋亡蛋白caspase-3,9,从而抑制H2 O2引起的L6 SKMs的凋亡。
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Podocan在牛骨骼肌卫星细胞中的作用及调控
目的::细胞外基质( ECM)在细胞发育,组织修复,调控细胞增殖、分化、粘附和迁移方面具有十分重要的作用。小的富含亮氨酸的重复蛋白( SLRP )家族属于细胞外基质中的一类重要的非胶原蛋白。Podocan,是一个大约由600个氨基酸组成的分泌蛋白,属于SLRP家族中的第五亚类蛋白。 Podocan在肾脏、心脏、肝脏、胰腺和血管的平滑肌细胞中均有表达,其对平滑肌细胞的迁移和增殖具有负调控作用,可以调节内膜的增生。本实验室在前期研究工作中通过对牛骨胳肌卫星细胞增殖分化过程的高通量测序结果表明, Podocan在牛骨胳肌卫星细胞中具有一定的表达,随着卫星细胞的分化,其表达量呈显著增加,推测其能够参与牛骨胳肌卫星细胞的分化,与牛肌肉的发育和成熟具有密切关系。方法:本研究以体外培养的牛骨胳肌卫星细胞为实验材料,以2%马血清分别诱导细胞分化2 d、3 d、4 d和5 d。收集细胞,采用荧光定量RT-PCR和Western Blot的方法分别检测不同分化程度的牛骨胳肌卫星细胞中Podocan mRNA和蛋白的表达水平。通过免疫荧光染色的方法检测Podocan在细胞中的表达定位。此外,本研究构建Podocan的过表达载体以及shRNA干扰和CRISPR干扰载体,以脂质体2000的方法转染骨骼肌卫星细胞,分别实现Podocan的过表达和抑制,以荧光定量RT-PCR和Western Blot的方法检测Podocan的过表达和抑制效果,同时检测骨骼肌卫星细胞分化的标志基因MyoG ( Myogenin )和MyHC ( Myosin Heavy Chian )的mRNA和蛋白表达水平变化。结果:随着牛骨骼肌卫星细胞分化的进行,Podocan的mRNA和蛋白表达量显著增加,免疫荧光定位结果显示其主要分布在成熟的在肌管的细胞中,而未分化的细胞其表达量较低。 Podocan的过表达和抑制载体能够显著增加或抑制其在牛骨骼肌卫星细胞中的表达量,且MyoG和MyHC mRNA和蛋白表达水平的检测结果显示,Podocan的表达增加和抑制能够促进或减少骨骼肌卫星细胞分化的程度。结论:Podocan在牛骨骼肌卫星细胞的分化过程中具有重要的调控作用,其促进肌肉分化的分子机制深入探索能够为肌肉生长发育机理的研究及提高肌肉产量的肉牛生产提供帮助。