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合江金钗石斛
位于四川省南部的合江县,是四川省与重庆市毗邻的所有县区中唯一一个即拥有长江黄金水道,又融入重庆"一小时的经济圈"的县,更是是金钗石斛的故乡.据《神农本草经》、《本草纲目》、《名医别录》等古代医学名著记载,石斛是九大仙草之首,具有起死回生的功效.现代医学表明,石斛所含的石斛碱等成分具有抗癌功效.又据《神农本草经》、《本草纲目》、《名医别录》等古代医学名著记载金钗石斛原产于合江.川石斛特别是合江金钗石斛,在国内外享有盛名.解放前,合江县即有2个专业的石斛交易市场,是石斛商品的集散地.自古以来,合江群众就有种植金钗石斛传统,并掌握了一定的种植技术和经验.
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不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱含量比较与分析
目的：研究不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量变化规律。方法：采用气相色谱内标法，测定并比较不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量差异。结果：不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量均有明显差异，4年生石斛中石斛碱含量高于3年生，不同部位中石斛碱含量为：茎上段跃茎中段跃茎下段。结论：通过对不同生长年限和不同部位金钗石斛主要成分含量比较分析，为确定石斛采收期及对不同部位石斛资源的合理开发利用提供了参考依据。
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复方石斛的提取工艺研究
目的:优选复方石斛佳提取工艺.方法:以粗多糖、总黄酮、石斛碱的含量及干膏率为指标,采用正交试验法,利用多指标综合评价的方法及对权重系数的设置,优先佳提取工艺.结果:复方石斛佳提取工艺:10倍量的70％乙醇和水各回流120 min.结论:该优化工艺客观可行,稳定可靠,可为复方石斛的工业生产提供实验依据.
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石斛碱在小鼠体内的组织分布
目的:通过UPLC-MS检测小鼠主要脏器中石斛碱的含量,探讨石斛碱在小鼠体内的分布特征.方法:建立组织样品中石斛碱的分析方法,小鼠灌胃给予石斛碱(剂量60 mg· kg-1),分别于0,30,60,120 min收集小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑和肠组织,样品处理后采用Q-Exactive型四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统分析,Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.9 μm),流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,可加热电喷雾离子源(HESI)正离子模式检测石斛碱含量,选取盐酸伪麻黄碱为内标.结果:小鼠各组织样品中内源性物质对石斛碱含量测定无干扰,方法学考察符合要求.石斛碱在小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑和肠组织中均有分布,30 min均已达峰值,此时肝脏样本中石斛碱质量浓度高(1 241.69 ±78.64) μg·L-1.60 min时各组织样本中石斛碱含量已显著降低,此时空肠组织样本中石斛碱质量浓度高(166.15±10.80) μg·L-1.120 min时各组织样本中石斛碱含量进一步降低,此时以回肠组织样本中石斛碱质量浓度高(118.25±8.51)μg·L-1.结论:石斛碱在小鼠体内的组织分布较为广泛,其中肠组织和肝脏中药物浓度较高.在脑组织中的分布情况提示石斛碱能够透过血脑屏障,为阐述其具有神经药理作用提供了实验依据.
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气相色谱法测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱
目的:测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱的含量,探索不同采收月份和年限石斛碱含量变化规律.方法:采用气相色谱法测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱的含量.结果:不同采收月份中,9月份石斛碱含量低,为0.239%,1月份石斛碱含量高,达0,559%,不同采收年限中,一年生石斛碱含量高,达0.546%.结论:不同月份、不同年限的金钗石斛中石斛碱均有明显差异,实验为金钗石斛采收期的确定提供评价依据.
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星点设计-效应面法优选石斛酒润蒸制工艺
目的:采用星点设计-效应面法优选优选石斛的酒润蒸制工艺.方法:采用HPLC测定石斛碱含量,色谱条件为Diamonsil钻石二代C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(0.1％三乙胺)梯度洗脱(0～30 min,30％～80％乙腈;30 ～40 min,80％乙腈),流速1 mL· min-1,检测波长240 nm,柱温30℃,进样量10μL.利用UV测定石斛多糖含量,以白酒体积分数、白酒加入量、蒸制时间为自变量,石斛碱与石斛多糖含量的总评归—值为因变量,通过星点设计-效应面法优选石斛的炮制工艺.结果:石斛碱线性范围0.336 ～3.36μg(R2 =0.999 8),精密度RSD 1.24％,重复性RSD 1.06％,平均加样回收率97.62％(RSD 1.45％);石斛多糖线性范围0.020 32 ～0.101 6 g·L-1(R2 =0.997 1),精密度RSD 1.71％,重复性RSD1.90％.佳炮制工艺为白酒体积分数48％,白酒加入量17％,蒸制时间6.78 h.石斛碱平均质量分数0.303％,预测值0.292％,相对偏差3.76％;多糖平均质量分数12.3％,预测值11.8％,相对偏差4.24％,建立的模型预测性良好.结论:优选的石斛酒润蒸制工艺简便、稳定.
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不同干燥工艺对金钗石斛叶品质的影响
目的:研究不同干燥工艺对金钗石斛叶品质的影响,为改进该药材的初加工和扩大石斛药材的药用部位提供理论依据.方法:以金钗石斛叶为原材料,采用热风干燥、微波干燥、真空干燥和真空冷冻干燥4种不同干燥方式对金钗石斛叶进行干燥,探讨4种方式对金钗石斛叶色泽、微观结构、总多糖和石斛碱含量的影响.结果:真空冷冻干燥产品色泽保持好,优于其他3种干燥方式.不同干燥方法对样品所呈现的微观结构有所区别.金钗石斛叶经真空冷冻干燥、真空干燥、热风干燥及微波干燥后总多糖质量分数分别为3.11％,3.02％,2.81％和2.74％.不同干燥工艺对金钗石斛叶总多糖含量的影响较大,而对石斛碱含量则影响很小.结论:从成本方面考虑,热风干燥方式下的金钗石斛叶色泽较好,有效成分含量较高,且所需设备简单、节能、处理量大,在企业加工中值得推广应用.
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UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技术鉴定石斛碱在人肝微粒体中的代谢产物
目的:通过UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技术对石斛碱在人肝微粒体中的主要代谢产物进行鉴定与分析.方法:运用人肝微粒体体外温孵法,模拟细胞色素P450酶(CYP450)及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UGT)酶反应体系,采用ThermoQ-Exactive型四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统分析,Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm ×150 mm,1.9 μm),流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.3 mL· min-1,电喷雾离子源(ESI)正离子模式检测.结果:通过精确相对分子质量和二级碎片离子信息,鉴定了石斛碱在入肝微粒体中Ⅰ相代谢的4个主要代谢产物,依次标记为M-250([M+H]+m/z250.180 1),M-262([M+ H]+m/z 262.180 0),M-280([M +H] +m/z 280.190 6),M-296([M+H]+ m/z 296.185 6),以及Ⅱ相代谢的1个主要代谢产物,标记为M-440([M]+m/z 440.227 8).结论:所建立的UPLC/LTQ-Orbitrap-MS测定人肝微粒体中石斛碱及其代谢产物的方法灵敏、快捷,可应用于石斛碱在人肝微粒中的代谢研究,同时为石斛碱的药物代谢动力学研究提供了实验依据.
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金钗石斛鲜品闪式提取方法的工艺研究
目的:研究闪式提取法中金钗石斛鲜品的佳提取条件.方法:采用L9(34)正交试验法优选金钗石斛的佳提取条件.考察提取次数、溶剂浓度和溶剂倍数3个因素,每个因素选取3个水平进行实验.结果:佳工艺为A2B2C3,,即用8倍量75%乙醇破碎提取3次,时间为30s/次.结论:采用本工艺金钗石斛的活性成分石斛碱含量较高,工艺可行.
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利用气升式生物反应器培养铁皮石斛原球茎
目的:探明影响反应器内铁皮石斛原球茎生长及物质合成的因素,为铁皮石斛原材料的大量生产提供一种新方法.方法:利用3L气升式生物反应器,以组培原球茎为材料,研究了接种量、光照强度和通气量对原球茎增殖生长和多糖及石斛碱积累的影响.结果:当接种量为10g· L-1时,培养30 d后原球茎颜色深绿,生长健壮.多糖含量在接种量处理间无差异,但石斛碱含量有差异(接种量10g· L-1处理高),多糖和石斛碱生产量在10g·L-1接种密度中高.光照强度1600lx条件下原球茎生长旺盛,光照对铁皮石斛原球茎多糖的积累起到促进作用,但对石斛碱的积累则有抑制作用,多糖含量和生产量在1 600,2 400 lx光照处理下好于暗条件处理；石斛碱的含量虽然在暗处理中高,但因原球茎生长不佳,石斛碱的生产量在1 600 lx的光照强度处理中出现大值.通气量为0.2(空气体积/培养体积/min)时原球茎生长健壮,颜色鲜绿,生长优于0.1,0.3处理,且多糖和石斛碱含量和产量均达大值.结论:在工作体积为2L的气升式球型生物反应器内,接入10g·L-1原球茎外植体,光照强度调节为1 600 lx,通气量为0.2有利于原球茎生长和多糖及石斛碱的生产,铁皮石斛原球茎生物反应器培养是大量快速生产多糖和石斛碱的有效途径.
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高效液相色谱法测定金钗石斛中石斛碱含量
目的 建立一种用HPLC测定石斛中石斛碱含量的方法.方法 Waters XTerraTMRP18色谱柱(3.9mm×150mm,5 μm),流动相为乙腈-水-三乙胺(21:79:0.005),流速为1 mL·min-1,检测波长为210 nm.结果 石斛碱在30.9-618 mg·L-1内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=3 191.5p+14 191(r=0.999 9),平均回收率为99.11%,RSD为2.60%.结论 应用HPLC测定石斛中石斛碱含量的方法简便、准确、可行.
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菌根真菌对金钗石斛幼苗生长及石斛碱和多糖积累的影响
目的 研究茵根真菌对金钗石斛幼苗生长和主要化学成分积累的影响.方法 金钗石斛种苗移栽时,在苗根部施加茵根真菌MF23;定期取样,以茎高和干重等为指标考察菌株对幼苗生长的影响;以石斛碱和多糖含量为指标考察菌株对幼苗主要化学成分积累的影响.结果 栽培18个月,处理组茎高和根、茎、叶干重均显著高于对照组,分别比对照组提高25.34%、29.28%、34.64%和47.12%.菌株MF23能提高石斛碱和多糖的高积累量,并延长多糖的积累时间.栽培12个月处理组和对照组石斛碱含量高,分别为0.59%和0.51%;处理组和对照组分别在栽培15个月和12个月时多糖含量高,分别为20.05%和17.89%.结论 利用菌株MF23菌根化育苗能显著促进金钗石斛幼苗生长,该菌株用于金钗石斛栽培生产有良好的应用前景.
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二种石斛属植物和小叶石仙桃生物碱的组织化学定位
目的对不同年龄的铁皮石斛、铜皮石斛及其石斛伪品--小叶石仙桃的不同器官进行生物碱组织化学定位,选择具有较高药用价值的石斛类药用植物和药用部位,确定铁皮石斛的佳采收期.方法采用冰冻切片法,根据生物碱的理化性质,用碘化铋钾染色法对3种植物的生物碱进行组织化学定位.结果生物碱主要存在于3种植物茎的薄壁细胞、根的皮层细胞、叶的叶肉细胞中;其总生物碱含量顺序为:二生年的铁皮石斛≈铜皮石斛＞小叶石仙桃.此外,在3种植物不同的器官中,其总生物碱的含量都呈现"叶＞茎≈根"的规律.结论在种间及同种植物的不同年龄或不同器官中,其生物碱的含量存在差异.其中,以二年生铁皮石斛和铜皮石斛茎叶的生物碱含量较高,表明其药用价值也较高.
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金钗石斛化学成分的研究
金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.是兰科石斛属植物,是<中国药典>收载石斛种之一,其应用历史悠久,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳之功效[1].曾报道其主要化学成分是石斛碱等生物碱类、联苄和菲类以及倍半萜类成分等[2].
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珍稀宝草--石斛
现代科学研究论证,石斛含有石斛多糖、石斛碱等有益物质,可以全面提高机体免疫功能,调节消化系统,舒缓疲劳,增强体力,对病后补养及养生保健都有很好的作用.
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不同干燥方法对金钗石斛鲜品中石斛碱含量的影响
目的:以金钗石斛鲜品为对象,研究不同的干燥方法对其有效成分石斛碱的影响,为金钗石斛鲜品的贮存提供依据.方法:将金钗石斛鲜品闪式提取后,分别用冷冻干燥、热风循环干燥、传统烘干法,选出适宜的方法,并对贮存前后有效成分含量进行测定.结果:冷冻干燥法利于金钗石斛鲜品干燥及保存.结论:应用现代技术对金钗石斛鲜品的贮存是可行的.
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铁皮石斛中石斛碱、多糖的含量测定
目的:测定铁皮石斛中石斛碱、多糖的含量.方法:采用气相色谱法测定石斛碱,DB-1毛细管柱(30mm ×0.25mm,0.25 μm),程序升温:初始温度80℃,以10℃·min-1的速率升温至250℃,保持5分钟,进样口温度:250℃,检测器温度:250℃,进样量10 μL.采用紫外分光光度法进行多糖的含量测定,以无水葡萄糖为对照品,于488 nm处测定.结果:石斛碱在0.10 ～2.00 μg范围内线性关系良好(r=0.9997,n=6),平均加样回收率为97.1％;多糖在0.02～0.10 g/L范围内线性关系良好(r=0.9995,n=6),平均加样回收率为94.9％.结论:本研究建立的方法测定准确、重复性好,可更好地控制铁皮石斛药材的质量.
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自动电位滴定法测定金钗石斛药材中总生物碱的含量
目的:测定金钗石斛约材中总生物碱的含量.方法:药材以90%乙醇回流提取3次,醇提液浓缩至无醇味后以3%盐酸溶解,酸水溶液经强酸型阳离子交换树脂柱吸附,以去离子水洗脱至中性后,收集5%氨水50%乙醇液洗脱流份(以生物碱的检识反应判定终点)并浓缩至干,即得含量测定用供试品.供试品在冰醋酸中以高氯酸滴定液(0.1 moL/L)自动滴定,由此以石斛碱(C16H25NO2)为基准物计算金钗石斛中生物碱的含量(每1 mL高氯酸滴定液相当于石斛碱26.3mg).结果:三个批次金钗石斛药材的总生物碱含量测定结果分别为0.85%、0.63%、1.03%.结论:经方法学考察,该含量测定方法具有良好的专属性和灵敏度,检测结果稳定可靠,可用于金钗石斛药材中总生物碱的定量分析.
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不同炮制方法对石斛中石斛碱和多糖溶出率的影响
目的:探讨不同炮制方法对金钗石斛有效成分石斛碱和多糖溶出率的影响.方法:用酸性染料比色法对石斛碱进行含量测定,用苯酚--硫酸比色法对多糖进行含量测定,比较石斛干品、清炒石斛、酒炙石斛3种炮制品的有效成分溶出率.结果:酒炙法炮制的石斛的石斛碱和多糖的含量明显高于其它方法.结论:酒炙方法可增加石斛有效成分的溶出率.
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气相色谱法检测保健食品中石斛碱含量及稳定性研究
目的 建立保健食品中石斛碱检测的气相色谱法,并用于保健食品中石斛碱的稳定性研究.方法 样品中的石斛碱经含有0.05％甲酸的甲醇回流提取后,经DB-1毛细管柱(0.25 μm×0.25 mm,30m)分离,程序升温:初始温度80℃,以10℃/min的速率升温至为250℃,保持5 min;进样口温度为250℃;FID检测器,温度为250℃;载气为N2,流速为1 ml/min;进样量为1μl;分流比为10∶1.根据保留时间定性,内标法定量.结果 石斛碱在4.395 μg/ml ～70.32 μg/ml线性关系良好(r=0.999 7),样品的加标回收率为95.5％～102.3％,平均回收率为98.1％,RSD为2.4％;检出限为0.36μg/ml;定量限为1.19μg/ml,样品经过3个月的加速破坏性试验,检测其中的石斛碱含量平均上升比率为2.2％.结论 该方法具有操作简便快速、分离效果好、精密度和准确性高、重现性好的特点,可为石斛碱类保健食品的质量控制提供方法参考.
