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姐妹胚胎体外囊胚形成能力对体外受精-胚胎移植临床结局的预测作用研究
目的 探讨姐妹胚胎(sibling embryo)体外囊胚形成能力对Day 3体外受精胚胎移植(IVF ET)临床结局的预测作用.方法 回顾性分析2012年5月至2013年3月在本中心行Day 3 IVF ET后剩余姐妹胚胎继续培养囊胚患者的临床数据.根据有无囊胚形成分为A、B组,比较两组临床妊娠率、胚胎种植率和流产率.根据囊胚形成率将A组分为3个亚组(Group 1:囊胚形成率＜25％;Group 2:25％≤囊胚形成率＜50％;Group 3:囊胚形成率≥50％),比较3组临床妊娠率、胚胎种植率和流产率的差异.分析Day 3移植胚胎临床妊娠率及种植率与姐妹胚胎体外培养形成囊胚个数的相关性.结果 有囊胚形成组(A组)1 109例,无囊胚形成组(B组)474例.两组平均年龄、不育年限、移植胚胎数均无显著性差异(P＞0.05).A组临床妊娠率(58.3％)和胚胎种植率(38.1％)均显著高于B组(46.4％、30.2％)(P＜0.01),两组流产率(11.9％vs.11.4％)相似(P＞0.05).Group 3胚胎种植率高,流产率低;Group 1胚胎种植率及临床妊娠率低,流产率高,三组间临床结局无统计学差异(P＞0.05).Day 3植入胚胎临床妊娠率与姐妹胚胎体外囊胚形成个数呈显著正相关(r=0.725,P＜0.05),种植率与囊胚形成个数相关性不显著(r=0.489,P＞0.05).结论 姐妹胚胎(sibling embryo)体外囊胚形成能力是预测Day 3 IVF-ET临床结局的有效因子.
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4B级以上D3胚胎囊胚形成影响因素分析
目的 探究4B级以上D3胚胎形成囊胚的能力差异,以及差异相关的影响因素分析. 方法 回顾性分析D3胚胎移植/冷冻后有剩余胚胎继续囊胚培养的949个IVF/ICSI-ET周期的临床资料及继续囊胚培养结局,根据继续囊胚培养的D3胚胎质量分为优质组(≥6B,507周期)和非优质组(4B～5B,442周期),比较两组的囊胚形成率、可利用囊胚形成率、优质囊胚形成率及其他临床和实验室影响因素. 结果 两组间患者基本资料及临床结局无统计学差异(P＞0.05);与优质组相比,非优质组的囊胚形成率(31.44％ vs.64.33％)、可利用囊胚形成率(20.36％ vs.51.76％)、优质囊胚形成率(7.03％VS.25.93％)均显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.001);且优质组D5优质囊胚形成率显著高于非优质组(55.93％VS.26.36％,P＜0.05);优质组D1 0原核(0PN)构成(17.89％ vs.9.73％)、≤10％碎片构成(21.69％ vs.9.73％)、胚胎不对称性(28.28％ vs.14.95％)显著高于非优质组,而非优质组D1 2PN构成(83.87％ vs.77.31％)、＞20％碎片构成(34.59％vs.8.87％)显著高于优质组,差异均有统计学意义(P＜0.001);在优质组中,年龄≤35岁者囊胚形成率、可利用囊胚形成率、优质囊胚形成率均显著高于年龄＞35岁者(P＜0.001),而非优质组未见年龄组间的统计学差异(P＞0.05);与不对称胚胎相比,优质组对称胚胎的囊胚形成率(68.03％ vs.54.95％)、可利用囊胚形成率(55.42％ vs.42.49％)、优质囊胚形成率(28.98％ vs.18.19％)均显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.001). 结论 不同质量的D3胚胎有不同的发育能力,女方年龄、D1 PN构成、D3胚胎碎片率、胚胎不对称性均影响可利用囊胚及优质囊胚的形成,优质胚胎形成囊胚较快(D5),非优质囊胚形成囊胚较晚(D6).
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脑源性神经营养因子在卵母细胞成熟过程中的表达与作用
卵泡发育及卵母细胞成熟是一个非常复杂的过程,是一种多种因子相互作用、相互协调的结果.近年来研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)不仅广泛分布于神经系统,对神经元的分裂和发育发挥重要作用,而且在生殖系统也有表达.并认为BDNF能够通过某种旁分泌或自分泌的方式促进卵母细胞成熟,尤其是胞浆成熟,从而促进移植前胚胎的发育.但其具体作用机制还不甚清楚,有待于进一步研究.
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体外腹腔巨噬细胞对小鼠卵受精率和囊胚形成率的影响
目的 利用昆明小鼠体外受精模型观察巨噬细胞对小鼠卵受精率和囊胚形成率的影响.方法 (1)预冷生理盐水注射小鼠腹腔,诱导巨噬细胞渗出,用贴壁法富集巨噬细胞.(2)取卵后随机把卵分成3组:对照组:小鼠卵单独培养,培养过程中无巨噬细胞共培养;实验组1:取卵后即与巨噬细胞共培养;实验组2:受精50～55 h后与巨噬细胞共培养.观察各组小鼠卵受精率和囊胚形成率.结果 受精率实验组1(72.0%)明显低于对照组(91.0%)和实验组2(93.7%),差异有统计学意义(P＜0.001);受精卵的囊胚形成率实验组2(78.2%)明显高于对照组(60.3%),差异有统计学意义(P＜0.001);总囊胚形成率实验组2(73.2%)显著高于对照组和实验组1(分别为54.8%和50.0%),具有显著的统计学差异(P＜0.001).结论 巨噬细胞降低小鼠卵子的受精率,增加囊胚形成率,在8细胞形成前后添加巨噬细胞共培养,能大程度增加囊胚形成率.
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IVF-ET中未受精卵母细胞行早期(5hrs)补救ICSI授精后胚胎发育潜能
在常规应用卵胞浆内单精子注射(ICSI)之前, 常规体外受精(IVF)受精率低下很常见,大约有 20%～35%的IVF患者会发生受精率很低(<35%的卵子受精) 甚至受精完全失败(所有卵子都不受精).
关键词： IVF 受精失败 补救性卵胞浆内单精子注射 囊胚形成 -
早期分裂三细胞对囊胚形成预测的研究
目的：通过观察体外成熟卵母细胞显微注射受精后胚胎特定时间段是否经历早期分裂的三细胞阶段来对其囊胚形成潜能进行预测。方法未成熟卵子体外成熟后行卵胞浆内单精子注射(ICSI)，授精后33.9~42.9 h内每小时观察1次，记录三细胞胚胎形成数，授精后6d统计囊胚形成率。结果经过三细胞阶段的胚胎囊胚形成率(76.67%)明显高于未出现三细胞阶段(4.17%)，差异有统计学意义(P<0.05)；并且在39.9 h之前出现的三细胞胚胎，其囊胚形成率高。结论通过观察胚胎分裂早期是否经历三细胞阶段可对囊胚形成率有较好的预测，为建立有效的、无创的早期预测胚胎发育潜能的指标奠定理论基础。
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体外受精胚胎细胞数量和碎片率对囊胚形成的影响
目的 探讨体外受精胚胎细胞数量和碎片比例对囊胚形成的影响.方法 选择2016年1～10月柳州市工人医院妇产科200例患者在体外受精后3d得到的胚胎.根据囊胚数将其分为2～3e组(2～3个细胞),4c组(4个细胞),5c组(5个细胞),6c组(6个细胞),7c组(7个细胞),8c组(8个细胞),9c组(9个细胞),10c组(10个细胞),11c组(11个细胞),12c组(12个细胞),≥13e组(≥13个细胞).分析胚胎移植时细胞数及碎片等级(碎片等级为1级,碎片率≤5％;2级:碎片率＞5％～20％;3级:碎片率＞20％～30％;4级:碎片率＞30％)对囊胚质量的影响.结果 碎片等级1～2级的囊胚与3～4级的囊胚中,均为8 c组有效囊胚形成率与优质囊胚形成率高(X2=200.760、119.162、243.532、136.395,均P＜ 0.01).结论 在体外受精胚胎移植中,碎片等级1～2级与3～4级的均为8c组囊胚质量好,此结果对于指导选取高质量胚胎具有参考价值.
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小鼠巨细胞病毒对小鼠体外受精、卵裂和囊胚形成的影响
目的 探讨小鼠巨细胞病毒对小鼠成熟卵母细胞体外受精、卵裂和囊胚形成的影响.方法 在IVF-30培养液中加入100TCID50、10TCID50、1 TCID50小鼠巨细胞病毒,观察小鼠成熟卵母细胞体外受精、卵裂和囊胚形成情况.结果 与正常对照组比较,各病毒组的卵母细胞体外受精率、卵裂率以及囊胚形成率差异均无显著性意义.结论 小鼠巨细胞病毒对小鼠卵母细胞体外受精、卵裂和囊胚形成无明显影响.
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Fgf4信号通路在早期胚胎发育过程中的作用
囊胚的形成,内细胞团?(inner cell mass,ICM )及滋养外胚层(Trophectoderm,TE)的形成是胚胎的第一次分化事件,而第一次的细胞命运决定则是大约在32-细胞阶段才确定的.在囊胚形成的过程中参与细胞命运决定的可能转录因子有Fgf4(成纤维细胞生长因子4,Fibroblast GrowthFactor 4)、Fgfr2( Fibroblast Growth Factor receptor2, 成纤维细胞生长因子受体2)、Cdx2(caudal homeobox Transcription Factor 2 ,尾型同源盒转录因子2)、Tead4(TEA域家族成员4,TEA domain family member4)、Sox2 (SRY--sex-determining region Y box 2)、Oct4(Octamer-4,OCT3 /Pou5f1)等.本文主要综述FGF4信号通路有关的一系列因子在这一过程中的作用的研究进展.Murohashi M 等人提出在早期胚胎F G F4信号通路中各因子相继产生作用,它们之间的可能的关系为FGF4-FGFR2-FRS2a(FGFR2的底物)-E R K(促分裂原激活的蛋白激酶)-Cdx2,而Fgf4的表达受到Sox2/Oct4的协调调控表达,因此可以改为Sox2/Oct4-FGF4-FGFR2-FRS2a-ERK-Cdx2.
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水通道蛋白与胚胎着床
水通道蛋白作为水分子及其他小分子物质选择性通透的孔道,在哺乳动物的生殖系统广泛分布.研究发现,水通道蛋白参与哺乳动物生殖过程中的很多重要环节,如卵泡发育、囊胚形成、胚胎着床、羊水量的调节等.在囊胚形成及胚胎着床过程中,水通道蛋白的表达及分布发生一系列变化,表明水通道蛋白在该过程中发挥着重要的作用.
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人废弃胚胎体外培养成囊胚的实验室结局
背景:有报道称可以利用废弃胚胎建立人类胚胎干细胞系,对形态发育滞后的胚胎冻融后移植仍有再利用的医学价值.目的:观察人废弃胚胎在体外继续培养形成囊胚的潜能.方法:收集接受体外受精-胚胎移植或卵胞浆内单精子注射患者治疗后第3天废弃的胚胎404枚,进行囊胚序贯培养.结果与结论:①废弃胚胎404枚,形成囊胚 65枚,总囊胚形成率为16.1%.②囊胚形成与患者的病因分类、年龄、受精方式无相关性(P > 0.05).③胚胎来源于≥三原核(3PN)的(6~8)细胞组的囊胚形成率高(P < 0.05).卵裂球数随细胞数的增加,囊胚率也增高,但>8细胞囊胚率反而下降、与<3细胞组的结果相近.④Ⅰ,Ⅱ胚胎形成囊胚速度快,形成率显著高于Ⅲ,Ⅳ胚胎(P < 0.05).⑤有囊胚形成患者的临床妊娠率显著高于无囊胚形成患者(P < 0.05).提示囊胚形成与患者病因分类、年龄、受精方式无相关性.优质胚胎与(6~8)细胞的胚胎囊胚形成率高,多原核胚胎形成囊胚的价值应引起关注.废弃胚胎再利用能预测临床结局,为人类胚胎干细胞提供有利资源.
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重度畸形精子症会影响ICSI中囊胚形成、活胎率和其他临床参数结果吗?
为了探讨严格的精子形态学检查结果与接受卵泡浆内单精子注射技术(ICSI)夫妇临床结果参数是否有相关性,Dan B等对2004年1月至2006年12月间在克里夫兰临床生殖中心接受ICSI的患者进行了一项回顾性研究.研究者将符合条件(精子总数>106、女性年龄<37岁)的1074例ICSI纳入研究.评估实验对象的精子总数、活率、快速移动精子数日和精子形态学检查.
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分裂期胚胎移植后剩余胚胎行囊胚培养与冷冻并复苏后获足月分娩一例
在体外受精-胚胎移植周期中,分裂期胚胎移植后剩余达不到冷冻标准的胚胎,开展囊胚培养,如有囊胚形成则行囊胚冷冻的方法,可以大限度的节约胚胎,同时可评估胚胎继续发育能力.本中心自2005年开始对剩余胚胎进行囊胚培养与冷冻,并于2006年首次获得临床分娩,报道如下.
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雌激素受体抑制剂对小鼠囊胚形成的影响
目的 观察雌激素受体(estrogen receptor,ER)抑制剂对昆明(Kunming,KM)小鼠体外囊胚形成的影响,为进一步探讨雌激素受体在小鼠囊胚形成中的作用和机制提供实验依据.方法 以空白KSOM培养液为对照组,KSOM中添加浓度为1、2、3、4、5 μmol/L的ERα抑制剂MPP,以及浓度为1、10、50、100μmol/L的ERβ抑制剂PHTPP为实验组,收集KM小鼠8-细胞胚进行体外连续培养,计数各组发育至桑葚胚和囊胚两个阶段的数目,比较各组发育到囊胚的比率.结果 添加浓度为1μmol/L、2μmol/L的MPP实验组囊胚发育率分别为86.36％、86.40％,与对照组(82.26％)相比无明显差别(P＞0.05),而添加浓度为3 μmol/L、4μmol/L、5μmol/L的MPP实验组囊胚发育率分别为46.58％、7.50％、0,发育率显著下降(P＜0.01).添加浓度为1 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L的PHTPP实验组囊胚发育率分别为82.61％、87.04％、83.98％,与对照组(82.09％)比较没有明显差异(P＞0.05),而添加高浓度(100 μmol/L)的PHTPP实验组囊胚发育率(51.39％)较明显下降.结论 低浓度(5.mol/L)的ERα抑制剂MPP可完全抑制KM小鼠8-细胞胚体外发育到囊胚,而50 mol/L的ERβ抑制剂PHTPP对KM小鼠囊胚形成无明显影响,高浓度(100 μmol/L)的PHTPP才可部分抑制囊胚形成.提示在小鼠囊胚形成中,ERα起着更为主要的作用.
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γ-氨基丁酸通过其B受体影响小鼠植入前胚胎的发育
目的:探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)对小鼠植入前胚胎发育的影响及其机制.方法:①收集不同发育阶段的小鼠植入前胚胎,通过激光共聚焦检测GABA及其B受体B1亚基(B receptor B1 subunit,GB1)、A受体pi亚基(A receptor pi subunit,GABRP)以及GABA合成酶(L-glutamate decarboxylase,GAD67)的表达.②不同发育阶段的胚胎分别培养在含10,20,30,40,50 μg/μL GABA和40 μmol/L B型受体抑制剂(3-Amino-2-(4-chlorophenyl)-2-hydroxypropanesulfonic acid,2-hydroxysaclofen)的培养液中,48～72 h时观察囊胚的形成并计算囊胚形成率.结果:①GABA与其受体GB1蛋白在小鼠胚胎中的表达模式一致,在2-细胞和4-细胞阶段,主要表达在细胞膜上,而在8-细胞至囊胚阶段,则转移到细胞核中表达;而另一受体GABRP在植入前胚胎的各个阶段均不表达.GAD67在胚胎发育的各个阶段均有表达.②各发育阶段胚胎的囊胚形成率均随着GABA浓度的增加而下降,且呈剂量依赖性;10μg/μL GABA可显著降低2-细胞胚胎的囊胚形成率(92％ vs.99％,x2=5.70,P=0.035).③40 μmol/L 2-hydroxysaclofen能够有效逆转30 μg/μL和40μg/μL GABA对囊胚形成的抑制作用(99％ vs.45％,x2=72.32,P=0.000;99％ vs.4％,x2=180.66,P=0.000).结论:GABA通过其B受体抑制小鼠植入前胚胎的发育.
关键词： γ-氨基丁酸 植入前胚胎 2-hydroxysaclofen 囊胚形成 -
原核期形态特征与胚胎体外发育能力和体内着床潜能的关系
目的 探讨原核期评分系统与受精后第3天胚胎形态、受精后第6天囊胚形成和着床率之间的关系,以评估其在体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)中的应用价值.方法 于常规IVF或卵胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）受精后16～20 h观察受精情况,将正常受精卵母细胞参照Scott提出的Z评分系统分为Z1 ～Z4四种类型,比较不同原核类型之间的卵裂率,胚胎第3天(D3)优质胚胎率和第6天(D6)囊胚形成率.并通过分析着床结局明确的移植胚胎,比较各种类型受精卵之间的着床率.结果 Z4组受精卵的卵裂率(92.9％)、ID3优质胚胎率(14.25％)、D6囊胚形成率(10.48％)均明显低于其他各组(P＜0.01).Z4组的着床率(5.88％)很低,但各组的着床率之间差异无显著性(P＞0.05).Z1、Z2、Z3三组间的卵裂率、D3优质胚胎率、D6囊胚形成率和着床率之间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 异常的原核形态（Z4型）可预测胚胎的体内外发育潜能,但核仁的形态特征并不一定能预测胚胎的活力,Z1、Z2和Z3胚胎可能具有相同的发育潜能.
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影响形态学低评分胚胎体外囊胚形成的相关因素研究
目的 探究影响形态学低评分胚胎体外囊胚形成的相关因素.方法 选取2015年5月至2016年7月在南方医科大学广济医院行常规体外受精与卵胞浆内单精子显微注射治疗周期中正常受精的D3低形态学评分胚胎并将其移入囊胚培养液中进行培养,直至囊胚形成同时给予分级,随后分析囊胚形成与年龄、卵裂球数量、碎片率、受精方式的相关性.结果 卵裂球数≥6个组的囊胚形成、可移植囊胚形成、优质囊胚形成情况均显著优于卵裂球数<6个组;碎片率<25 %组囊胚形成、可移植囊胚形成、优质囊胚形成情况均显著优于碎片率≥25 %组.结论 形态学低评分胚胎具有不同程度的发育潜能,胚胎碎片率以及卵裂球数会影响其囊胚形成、可移植囊胚、优质囊胚形成.
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形态学低评分胚胎体外囊胚形成的相关因素及应用价值研究
在辅助生殖技术中,胚胎质量很大程度上决定了妊娠率,目前,绝大多数的辅助生殖中心主要采用形态学评分来评估胚胎的质量,在体外受精后第3天(D3)据此选择优质胚胎进行移植或冷冻保存,剩余的发育潜能低冻存意义不大的低评分胚胎多被丢弃,但随着体外培养技术的不断完善,低评分胚胎的利用得到了重新审视.已有很多文献研究报道形态学低评分胚胎的碎片程度、卵裂球数目、原核数目、卵子形态、原核期形态等是影响囊胚形成的相关因素,但其相关因素终相关程度及依据标准各报道都有所不同,在此本文将对低形态学胚胎形成囊胚的相关因素作一综述,为临床对形态学低评分胚胎的处理提供理论依据,以更好地利用低形态学胚胎,对如何选择低形态学胚胎进行囊胚培养提供参考.
