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铁皮石斛不同部位、不同时期药用成分分布规律分析
目的 为了确定铁皮石斛的适宜采收期,对铁皮石斛不同部位、不同时期的主要药用成分的积累与分布规律进行研究.方法 采用紫外-可见分光光度计测定在一个生长周期内铁皮石斛不同部位、不同时期多糖的含量;用高效液相色谱法测定一个生长周期内铁皮石斛不同部位、不同时期石斛碱的含量.结果 铁皮石斛茎部分的多糖含量高于叶部分;而在叶与茎部分均未检出石斛碱.结论 通过采收期的比较来看,4月底至6月中旬多糖含量相对较高,故将其定为佳采收期.
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金钗石斛茎和花中石斛碱的含量比较研究
目的:比较分析贵州赤水产金钗石斛茎和花中石斛碱的含量.方法:采用气相色谱内标法,色谱柱为OV-1毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.33 μm);柱温(程序升温):初始温度为150℃,保持5 min,以10℃·min-1程序升温至250℃,保持15min;进样口温度为250℃,FID检测器温度为250℃;载气N2,分流比18:1;萘为内标,测定并比较金钗石斛茎和花中石斛碱的含量.结果:石斛碱在0.1～0.8 μg范围内线性关系良好,金钗石斛茎和花中石斛碱平均含量分别为0.63％和0.45％.结论:赤水产金钗石斛茎和花中石斛碱含量均符合《中国药典》2010年版含量限度要求,本研究为扩大金钗石斛的药用部位提供了依据.
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不同方法炮制前后石斛中石斛碱及石斛多糖含量测定
目的:比较石斛干品与不同炮制品中石斛碱及多糖含量差异.方法:通过高效液相色谱法测量石斛碱含量,以苯酚-硫酸法检测多糖含量.结果:干品石斛碱含量0.182%、黄酒炙品0.218%、白酒炙品0.216%、黄酒润蒸制品0.225%、白酒润蒸制品0.283%、蒸制品0.229%;干品多糖含量5.48%、黄酒炙品5.80%、白酒炙品7.56%、黄酒润蒸制品8.31%、白酒润蒸制品12.5%、蒸制品8.72%.结论:石斛炮制过后石斛碱与多糖含量均有所增高,不同炮制品之间石斛碱和多糖含量也有一定差异.
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浅谈中药铁皮石斛
铁皮石斛为兰科植物金钗石斛、铁皮石斛等多种同属植物的茎.又名黑节草,早在<本草纲目>中就被列为药甩,在<神农本草经>中列为上品.清代名医赵恕轩称其为"滋阴补益珍品",其性味甘、淡、微咸、寒;入胃、肺、肾经,具有卓著的滋阴潜阳和益胃生津的功效.作为一味补阴要药,用于阴伤津亏,口干烦渴,食少干呕,病后虚热,目暗不明,如<本经>所述:"主伤中除痹,下气,补五脏虚劳赢瘦,强阴,久服疗肠胃".作为我国传统名贵药材之一,价格昂贵,以味甘、质重、柔韧和粘性大者为佳.现代医学对其功用研究较多,其主要有效成分石斛碱、多糖等成分,是增强人体免疫力,消除肿瘤,抑制癌症,恢复嗓音,抗声带疲劳的物质基础.笔者就临床上的应用和使用注意进行初步探析.
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石斛碱抑制高钠盐诱导的心脏成纤维细胞增殖
目的 探讨高钠盐诱导心脏成纤维细胞(CF)增殖的作用机制及石斛碱的干预效应.方法 体外组织块贴壁法培养大鼠CF,实验分为3组:对照组(139 mmol/L Na+)、高钠盐组(161 mmol/L Na+)、石斛碱组(161 mmol/L Na++10-5 mol/L石斛碱),培养48 h.CCK-8细胞增殖试剂盒与MTr比色法检测各组细胞增殖情况;Western blot检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2 (p-ERK1/2)、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达水平.结果 与对照组比较,高钠盐组培养48 h后,CF增殖明显增加;与高钠盐组相比,10-5 mol/L石斛碱显著抑制CF增殖.与对照组相比,高钠盐组CF中p-ERK1/2、p-NF-κBp65蛋白表达增高,炎性因子MCP-1、VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达增加;与高钠盐组相比,石斛碱可明显降低PC-NA、p-NF-κB p65蛋白表达及MCP-1 mRNA表达,但对p-ERK1/2、VCAM-1和ICAM-1表达无明显影响.结论 高钠盐诱导CF增殖及炎性因子表达,其机制与p-ERK1/2、p-NF-κB p65表达上调有关;石斛碱抑制上述效应,其机制与抑制p-NF-κB p65有关.
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气相色谱法测定金钗石斛药材中石斛碱的含量
金钗石斛为兰科植物Dendrobium nobile Lindl.的茎,是我国常用的名贵中药材之一,<本草纲目>称之有"强阴益精、厚肠胃、补内绝不足、轻身延年"的功效,因此常被中医用于治疗热病伤津、口干烦渴、病后虚热、舌光少苔、食少干呕、目暗不明等症.现代研究也证实它对咽喉疾病、肠胃疾病、白内障、心血管疾病、肿瘤等疾病具有很好的疗效[1].
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泸州、赤水两地金钗石斛中石斛碱含量比较
目的:对四川泸州市合江县和贵州赤水市两地金钗石斛中石斛碱的含量进行比较.方法:采用气相色谱法,对两地77份不同生长年限(2～5年生)、不同栽种环境(贴树生和贴石生)金钗石斛样本中石斛碱含量进行测定,由于贴树生样本数太少,为了减小误差,本实验只对72份贴石生样本数据应用SPSS 19.0软件进行统计分析.结果:泸、赤两地同一生长年限(即2年生、3年生、4年生、5年生)样本中石斛碱含量的比较均无显著差异(P＞0.05);泸、赤两地样本中石斛碱的含量随着生长年限(2～5或4年)的增加而升高,差异极显著(P＜0.01),但石斛碱的含量增长速度变慢,至5年生时与4年生的比较无显著差异(P＞0.05).结论:该研究可为金钗石斛的种植和产品开发提供科学依据.
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离子液体超声微波协同萃取金钗石斛总黄酮和石斛碱的研究
目的:应用离子液体超声微波协同萃取金钗石斛总黄酮和石斛碱.方法:研究不同离子液体、微波功率、提取时间及料液比对金钗石斛总黄酮和石斛碱提取得率的影响,在此基础上,利用响应面试验设计进一步优化.结果:佳条件为:1.0 mol/L[Bmim] BF4为萃取溶剂,微波功率328 W,提取时间185 s,料液比1∶22,测得金钗石斛总黄酮得率为0.490％,石斛碱得率为0.224％.与加热回流提取相比,金钗石斛总黄酮和石斛碱的得率均有所提高,提取时间从90 min缩短到185 s.结论:该提取技术能达到省时、高效的效果,可用于金钗石斛总黄酮和石斛碱的提取.
关键词： 离子液体超声微波协同萃取 金钗石斛 总黄酮 石斛碱 响应面优化 -
UPLC-MS/QAMS测定小鼠血浆中石斛碱及其代谢产物M-250、M-280的浓度
目的:首次建立测定小鼠血浆中石斛碱及其代谢产物M-250、M-280浓度的方法.方法:小鼠灌胃石斛碱60 mg/kg,1 h后收集血浆处理后,以盐酸伪麻黄碱为内标,以石斛碱对照品为对照,采用超高效液相色谱-质谱/一测多评法测定石斛碱及其代谢产物M-250、M-280的血药浓度.色谱柱为Hypersil Gold C18,流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为5μL;采用可加热电喷雾离子源,全扫描/正离子模式,雾化温度为300℃,离子传输管温度为350℃,鞘气流速为35 arb,辅助气流速为15 arb,喷雾电压为3.5 kV,碰撞电压为30、40、50 eV,质荷比检测范围为100～1500.结果:小鼠血浆中内源性物质对石斛碱及其代谢产物M-250、M-280浓度测定无干扰;石斛碱检测质量浓度线性范围为9.13～912.94 ng/mL(r=0.9996);定量下限为3.04 ng/mL,日内、日间精密度的RSD≤7.5％(n=5或n=3);准确度为96.8％～107.5％(n=5);基质效应为97.1％～106.0％(RSD=1.8％～4.7％,n=5);质控血浆样品溶液15℃保存24 h、-70℃保存并反复冻融3次以及-70℃保存15 d后浓度的RSD≤12.8％(n=3).小鼠血浆样品中石斛碱质量浓度为(41.3±5.7)ng/mL(n=12),以相对校正因子(RCF)按1.0计,代谢产物M-250、M-280的质量浓度分别为(493.0±73.1)、(41.4±3.0)ng/mL(n=12).结论:该方法灵敏、准确,可用于小鼠血浆中石斛碱及其代谢产物M-250、M-280的浓度测定.
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合江金钗石斛在不同采收期时多糖和石斛碱含量的比较
目的:对不同采收年限与采收月份时合江金钗石斛的品质指标进行测定,为合江金钗石斛合理采收期的确定提供科学依据.方法:采收一年生、二年生和三年生金钗石斛茎,测定其折干率和多糖(比色法)、石斛碱(气相色谱法)、总生物碱(比色法)含量以及有效成分总量率(石斛碱含量×折干率)等指标;采收二年生秋冬季(第2年10月至第3年3月,每月15日采收)金钗石斛茎,测定其折干率和多糖、石斛碱含量.结果:二年生金钗石斛茎的折干率、多糖含量与有效成分总量率较一年生与三年生高,总生物碱、石斛碱含量为一年生(0.52％、0.48％)＞二年生(0.48％、0.44％)＞三年生(0.32％、0.22％).从第2年10月至第3年3月,二年生金钗石斛茎的折千率逐月上升,多糖、石斛碱含量均呈现先上升后下降的趋势,其中多糖含量在2月高(17.32％),石斛碱含量于12月高(0.51％).结论:综合植物开花特性、折干率、多糖与石斛碱含量等指标,建议合江金钗石斛适采收期为二年生的12月和1月(第三年开花前).
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金钗石斛微粉细胞破壁率及其石斛碱含量测定
目的：：测定金钗石斛超细微粉细胞破壁率及超细粉碎前后石斛碱含量。方法：采用细胞计数法，以薄壁细胞为评价指标，测定金钗石斛微粉的细胞破壁率，并用气相色谱法测定超细粉碎前后细粉与微粉石斛碱的含量。结果：金钗石斛细粉称样量与完整薄壁细胞计数的回归分析结果表明，两者呈现显著相关，金钗石斛经超细粉碎后细胞破壁率为100%。利用气相色谱法测定金钗石斛超细粉碎前后细粉与微粉石斛碱含量分别为0.42%、0.35%。结论：此方法简单快速、准确可靠，可准确地进行金钗石斛微粉细胞破壁率及石斛碱的定量测定。
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金钗石斛在SD大鼠体内的药代动力学研究
目的 通过UPLC-MS方法检测大鼠血浆中石斛碱的含量,探讨金钗石斛细粉灌胃给药后在大鼠体内药代动力学的特征.方法 建立血浆样品中石斛碱的分析方法,大鼠经灌胃给予金钗石斛细粉0.8 g/kg,分别于0、2、6、10、15、20、30、40、60、90、120、180、240、480、720、1 440 min收集大鼠血浆,样品处理后采用Thermo Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统分析,Hypersil Gold C1s色谱柱(150 mm ×2.1 mm,1.9 μm),以0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,体积流量0.3mL/min,ESI源正离子检测石斛碱含量,盐酸伪麻黄碱为内标.结果 大鼠血浆样品中内源性物质对石斛碱含量测定无干扰,方法学考察符合要求,所建立的分析方法能够满足临床前药代动力学的研究.药动学结果显示,给药后血浆中石斛碱浓度平均达峰时间为11.71 min,大血药浓度平均值为212.17 μg/L,平均半衰期为351.95 min.结论 以石斛碱为检测指标,研究了金钗石斛细粉灌胃给药后在大鼠体内药代动力学的特征,为其进一步的研究与开发提供了参考.
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金钗石斛总生物碱提取及含量测定方法的改进
目的 提取较高纯度的金钗石斛总生物碱,并简单、准确地测定总生物碱含量.方法 金钗石斛药材以90％乙醇10倍量浸泡12h,然后加热煮沸2h,连续3次.醇提液减压浓缩至无醇味后以5％盐酸溶解,抽滤,酸水溶液经石油醚萃取3次,脱脂,浓氨水碱化至pH=10,碱水液经三氯甲烷萃取2次,回收溶剂,即得生物碱粗提物.然后用氯仿-甲醇溶液(1:1,v/v)溶解,过LH-20凝胶柱,回收溶剂,冷冻干燥,得石斛生物碱提取物.分别采用气相色谱法和酸性染料比色法测定提取物中石斛碱以及总生物碱的含量,以石斛碱(C16H25NO2)为基准物计算金钗石斛中总生物碱的含量.结果 提取5kg药材,得提取物干膏22.5 g,气相色谱法测得石斛碱含量为61.6％,酸性染料比色法测得总生物碱含量为73.2％.结论 LH-20凝胶柱可去除总生物碱粗提物中大量杂质,且改进后的酸性染料比色法较传统的方法更简单、准确性更高,此研究为后期的药效研究奠定了基础.
