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去甲斑蝥素诱导人卵巢癌SK-OV-3细胞发生有丝分裂期阻滞与凋亡
目的 考察去甲斑蝥素(NCTD)对人卵巢癌SK-OV-3细胞生长的抑制作用,探究其诱导细胞发生有丝分裂期阻滞及凋亡的过程及相关性.方法 NCTD 30,60,120和240 μmol·L-1分别作用人卵巢SK-OV-3细胞24,48和72 h后,MTT法检测细胞存活率;NCTD 60 μmol·L-1分别作用SK-OV-3细胞0,6,12和24 h后,流式细胞术测定细胞周期的变化;NCTD 60 μmol·L-1分别作用SK-OV-3细胞0,6,12和24 h,倒置显微镜下检测其对细胞形态学变化的影响;Giemsa染色检测细胞核的变化;间接免疫荧光术结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测细胞内微管分布及有丝分裂期纺锤体形成的影响.NCTD 60 μmol·L-1分别作用12和36 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;再将NCTD 60 μmol·L-1作用12 h后的细胞,采用温和的机械振荡法分离为悬浮细胞和贴壁细胞,继续作用24 h,流式细胞术及Giemsa染色检测分析两个时相两种细胞凋亡的影响.结果 MTT结果显示,NCTD 30～240μmol·L-1对SK-OV-3细胞的生长抑制作用存在明显的时间(P<0.05)和浓度依赖性(P<0.05);NCTD作用SK-OV-3细胞24,48和72 h的IC50分别为(261.3±2.4)μmol·L-1,(48.3±1.7)μmol·L-1和(10.9±1.0)μmol·L-1.NCTD 60 μmol·L-1分别作用于SK-OV-3细胞0,6,12和24 h,SK-OV-3细胞逐渐表现出G2/M期阻滞,呈时间依赖性;倒置相差显微镜下观察,NCTD引起SK-OV-3细胞逐渐收缩变圆,与周围细胞分离;Giemsa染色可见处于有丝分裂期的细胞显著增多,多个核细胞比例增多;免疫荧光染色发现,NCTD组细胞的微管系统受到干扰,有丝分裂期细胞纺锤体形成异常.NCTD作用细胞12和36 h凋亡率分别达20.4%和62.3%; 将NCTD作用12 h的细胞,人工振荡分离为悬浮细胞和贴壁细胞,检测凋亡情况,同时检测继续作用24 h后两组细胞凋亡情况,发现处于有丝分裂间期的SK-OV-3细胞凋亡率大于处于有丝分裂期的细胞.结论 NCTD主要通过诱导人卵巢癌SK-OV-3细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡抑制细胞生长.干扰细胞有丝分裂过程中微管的组装和纺锤体的形成可能是NCTD诱导SK-OV-3细胞M期阻滞的原因之一.NCTD诱导的SK-OV-3细胞发生凋亡可不依赖细胞M期阻滞.
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人卵巢癌细胞株3AO诱导凋亡的研究进展与评价
目的:细胞凋亡是各种抗癌药物诱导癌细胞正常死亡的主要方式,本文旨在对人卵巢癌细胞株3AO诱导凋亡进行评价.方法:采用国内外文献综述方法.结果及结论:通过对人卵巢癌细胞株3AO诱导及促进凋亡的因素及抑制凋亡的因素进行阐述,更多地了解诱导、促进及抑制3AO凋亡的作用机制,更好地指导抗癌药物的临床应用.
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三种癌裸鼠移植瘤肝脾转移的比较研究
目的 利用人卵巢癌、胃癌、结肠癌裸鼠移植瘤动物模型观察比较肝脾转移情况.方法 分别将人卵巢癌、胃癌、结肠癌实体瘤移植到裸鼠皮下,在建立人卵巢癌、胃癌、结肠癌裸鼠实体瘤模型的基础上,观察裸鼠实体瘤生长速度、存活时间及肝脾转移病理形态学变化.结果 人卵巢癌、胃癌、结肠癌实体瘤移植到裸鼠皮下,移植成瘤率、肝转移率皆为100％；卵巢癌脾转移100％；胃癌脾转移62.5％；结肠癌脾转移75％.人卵巢癌裸鼠实体瘤生长速度高于胃癌、结肠癌裸鼠实体瘤,且肝脾转移快,存活时间短；三种癌裸鼠移植瘤肝脾转移病理形态均有差异.结论 建立的人卵巢癌、胃癌、结肠癌裸鼠移植瘤肝脾转移完整地再现了人卵巢癌、胃癌、结肠癌患者肝脾转移的临床过程,为探讨人卵巢癌、胃癌、结肠癌肝脾转移生物学机制和抗转移提供参考,三种癌裸鼠移植瘤肝脾转移癌均有差异.
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人卵巢癌细胞中IL-18、ICE的基因及蛋白表达分析
目的 从基因转录及蛋白表达水平检测白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β转化酶(ICE)在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中的表达.方法 分别采用RT-PCR及免疫细胞化学染色法检测SKOV3和3AO中IL-18、1CE的mRNA及蛋白表达.结果 SKOV3和3AO中IL-18 mRNA及蛋白表达均阳性,其中SKOV3的mRNA表达量显著高于3AO(分别为0.32±0.09、0.17±0.04,P=0.009);而ICE mRNA及蛋白表达均阴性.结论 人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO在基因及蛋白水平表达IL-18,但缺如ICE表达的特点,可能与卵巢癌的发生发展有一定的关系.
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GnRH激动剂对人卵巢癌裸鼠移植瘤抑制作用及不良反应的研究
目的 研究GnRH激动剂对人卵巢癌裸鼠移植瘤抑制作用及副作用.方法 将人卵巢癌细胞OVCAR3注射入裸鼠腹腔内,构建移植瘤模型.将裸鼠随机分为3组,OVCAR3对照组、低剂量曲普瑞林组(75μg)和高剂量曲普瑞林组(150 μg).镜下观察曲普瑞林对全身及腹腔各脏器的毒副作用并测定对内分泌的影响.结果 高剂量曲普瑞林组腹腔移植瘤个数和体积少(P＜0.05).曲普瑞林对脏器无明显不良反应,高剂量曲普瑞林组血清雌激素明显低于OVCAR3对照组和低剂量曲普瑞林组(P＜0.05),血清促卵泡素明显高于OVCAR3对照组和低剂量曲普瑞林组(P＜0.05).结论GnRH激动剂可抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤生长,不良反应是引起雌激素缺乏,促卵泡素增多.
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牛黄天龙饮对裸鼠人卵巢上皮性癌SKOV3细胞株抗肿瘤作用的电镜观察
目的 利用透射电镜观察了牛黄天龙饮对人卵巢上皮性癌SKOV3细胞凋亡的诱导作用. 方法 把人卵巢上皮性癌SKOV3细胞种植到BALB/C裸鼠体内,造成荷瘤裸鼠模型,并将荷瘤小鼠模型进行分组,然后对各组裸鼠模型进行不同浓度牛黄天龙饮灌胃给药,22 d后取出肿瘤组织,在透射电镜下观察各组肿瘤组织的超微结构. 结果 牛黄天龙饮可诱导SKOV3细胞凋亡,且有浓度依赖性.低浓度牛黄天龙饮可引起癌细胞凋亡的早期超微结构改变.中、高浓度牛黄天龙饮可引起凋亡的晚期形态改变,而且还可引起细胞坏死. 结论 牛黄天龙饮诱导SKOV3细胞凋亡是其抑制肿瘤细胞生长的机制之一.
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CK7和CA125在人卵巢癌的表达及意义
目的 研究细胞角蛋白7 (CK7)和CA125联合在卵巢恶性肿瘤中的诊断意义及价值.方法 采用免疫组化方法,分别检测100例卵巢肿瘤中CK7和CA125的表达,统计学方法比较两种指标在良性、恶性及转移性肿瘤中的阳性表达率.结果 CK7和CA125在卵巢恶性肿瘤中的表达水平均高于转移源性的卵巢癌和卵巢良性瘤,差异均有统计学意义(P＜0.05).且在晚期癌中的表达高于早期,差异均有意义(P＜0.05).结论 CK7和CA125过表达提示二者可能参与卵巢癌的发病机制.
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Smad4的表达与卵巢癌淋巴管生成及淋巴结转移之间的关系
目的 观察Smad4和血管内皮生长因子(VEGF)-C在卵巢癌组织内的表达情况,分析Smad4和VEGF-C的表达与卵巢癌淋巴管生成及淋巴结转移之间的关系.方法 取卵巢癌病例60例,其中,淋巴结转移组36例,无淋巴结转移组24例.应用免疫组化法和Western blot技术观察Smad4和VEGF-C在卵巢癌组织内的表达.以D2-40作为淋巴管内皮特异性标记物,检测卵巢癌组织内淋巴管生成情况.结果 Smad4表达于卵巢癌细胞胞浆和胞核内,其在无淋巴结转移组的表达率明显高于其在有淋巴结转移组的表达率.Smad4表达阳性组的淋巴管数密度(LVD)明显低于Smad4表达阴性组的LVD.VEGF-C主要表达于卵巢癌细胞胞浆内,其在淋巴结转移组的表达率明显高于其在无淋巴结转移组的表达率.Smad4的表达与VEGF-C的表达呈显著的负相关性.Western blot检测结果表明,VEGF-C蛋白在有淋巴结转移卵巢癌组织中的表达量高于其在无淋巴结转移卵巢癌组织内的表达量,而Smad4在有淋巴结转移卵巢癌组织内的表达量明显低于其在无淋巴结转移组的表达量.结论 Smad4与VEGF-C的表达呈负相关,Smad4可能通过调节VEGF-C蛋白的表达而抑制卵巢癌淋巴管生成和淋巴道转移.
关键词： Smad4 血管内皮生长因子-C 淋巴结转移 人卵巢癌 -
大黄素对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX耐药的逆转作用
目的 研究大黄素(emodin)体外逆转人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX的紫杉醇耐药效应,探讨其可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测大黄素对SKOV3/TAX的细胞毒作用,测定非毒性剂量大黄素联合紫杉醇作用后,SKOV3/TAX对紫杉醇耐药性的变化,采用克隆形成实验检测大黄素与紫杉醇联用时,细胞克隆形成能力.采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡情况.结果 不同浓度大黄素对紫杉醇耐药细胞SKOV3/TAX有剂量和时间依赖性的抑制作用.选用对细胞抑制率较低浓度的大黄素与紫杉醇联合使用,使紫杉醇对其耐药细胞SKOV3/TAX细胞的IC50明显下降,且逆转倍数随作用时间而延长而增大.大黄素能抑制细胞的克隆形成能力,当大黄素与紫杉醇联用时,大黄素增加紫杉醇对SKOV3/TAX细胞的增殖抑制作用.大黄素在抑制细胞增殖的同时,尚可诱导细胞凋亡,且大黄素与紫杉醇联和用药后诱导细胞凋亡作用更强,大黄素能增加紫杉醇的细胞凋亡指数.结论 大黄素可以逆转紫杉醇引发的卵巢癌耐药,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.
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Dickkopf-2蛋白在卵巢癌患者血清中的表达及意义
目的 研究Dickkopf-2(DKK-2)血清蛋白在卵巢癌中的表达及意义.方法 收集2009年1月至2012年4月在中国医科大学附属盛京医院45例卵巢上皮性癌、40例卵巢上皮性良性肿瘤患者血清和38例正常自愿者血清.采用ELISA的方法检测DKK-2血清蛋白的表达情况,分析其与各临床病理参数的关系.结果 DKK-2蛋白在卵巢癌血清中的含量明显低于卵巢良性肿瘤以及正常血清,DKK-2蛋白含量与卵巢癌细胞分化程度明显呈负相关,与患者的FIGO分期、年龄、病理组织类型和淋巴结转移无明显相关性(P＞0.05).结论 DKK-2血清蛋白在卵巢癌中表达明显下降,在卵巢癌发展过程中发挥重要作用.
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RNAi沉默cdc2基因对人卵巢癌顺铂耐药细胞株增殖与凋亡的影响
目的 探讨利用RNAi沉默cdc2基因对人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP增殖、凋亡的影响,为卵巢癌顺铂耐药逆转提供一个可选择的靶点.方法 针对cdc2基因的DNA设计具有特异性的SiRNA,经脂质体转染A2780/DDP,采用RT-PCR和免疫印迹法检测转染组cdc2基因表达是否抑制.用MTT法测定A2780/DDP细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变.结果 构建cdc2-SiRNA表达载体能够有效抑制A2780/DDP中cdc2基因的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).RNAi沉默cdc2基因可抑制A2780/DDP细胞增殖,促进细胞凋亡,G2 /M期细胞比例明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过RNAi抑制cdc2基因的表达,可抑制A2780/DDP细胞增殖,促进A2780/DDP细胞凋亡,为研究卵巢癌顺铂耐药逆转奠定一定基础.
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IL-18、ICE在人卵巢癌组织中的表达
目的:分析卵巢癌组织中白细胞介素18(IL-18)及白细胞介素1β转化酶(ICE)的基因及蛋白表达水平,探讨其与卵巢癌临床特性之间的关系.方法:分别采用RT-PCR及免疫组化染色法检测正常卵巢(n=10)、卵巢良性肿瘤(n=6)、卵巢癌(n=32)组织中IL-18、ICE的mRNA及蛋白表达;分析卵巢癌不同病理类型、临床分期及发病年龄患者之间表达是否具有差异.结果:①正常、良性肿瘤及卵巢癌组织中均有IL-18 mRNA表达(分别为1.30±0.48、1.02±0.17、0.77±0.35);ICE mRNA在正常及良性肿瘤组织中均有表达,卵巢癌组织中有29例(90.63%)表达(分别为0.96±0.51、0.73±0.34、0.63±0.34).②IL-18及ICE蛋白均表达于卵巢上皮细胞浆内.正常、良性肿瘤及卵巢癌组织的IL-18阳性表达率分别为83.3%、80.0%和31.3%;ICE阳性表达率分别为80.0%、50.0%和37.5%.③卵巢癌组织中IL-18、ICE mRNA及蛋白表达均较正常及良性肿瘤组织明显减少(均P＜0.05),良性与正常组织之间相比差异均无显著性(均P＞0.05).卵巢癌组织中IL-18与ICE的mRNA、蛋白表达之间呈显著正相关(分别为r=0.37,P=0.036;r=0.45,P=0.009).④IL-18、ICE mRNA及蛋白表达在不同病理类型、临床分期及发病年龄患者之间均未见显著性差异(均P＞0.05).结论:卵巢癌患者局部癌组织IL-18、ICE表达减弱,可能与卵巢癌的发生发展有着一定的关系.
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S1通过线粒体途径诱导人卵巢癌细胞凋亡
目的 探讨小分子化合物S1对人卵巢癌(SKOV3)细胞线粒体凋亡的影响.方法 通过倒置显微镜观察S1作用卵巢癌细胞的形态学改变;不同剂量S1作用8h,JC-1染色检测线粒体膜电势变化;Western印迹检测线粒体凋亡相关蛋白细胞色素(Cyto)c、Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比S1作用24h能明显诱导SKOV3凋亡;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞线粒体膜电势降低(P＜0.05,n=3);蛋白水平检测S1作用8h能明显抑制SKOV3细胞Bcl-2蛋白表达,胞浆Cyto c和Bax蛋白表达增高(P＜0.05,n=3).结论 S1可能通过抑制Bcl-2蛋白诱导人卵巢癌细胞线粒体凋亡.
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人参皂苷Rh3对人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制作用研究
目的 研究人参皂苷Rh3对人卵巢癌细胞的抑制作用.方法 将不同浓度的人参皂苷Rh3作用到人卵巢癌细胞SKOV-3上,24h后采用CCK8检测细胞存活状况;将终浓度100 μg/mL的人参皂苷Rh3作用到人卵巢癌细胞SKOV-3,经不同作用时间后采用CCK8检测细胞存活状况;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色和原位末端标记(TUNEL)染色检测细胞死亡途径.结果 人参皂苷Rh3对人卵巢癌细胞SKOV3有显著的抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的升高,作用时间延长而增加,当人参皂苷Rh3药物作用终浓度为100 μg/mL,作用时间为8h时药物的作用能力到达顶峰;AO/EB染色和TUNEL染色结果显示实验组细胞呈染色阳性.结论 人参皂苷Rh3对人卵巢癌细胞SKOV-3有抑制作用,而且是通过诱导细胞凋亡达到的.
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PUMA介导大蒜素诱导人卵巢癌耐顺铂SKOV-3/DDP细胞凋亡
目的 探讨p53上调凋亡调控因子(PUMA)在大蒜素诱导人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)细胞凋亡中的作用.方法 将SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:正常对照组、大蒜素组(于培养基中加入终质量浓度为20 μg/mL大蒜素作用细胞48 h)、顺铂组(5μg/mL)、大蒜素+顺铂组.MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western-blot检测PUMA、bax及bcl-2的基因表达.结果 与对照组比较,大蒜素组SKOV-3/DDP细胞凋亡率有明显的增加(P＜0.05),且作用呈剂量依赖性,PUMA,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05);与大蒜素组比较,顺铂+大蒜素组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P＜0.05),Bax表达上调及Bcl-2表达下调的程度大于单用组(P＜0.05);用特异性SiRNA沉默PUMA后,大蒜素组细胞凋亡率呈显著性下降(P＜0.05).结论 PUMA在介导大蒜素诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡中发挥了关键性作用.
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bcl-xs基因对卵巢癌的作用及其凋亡机制的研究
目的: 研究重组腺病毒bcl-xs基因(adv-bcl-xs)对卵巢癌细胞及其裸鼠移植腹水瘤的生长抑制作用和荷瘤裸鼠生存率的影响,同时探讨bcl-xs基因对于卵巢癌的作用机制.方法: 采用扩增后的adv-bcl-xs感染卵巢癌细胞NUTU-19,观察对NUTU-19细胞的生长抑制作用并检测其病毒滴度,再将adv-bcl-xs导入人卵巢癌裸鼠移植腹水肿瘤,观察对腹水的生长抑制作用,计算裸鼠荷瘤生存时间,免疫细胞化学染色测定bcl-xs 基因表达情况.终末脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)计数凋亡细胞检测肿瘤细胞凋亡情况. 结果: adv-bcl-xs对NUTU-19有抑制和杀伤作用.在NUTU-19细胞和裸鼠体内过度表达,使裸鼠腹水形成时间和荷瘤裸鼠平均生存时间延长,有统计学意义.在NUTU-19细胞和裸鼠卵巢癌移植腹水肿瘤细胞中检测到凋亡细胞.结论: adv-bcl-xs对卵巢癌细胞有抑制作用,而且可能是通过凋亡机制发挥的.
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两种人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的比较研究
目的 比较两种人卵巢癌裸鼠移植瘤模型.方法 将1例人卵巢癌组织移植裸鼠,建立人卵巢癌裸鼠原代移植实体瘤模型的基础上,传代第十五代实体瘤细胞和人卵巢癌SKOV3细胞分别皮下移植裸鼠.观察两种人卵巢癌裸鼠肿瘤生长速度、存活时间、组织病理学检查、染色体.结果 实体瘤细胞皮下移植瘤生长速度高于SKOV3细胞皮下移植瘤(P＜0.05).实体瘤细胞皮下移植瘤裸鼠可存活30～58 d;SKOV3细胞皮下移植瘤裸鼠存活96～158 d.病理检查:肉眼观察实体瘤瘤细胞皮下移植瘤:瘤为实体,血性少量腹水,有肝、脾转移;SKOV3细胞皮下移植瘤呈囊形,肿瘤长大后可出现破溃,坏死、脱落,未见腹水及肝、脾转移.组织病理显微镜观察均呈乳头状生长,癌细胞生长活跃,细胞核大小不规则,核分裂多见与人癌组织一致.实体瘤细胞皮下移植瘤染色体多为亚二倍体和多倍体;SKOV3细胞皮下移植瘤多为三倍体或四倍体.结论 实体瘤细胞与SKOV3细胞皮下移植瘤有区别,实体瘤模型与人卵巢癌更为一致,并向肝、脾转移.
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基于甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物水凝胶三维培养卵巢癌细胞的研究
目的:验证卵巢癌SKOV-3细胞在自制甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物水凝胶中培养形成的3D模型.方法:通过SKOV-3细胞生长曲线、迁移和侵袭能力、耐药实验等,对比自制的水凝胶培养基与市售BME胶和胶原蛋白胶Ⅰ胶培养基对SKOV-3细胞若干特性的影响.结果:SKOV-3细胞在自制水凝胶TZ028和TZ029培养基第10～ 15天时,为3D细胞培养佳时期;在Transwell实验中表现出与胶原蛋白Ⅰ胶相似的细胞侵袭力,并优于BME培养基;在紫杉醇耐药实验中形成细胞3D结构耐药性要高于2D细胞培养(P＜0.05);与BME和胶原蛋白Ⅰ胶培养基相比,该细胞对相同浓度下紫杉醇耐药性差异无统计学意义(P＞0.05).结论:自制的甲基乙烯基醚/马来酸共聚物和交联剂聚乙二醇交联反应形成的3D培养基质水凝胶,与商品化BME胶和胶原蛋白胶Ⅰ胶培养基相比,具有类似的细胞培养功能.
关键词： 三维培养 人卵巢癌 甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物水凝胶 化疗耐药 -
内皮素-1活化ROCK/SLUG诱导人卵巢癌细胞发生上皮向间充质转分化
目的 研究ROCK/SLUG信号通路在内皮素-1(endothelin-1,ET-1)促进人卵巢癌细胞上皮向间充质转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 ET-1处理人卵巢癌细胞株SK-OV-3和CaOV3,或共用ROCK的活化突变体转染细胞或加入ROCK的抑制剂Y27632,并转染含SLUG启动子的pGL3质粒与Renilla质粒.实验末用Boyden小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,细胞免疫荧光染色观察细胞形态,报告基因检测试剂盒检测SLUG启动子活性,用实时定量PCR和Western bot方法检测EMT相关基因的表达.结果 ET-1诱导SK-OV-3和CaOV3发生与EMT相一致的形态和基因变化,促进其细胞侵袭力;ET-1与内皮素A受体 (endothelin A receptor,ETAR)结合,促进转录因子SLUG的转录;ET-1促进ROCK及fibronectin的表达,同时转染ROCK的活化突变体,促进ET-1诱导的fibronectin表达以及细胞侵袭力的增加.相反,ROCK抑制剂Y27632抑制ET-1对fibronectin表达以及细胞侵袭力的促进作用;转染ROCK的活化突变体,上调SLUG基因转录启动子活性促进其转录,抑制E-cadherin的转录.相反,ROCK的抑制剂Y27632抑制SLUG基因启动子的活性.结论 ET-1通过活化ROCK/SLUG通路促进人卵巢癌细胞发生EMT.
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敲减EEF1D的人卵巢癌细胞的构建及其药物敏感性研究
目的 探讨 RNA 干扰真核生物翻译延长因子1δ (EEF1D)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响.方法 针对人EEF1D基因设计并筛选出下调基因表达效果佳的 siRNA,构建 shRNA 序列表达载体pLJM1-shRNA.通过慢病毒表达载体构建稳定转染pLJM1-shRNA-EEF1D的SKOV3、SKOV3/DDP 细胞株. RT-PCR 和Western blot检测稳定转染细胞株EEF1D基因的表达情况, MTT法测定PGPIPN、DDP、DDP/PGPIPN对稳定转染细胞株的增殖抑制率.结果 成功构建重组慢病毒载体 pLJM1-shRNA-EEF1D. RT-PCR 和 Western blot 法均证实在 SK-OV3、SKOV3/DDP细胞中成功敲减 EEF1D 的表达.此外, MTT结果显示,与对照组和非特异性转染组相比,DDP/PG-PIPN细胞的增殖均明显受到抑制,差异有统计学意义( P＜0.05).结论 通过敲减EEF1D基因表达可以明显增强人卵巢癌SKOV3/DDP细胞对DDP/PGPIPN的敏感性.
