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结核分枝杆菌katG、inhA、ahpC等突变与异烟肼耐药关系的研究
目的：了解结核分枝杆菌katG、inhA、ahpC、fabG1、sodA及sodC基因突变的特征及其与耐异烟肼的关系。方法对127例活动性肺结核患者痰标本进行菌型鉴定及结核分枝杆菌药敏试验，提取结核分枝杆菌菌株DNA，应用PCR扩增katG、inhA及ahpC、fabG1、sodA及sodC基因片段，并进行DNA序列分析。结果结核分枝杆菌药物敏感试验显示127株结核分枝杆菌中，其中47株耐异烟肼，80株对异烟肼敏感，耐异烟肼率为37.01%。47株耐异烟肼中，29株存在katG和（或）inhA基因突变，其中22株（46.81%，22/47）存在katG基因单位点突变，3株（6.38%，3/47）存在inhA基因单位点突变，4株（8.51%，4/47）存在katG及inhA基因联合位点突变。22株katG基因单位点突变中，20株为AGC315ACC、AGC315AAC （42.55%，20/47）突变，2株（2.13%，1/47）分别为CTG378CCG（Leu378Pro）、ACG394ATG（Thr394Met）突变，该突变位点及突变形式尚未见文献报道。18株katG及inhA未突变结核分枝杆菌均未检测到ahpC、fabG1、sodA及sodC基因突变。结论结核分枝杆菌对异烟肼耐药主要与katG和inhA基因突变有关。耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株378和394新突变位点的发现为进一步研究耐药机制以及耐药结核病的快速检测提供了依据。
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糖尿病对异烟肼和利福平血药峰浓度影响的研究
目的 研究糖尿病对体内异烟肼和利福平血药峰浓度的影响,从而分析糖尿病患者抗结核治疗是否需要调整异烟肼和利福平的剂量.方法 随机选取糖尿病合并肺结核的患者为观察组,单纯肺结核(除外肝肾疾病)为对照组,服用抗结核药物7 d后,用高效液相色谱法(HPLC)测定患者抗结核药物(异烟肼、利福平)的血药峰浓度,两组间进行对比,采用SPSS 13.0进行统计分析.结果 两组间年龄、性别、体重无统计学差异,有无糖尿病对异烟肼、利福平在体内的血药峰浓度无影响.结论 有无糖尿病对异烟肼、利福平在体内代谢没有影响.提示糖尿病患者在应用异烟肼和利福平药物抗结核治疗过程中无需调整用药剂量.
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维生素B6联合血液灌流抢救异烟肼中毒一例
患者男,26岁,2007年9月11日自服异烟肼100片(10 g)并饮啤酒2L后,家人发现其有精神失常、幻觉,之后出现间断抽搐,牙关紧闭,舌咬破,伴意识丧失,每次抽搐数分钟,间隔10余分钟,期间家人给予洗米水300ml,呕吐3次,急送我院.患者既往体健,否认结核病史及药敏史.入院查体:体温38.5℃,血压160/70 mm Hg,心率155次/min,神志昏迷,压眶无反射,全身抽搐,双侧瞳孔正常,口腔内可见血性分泌物,舌体右侧见1.2 cm×1 cm大小创面,四肢肌张力高,双侧腱反射亢进,巴宾斯基征阴性.入院后X线胸片:右上肺小片模糊影.心电图窦性心动过速.肝功能、电解质正常,BUN2.7 mmol/L,CR 112 μmol/L,胃液OB(+).血气分析:pH 6.889,PCO2 44.4mm Hg,PO2 82.5 mm Hg,SO2 84.1％,HCO38.3 mmol/L.凝血功能:PT 12.9 s,INR 1.07,FIB 139.2 g/L,APTT 29.1 s.血常规:WBC 22.4×109/L,HGB 15.2 g/L,PLT338×109 g/L.腹部超声:肝胆胰脾未见明显异常.
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未定型肺曲霉病一例
患者女，44岁，既往体健，无曲霉暴露史。因反复咳嗽、咳痰20个月于2010年4月13日入院。自2008年8月起经常咳嗽，咳少许黄脓痰，活动后咳嗽加重，无发热、盗汗、消瘦、胸闷、喘息等症状，外院考虑“咳嗽变异性哮喘”，给予平喘、抗细菌感染治疗，症状无明显缓解。2009年5月，患者咳嗽加重，胸部CT显示右肺上叶高密度影（图1），考虑结核可能，予抗结核治疗（异烟肼0.3 g／d、利福平0.45 g／d和乙胺丁醇0.75 g／d）约3个月，患者自觉咳嗽有所好转，改用异烟肼和利福平抗结核治疗。2009年11月复查胸部CT病灶无明显变化，继续原方案抗结核治疗，并于2010年1月改为间隔一日服药。2010年4月13日来我院复查胸部CT示右上肺病灶有所增大（图2）。体格检查：体温36.8℃，脉搏90次／min，血压127／68 mm Hg，呼吸18次／min。心肺无异常体征。实验室检查：血白细胞8.4×109／L，中性粒细胞67％，嗜酸粒细胞6％，血G试验4 pg／ml、GM试验0.3、肿瘤标志物均阴性。 T 淋巴细胞（ CD3＋）36％， T 抑制杀伤细胞（CD8＋）8％，T辅助诱导细胞（CD4＋）27％，T辅助／T抑制3.38， IgE 90.4 IU／ml。
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结核病所致精神障碍一例
患者男,21 岁,汉族,四川籍外来务工人员,第二次住院.主诉:兴奋、夸大、易激惹等急性起病4 d,总病程8 个月,肺结核病1 年余.现病史:患者2009 年4 月起出现反复咳嗽、咳痰,2009 年6 月25 日经上海市肺科医院确诊为"肺结核",并接受异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇等抗结核药物治疗,2009 年8 月25 日起改为异烟肼和利福平进行巩固期抗结核治疗.
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肺黏膜相关性淋巴瘤一例
患者男，50岁，入院前3年余出现咳嗽、咳痰、腹胀，活动后气促，稍感乏力，偶有低热、盗汗，无咯血。当时在外院抗感染无效，在行剖腹探查术，病理诊断“腹膜结核”，诊断为“腹膜结核、继发性肺结核左上肺涂（-）初治”，予“异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇”抗结核及“泼尼松”抑制腹腔黏连处理。治疗2个月后患者症状好转，左上肺阴影稍吸收，后未复查X线胸片，继续予“异烟肼、利福平”抗结核10个月。患者反复咳嗽、咳痰转我院。入院2个月前双侧腹股沟淋巴结肿大，在外院病理活检为“淋巴组织反应性增生”。查体：双颌下及腹股沟触及多粒蚕豆大小的淋巴结，双肺呼吸音减低，闻及广泛湿性啰音。血常规：Hb 87 g/L；血气分析示Ⅰ型呼吸衰竭。痰涂片找抗酸杆菌阴性。超声：腹部多发低回声结节，大达41 mm×30 mm，腹腔少量积液，肝脾未见肿大。胸部CT见图1。纤维支气管镜检查：双侧各叶段支气管管腔未见明显异常。经纤维支气管镜肺活检，病理诊断：肺黏膜相关淋巴瘤（图2，3）。
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儿童淋巴结结核的诊断与治疗
结核病是全世界面临的健康挑战之一，是人类单一病原体感染性疾病致死的重要原因。世界卫生组织报道2011年全球约有870万新发结核感染病例，其中13%合并HIV感染，140万例死于结核病；儿童患者约有50万例，6.4万例死于结核病[1]。淋巴结结核是常见的肺外结核，占所有结核病的4.0%～5.1%，占肺外结核的20.3%～50.0%，传染途径多为淋巴血行播散，可累及多组淋巴结，多见于颈、腋下、腹股沟及颌下淋巴结。淋巴结结核通常表现为多个淋巴结肿大、而无结核病全身的症状及体征，因此其诊断有赖于对该病的高度的临床警觉性及实验室、病理学检查[2]。目前多通过采集病史、体格检查、结核菌素试验、影像学检查、细针穿刺检查、组织学检查等作出诊断。WHO（2009年）提出的儿童淋巴结结核推荐治疗方案同肺结核治疗方案，即2HRZE/4HR[3]：2个月的异烟肼（H）＋利福平（R）＋吡嗪酰胺（Z）＋乙胺丁醇（E）强化治疗，随后4个月的异烟肼（H）、利福平（R）巩固治疗。
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焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的Meta分析
目的 采用Meta分析方法综合定量评价国内外焦磷酸测序技术快速诊断异烟肼耐药的诊断价值.方法 检索PubMed、Web of Science、Elsevier、中国知识资源总库(CNKI)、万方和维普,制定文献纳入排除标准,对纳入文献进行质量评分,提取纳入研究的特征信息.检验异质性并根据其结果选择相应的效应模型；采用Meta-Disc 1.4和Stata 10.0软件进行综合定量分析；后进行敏感性分析.结果 检索相关文献114篇,后纳入9篇.将焦磷酸测序与常规测序相比,其结果一致率100％.以细菌学药敏为金标准,焦磷酸测序检测katG基因时标本总数945份,加权敏感度、特异度及95％可信区间分别是0.77(0.73,0.80),1.00(0.99,1.00).SROC曲线下面积为98.82％,纳入文献稳定性好.只检测inhA基因时的加权敏感度为0.19(0.15,0.24)、特异度为1.00(0.98,1.00).结论 焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性有很高的特异度,在异烟肼耐药初筛时具有很高的临床价值,是药敏检测的有效辅助手段.(中华检验医学杂志,2013,36:329-332)
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结核分枝杆菌耐利福平和异烟肼相关基因快速检测的应用研究
目的 利用DNA芯片检测技术直接检测痰标本中结核分枝杆菌耐利福平(RFP)、异烟肼(INH)相关的耐药基因(rpoB、katG/inhA),评价DNA芯片检测技术临床应用的可行性.方法 对586份涂阳痰标本使用L-J培养并用终点法确定其耐药性,同时利用DNA芯片检测技术检测痰标觋本中结核分枝杆菌的rpoB、katG/inhA常见基因突变位点的突变情况,比对两种方法的检测结果,对不符合的菌株测定其相应DNA序列,评估上述试验的准确性.结果 (1)586份涂阳痰标本,其中3(+)163份、2(+)204份、1(+)217份,培养阳性584份.耐药结果显示,对INH、RFP敏感的菌株分别为361株和327株,耐药菌株分别为223株和247株,其中低浓度耐药、高浓度敏感菌株分别为93株和59株,低浓度、高浓度均耐药菌株分别为130株和188株.(2)耐药基因特异性片段扩增阳性标本367份(62.8%)、阴性217份(37.2%).对INH耐药相关基因(katG/inhA)突变检出率是28.4%,突发发生位点集中在katG315位密码子(89.8%);对RFP耐药相关基因(rpoB)突变检出率是55.9%(137/247),突变发生位点主要在rpoB 531和rpoB 526位密码子,发生率分别是68.6%和16.1%.(3)对L-J药敏结果与DNA芯片检测结果不符的菌株进行DNA序列分析,发现有漏检现象.结论 DNA芯片技术直接检测样本中结核分枝杆菌的相关耐药基因存在可行性,如直接应用于临床样本检测,关键要解决样本中DNA的提取效率、PCR的扩增效率和试验的质量控制.
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结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因检测芯片的研究
目的 建立用于检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因突变的基因芯片,并与基因测序和常规药物敏感性试验进行比较,探讨其使用价值.方法 根据结核分枝杆菌katG基因突变的规律,设计不同的探针,制备可检测katG基因突变的芯片,并且同时检测药物敏感株和耐药株的katG的变异情况.结果 结核分枝杆菌临床分离株共137株,至少耐1种抗结核药物共97株(70.8%).耐异烟肼的比例为32.8%(45/137).敏感株katG基因扩增阳性率为100%.耐INH菌株katG的阳性率为88.9%(40/45).PCR检测katG阳性率为91.1%(41/45).耐INH菌株katG的缺失率为8.9%.katG315位密码子的突变依次为AAC(32.5%,13/40),ACC(15.0%,6/40),ACA(10.0%,4/40),ATC(5.0%,2/40)和AGC(5.0%,2/40).基因芯片检测、药物敏感性试验和基因测序的结果一致.结论 本研究建立的检测结核菌katG基因突变的基因芯片技术敏感性高,特异性强,可用于结核菌的快速药物敏感性试验评价.
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结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法的建立
目的建立结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变的快速检测方法.方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列,自行设计覆盖rpoB、katG、inhA基因突变区的系列寡核苷酸探针,并检测临床样品中结核分枝杆菌的基因突变情况,以此来判断耐药结果.结果在56个利福平耐药菌株中,有50个菌株都在rpoB基因上检出有突变,利福平耐药突变检出率为89.3%(50/56);有30个利福平敏感菌株rpoB基因上都未检出突变.有58个异烟肼培养的耐药菌株中有47个在katG或inhA基因上检出有突变,异烟肼耐药突变检出率为81.0%(47/58);有30个异烟肼敏感菌株katG或inhA基因上未检出突变.结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性的检测.
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播散性放线菌病合并结核分枝杆菌感染一例
播散性放线菌病临床上不常见,同时合并结核分枝杆菌感染的更为罕见[1-2].现报道1例继发于流产术后年轻女性播散性放线菌病合并结核分枝杆菌感染的病例,经过积极的脓液引流、抗放线菌联合四联(异烟肼+利福平+乙胺丁醇+吡嗪酰胺)抗结核治疗痊愈.
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东莞地区布鲁菌感染2例
例1患者男,18岁.因"头痛,左侧肢体无力10余天,发热3d"于2010年3月29日人中山大学附属东华医院.患者4年前曾在屠羊厂工作,曾因"发热,头痛"于外院诊断"结核性脑膜炎",予四联抗结核(异烟肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇)治疗1年半,症状缓解.患者在本次发病10余天前活动时出现头痛,以胀痛为主,无放射痛,于当地诊所诊治,具体方案不详.随后出现左侧肢体无力,行走不稳,于另一家医院拟"脑梗死"诊治,行腰穿示颅压升高,脑脊髓液异常,考虑到曾有结核感染史,予四联抗结核治疗,肢体活动恢复.患者3d前出现发热,体温波动,高达39℃,头痛加重,来中山大学附属东华医院就诊,收人神经内科.
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利用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药性的研究
本研究利用基因芯片技术,研制一种结核分枝杆菌耐药性筛选检测的基因芯片;该芯片能够快速、准确、高效地针对结核菌对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇4种药物产生的耐药性进行一次性的检测和筛选,在一次反应中进行多种信息的平行分析,同时利用该基因芯片对5株临床分离的结核分枝杆菌的耐药性进行检测分析,现报道如下.
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探针熔解分析法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的应用和评价
目的 评价PMA技术检测MTB对INH耐药突变的价值,调查INH耐药突变发生特征.方法 MTB标准株H37Rv来自国家结核病参比实验室,1株INH敏感株和1株katG S315TACC突变株来自厦门市疾病预防控制中心,7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株来自深圳慢性病防治中心、河南省疾病预防控制中心、中国人民解放军第309医院和厦门市疾病预防控制中心.707份MTB临床分离株来自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心,126份MTB涂阳痰标本来自厦门市同安区疾病预防控制中心.MTB标准株H37Rv、7株MTB INH耐药株和833份临床标本均采用厦门致善结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒热裂解法提取基因组DNA,1株INH敏感株和1株katG S315T ACC突变株采用AxyPrepTM细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA.熔解曲线分析所检标本与野生型对照在katG315位密码子、inhA启动子区(- 17～-8位点)、ahpC启动子区(-44～-30以及-15 ～3位点)及inhA94位密码子的熔解温度(Tm值)差异判断标本是否发生INH耐药突变.3×105拷贝/反应的野生株和katG S315T ACC突变株以10倍梯度稀释至300拷贝/反应,分析PMA技术的灵敏度.用PMA技术检测7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株,评价特异性,并就其中5种耐药突变进行重复性检验.测序验证PMA技术对833份标本INH耐药性的临床检测效能.结果 PMA技术从核酸提取到结果判断可在3小时内完成,在标准96孔实时PCR仪器上可同时检测46份标本.对野生株和katG S315T ACC突变株的灵敏度均为300拷贝/反应,能够同时区分9种INH耐药相关点突变或缺失,5种耐药突变的Tm值标准偏差均在0.5℃之内.检出的162份突变标本与测序验证结果均一致.临床标本验证突变率为19.4％( 162/833),在所检出的14种INH耐药突变katGS315T( AGC →ACC)、inhA启动子区- 15C→T和katG S315N (AGC→AAC)这3种突变占INH耐药突变标本的83.3％(135/162).结论 PMA技术可快速、灵敏、特异检测结核INH耐药突变.
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应用等位基因多重聚合酶链反应检测结核分枝杆菌katG基因315位点突变
目的建立等位基因特异性多重聚合酶链反应 (MAS-PCR)方法, 检测katG基因315位点的突变.方法根据结核分枝杆菌的katG序列, 分别设计出3条特异性寡聚核苷酸引物,采用MAS-PCR技术, 检测katG基因315位点的突变以间接判断对异烟肼的耐药性.同时与常用的RFLP方法进行比较.结果对临床分离异烟肼敏感株(30株)及异烟肼耐药株(54株)分别采用MAS-PCR和PCR-RFLP方法同时进行扩增, 敏感株均未见有突变.MAS-PCR对耐药株的检出率为88.9%(48/54).对于RFLP方法无法检出的S315N类型的突变亦能检出.结论 MAS-PCR方法有较高的敏感性及特异性,快速、经济、操作简便.
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RIFO杂交和限制性片段长度多态性检测耐利福平和异烟肼的结核分枝杆菌
目的 评价利福平寡核苷酸探针杂交技术(RIFO杂交)和PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)在结核分枝杆菌(MTB)耐利福平(RIF)和异烟肼(INH)快速检测中的应用价值.方法 选取121株北京地区MTB菌株,分别采用RIFO杂交技术和PCR-RFLP检测RIF耐药相关基因rpoB核心区和INH耐药相关基因katG315位点突变,并对所有菌株的rpoB基因核心区进行测序验证.结果 RIFO杂交检测发现,91.5%(65/71)的RIF耐药株和92.9%(52/56)的耐多药菌株(至少对RIF和INH耐药)存在rpoB基因核心区突变,而RIF敏感株中未发现突变;RIFO杂交与测序结果完全一致,测序结果中有突变的位点在RIFO杂交中均有相应的野生型杂交信号缺失;PCR-RFLP结果显示,INH耐药株中katG315突变率为60.6%(40/66).结论 rpoB基因核心区可作为RIF耐药检测的分子标志及耐多药的筛选指标;RIFO杂交技术是检测MTB耐RIF的快速、准确的实验方法,具有推广及潜在的临床应用价值;PCR-RFLP可检测出大部分INH耐药株,可作为临床INH耐药性检测的辅助手段.
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双硫仑样反应伴急性心肌损伤一例
双硫仑样反应又称戒酒硫样反应，多发生在使用可引起双硫仑反应的药物7d内使用乙醇及乙醇制品者。引起双硫仑反应的常见药物有头孢菌素类、硝基咪唑类、磺胺类抗生素，华法林、异烟肼、格列齐特等药物也有发生。现报告双硫仑样反应伴急性心肌损伤一例。
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DNA微阵列芯片法检测耐药结核分枝杆菌的价值探讨
目的 评价DNA微阵列芯片法快速检测耐药结核分枝杆菌的效果. 方法 对125份结核分枝杆菌痰涂片阳性标本和40份结核分枝杆菌传统培养阳性菌株样本,采用DNA微阵列芯片法进行异烟肼(isoniazid, INH)、利福平(rifampin, RFP)耐药性快速检测.同时以传统结核杆菌药物敏感试验方法作为金标准,对DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐药性的一致率进行评价分析. 结果 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌对INH耐药的敏感度为87.5%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为98.8%.DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌对RFP耐药的敏感度为83.3%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为99.4%.DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐多药的敏感度为100%,特异度为100%,与传统药物敏感法的一致率为100%. 结论 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌的耐药性与传统药物敏感法有较高的一致率,较为可靠,且检测所需时间短,可以作为临床肺结核耐药性的快速筛查方法.
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异烟肼与吡嗪酰胺联合化疗对肝功能的影响
1临床资料1.1一般资料 1995年-2003年我院收治了因结核病化学治疗导致的药物性肝炎患者81例,其中男64例,女17例;年龄43.64±15.77岁,全部患者抗结核化疗前肝功能检测均正常,无输血史,无HIV感染,除抗结核药外无接触肝毒性物质.HBsAg阳性39例占48%(39/81),HBsAg阴性42例占52%(42/81).2例患者有长期酗酒史.
