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蛇毒复方制剂抗癌痛的药效评价
目的:观察蛇毒复方制剂冰茶栓对W256细胞诱导的骨癌痛大鼠痛阈及骨损伤的影响.方法:将SD大鼠分为假手术组、模型组、阳性药组及冰茶栓3个剂量组,除假手术组外,其余各组参照文献方法复制骨癌痛模型;造模d 15开始,假手术组和模型组给予空白栓,阳性药组给予颅痛定,冰茶栓3个剂量组分别给予冰茶栓101,50.5,25.25 mg·kg-1;于给药前后不同时间点采用热板法和足趾压痛法测量大鼠热痛阈与机械痛阈值的变化;末次给药后,对各组大鼠左侧后肢进行X线摄片并评分;骨组织病理学观察.结果:冰茶栓可明显升高W256细胞诱导的骨癌痛大鼠热痛阈及机械痛阚值,抑制W256细胞引起的骨损伤.结论:冰茶栓具有较明显的抗W256细胞诱导的骨癌痛作用.
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戒毒中药制剂临床及实验研究
本课题共有四种药物进入攻关计划,即浙江中医学院的神农戒毒栓(目前称冰茶栓)、河南中医药研究院的克毒胶囊、湖南中医学院的中药戒毒康(目前称安君宁微丸)、湖南科大学克瘾宁(目前称维尼康,WeiniCom).
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冰茶栓初步稳定性实验研究
冰奈栓是浙江中医学院肿瘤研究所王泽时和俞丽霞教授研制的中药戒毒制剂,主要由茶叶、桂枝和蛇毒组成,具有解毒止痛,调和阴阳的功效.临床主要用于戒断阿片毒瘾,减轻和消除成瘾患者的戒断症状.为控制其内在质量,笔者采用初步稳定性实验对其稳定性进行了研究.
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冰茶栓对吗啡依赖大鼠蓝斑Fos蛋白表达的影响
目的:研究冰茶栓对吗啡依赖大鼠蓝斑Fos蛋白表达的影响.方法:采用连续15dSC吗啡,建立大鼠吗啡依赖模型,分成3组:造模组、NS组和冰茶栓组.各组用纳洛酮促瘾后,取桥脑蓝斑切片,进行Fos蛋白免疫组化实验.结果:吗啡依赖大鼠经冰茶栓干预后,蓝斑Fos蛋白免疫反应活性明显低于造模组.结论:冰茶栓能抑制吗啡依赖大鼠戒断症状及蓝斑Fos蛋白的表达.
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应用均匀设计优化中药复方冰茶栓
目的:优化中药复方冰茶栓的组方.方法:采用均匀设计法,以痛阈提高百分率为考察指标,对冰茶栓中起主要镇痛作用的江浙蝮蛇毒、茶叶提取物、冰片的组成进行研究,以使处方得到进一步优化.结果:镇痛实验筛选优化所得的处方为蛇毒8mg,茶咖啡碱80mg,冰片56mg.结论:江浙蝮蛇毒是冰茶栓中起镇痛作用的关键药物,冰片和茶叶提取物起协同促进作用;同时证明,均匀设计法可行简便,有助于考察复方药物组成规律,从而充分发挥中药组方药效.
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蛇毒复方制剂对W256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠破骨细胞的影响
目的 观察冰茶栓(蝮蛇毒、冰片、茶叶、桂枝)对骨癌痛大鼠破骨细胞数量和活性的影响.方法 将40只雌性SD大鼠分为冰茶栓组、阳性药对照组、模型对照组及假手术组,采用骨髓腔注射W256癌细胞复制骨癌痛模型；自模型复制第13天开始,冰茶栓组给予冰茶栓101mg/kg；阳性药对照组给予伊班膦酸注射液20μg/kg,模型对照组和假手术组给予空白栓,末次给药后,取各组大鼠患肢骨组织采用TRAP染色法计数破骨细胞数量、透射电镜观察破骨细胞结构、免疫组化法观察骨保护素表达.结果 冰茶栓可明显降低W256细胞诱导的骨癌痛大鼠骨组织破骨细胞数量(P＜0.01)；诱导破骨细胞凋亡；明显上调骨组织骨保护素表达(P＜0.01).结论 冰茶栓可抑制骨癌痛大鼠骨组织破骨细胞的数量和活性.
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冰茶栓对骨癌痛大鼠外周血PGE2及TNF-α含量的影响
目的:观察冰茶栓对W256细胞诱导的骨癌痛大鼠外周血PGE2及TNF-α含量的影响,以探讨其抗骨癌痛的外周机制.方法:将SD雌性大鼠分成假手术组、模型组、给药组3组,除假手术组外,其余两组参照文献方法复制骨癌痛模型;造模第15天假手术和模型组给予空白栓,给药组给予冰茶栓202 mg/只;给药10 d后腹主动脉取血,放射免疫法(RIA)检测血浆PGE2的含量;酶联免疫法(ELISA)检测血清TNF-α的含量.结果:冰茶栓可明显降低模型大鼠外周血中PGE2含量(P＜0.05)和TNF-α的含量(P＜0.01).结论:冰茶栓抗骨癌痛作用的机制可能与其降低肿瘤组织分泌PGE2、TNF-α等细胞因子有关.
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冰茶栓对星形胶质细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响
目的:应用血清药理学观察冰茶栓(BCS)对体外培养星形胶质细胞(Astrocyte AST)增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法:原代培养SD乳鼠大脑皮层AST,将纯化后的细胞经免疫细胞化学鉴定后,随机分为药物组(高、中、低剂量)和对照组,加入相应血清共培养48 h后,MTT比色法观察AST的增殖情况,流式细胞仪检测AST的凋亡率和细胞周期的变化.结果:MTT结果显示,冰茶栓高、中剂量组较空白血清组细胞数量明显减少(P＜0.01,P＜0.05),低剂量组与空白血清组比较无显著差异;流式细胞仪检测结果显示,冰茶栓组细胞凋亡比例较对照组明显增加(P＜0.01);冰茶栓组G1期细胞比例较对照组明显提高(P＜0.01),S期和G2/M期细胞比例较对照组明显降低(P＜0.01).结论:冰茶栓对体外培养的星形胶质细胞增殖具有明显的抑制作用,并可诱导其凋亡,抑制其由G1期向S期和G2/M期的转化.
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福林-酚试剂法测定冰茶栓中微量蛋白质含量
目前,常用的蛋白质含量测定方法有凯氏定氮法(Kjedahl法),福林-酚试剂法(Lowry法),双缩脲法和紫外分光光度法[1].凯氏定氮法是测定蛋白质含量的经典方法,试样需用硫酸消化处理;双缩脲法操作简便,但灵敏度低,样品用量大,蛋白质测定范围是500μg～10000μg;紫外分光光度法虽然简便、快速,但当样品中含有280nm附近具有紫外吸收的杂质时,可产生较大的误差,使结果偏高,福林一酚试剂法的优点是操作简便,灵敏度高,蛋白质测定范围是25μg～250μg.
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冰茶栓含药血清诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡
[目的]观察冰茶栓含药血清对体外培养的胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用.[方法]通过血清药理学的方法制备冰茶栓含药血清.将冰茶栓含药血清与体外培养的人胃癌SGC-7901细胞共同培养48h后,应用光学显微镜观察细胞形态的变化:用DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的梯状条带;用流式细胞术检测凋亡峰(亚G1峰)来分析研究冰茶栓含药血清诱导的细胞凋亡.[结果]经过冰茶栓含药血清作用后,SGC-7901细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变;DNA琼脂糖凝胶电泳有特异性梯状条带出现;流式细胞仪检测出现凋亡峰,并显示凋亡率为27.44%,而空白血清组凋亡率仅为4.71%.[结论]冰茶栓含药血清可诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡,为冰茶栓临床抗胃癌治疗提供实验依据.
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"冻干江浙蛇毒"的致突变作用研究
目的:检测"冻干江浙蛇毒"的致突变性,以提供有关致突变的遗传毒性安全评价数据.方法:采用小数骨髓微核试验、微生物回复突变试验(Ames)、仓鼠肺成纤维细胞染色体畸变试验(CHL),研究"冻干江浙蛇毒"的致突变作用.结果:小鼠骨髓微核试验表明,"冻干江浙蛇毒"三个剂量组(1.0、0.5、0.25mg/kg腹腔注射)的微核出现率与阴性对照组(0.9%NaCl)比较无显著性(P＞0.05),与阳性对照组比较有显著性(P＜0.01);Ames试验表明,"冻干江浙蛇毒"采用5000、2500、1250、625和312.5ug/皿剂量时,在加和不加S9条件下,对TA97、TA98、TA100和TA102菌株回复突变菌落数结果为阴性;CHL试验也表明,"冻干江浙蛇毒"4.0、2.0、1.0和0.5ug/ml剂量对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)体外培养染色体无畸变作用.结论:"冻干江浙蛇毒"无致突变性,有良好的应用前景.
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中药栓剂中蛇毒蛋白的定性鉴别和含量测定
目的:研究中药栓剂冰茶栓戒毒制剂中江浙蝮蛇毒蛋白质HPLC定性鉴别Folin酚定量测定方法.方法:以乙醚溶解栓剂,并用水萃取,再经HPLC法对栓剂中蛇毒蛋白进行分离,比较江浙蝮蛇毒特征峰.BECKMAN 0CTYL色谱柱(75mm×4.6mm,3μm),流动相A为0.1%三氟醋酸水溶液,B为乙腈;A、B液以梯度淋洗,流速1ml·min-,检测波长280nm.将药栓提取液加入Folin酚试剂显色,比色测定蛋白质含量,检测波长620nm.结果:经分离测定的江浙蝮蛇蛋白呈现两个相邻的特征峰,不受基质等其它成分的干扰.F01in酚法测得蛇毒蛋白的回归方程为y=-3.22+638.52X(r=0.9993);线性范围为25～50μg·ml-1;平均回收率±RSD为96.98%±1.72%,精密度RSD为0.87%,复性RSD为0.35%,稳定性RSD为1.35%.结论:用HPLC方法定性鉴别,用Folin酚法定量测定冰茶栓中蛇毒蛋白含量方法可行,结果准确.
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冰茶栓对动物的脱毒药效学评价
目的:客观评价冰茶栓对阿片类药物成瘾动物的脱毒疗效.方法:按脱毒药效学实验方法,分别进行吗啡依赖性大鼠催促戒断治疗试验、自然戒断治疗试验和海洛因依赖性猴自然戒断治疗试验;按身体依赖性试验方法,对冰茶栓的依赖性做大鼠催促戒断试验和大鼠自然戒断试验.结果:冰茶栓能有效控制吗啡依赖性大鼠催促戒断、自然戒断症状和海洛因依赖猴自然戒断症状,与可乐定相当,同时还能抑制上述动物戒断时的体重下降,而可乐定则无此效果;冰茶栓在大鼠模型上未出现身体依赖性指征.结论:冰茶栓对阿片类药物依赖性动物脱毒治疗有肯定疗效,本身也不产生身体依赖.
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冰茶栓含药血清对HEPG2细胞的增殖抑制作用
[目的]观察冰茶栓含药血清对体外培养的肝癌细胞HEPG2增殖的抑制作用.[方法]用不同冰茶栓剂量组的药物血清对体外培养的HEPG2细胞干预24h、48h,用MTT法来观察冰茶栓含药血清对HEPG2细胞增殖的抑制作用.[结果]冰茶栓含药血清对HEPG2细胞增殖具有一定的抑制作用.且这种作用呈时间、剂量依赖性,随着剂量的增加和时间的延长,抑制率增高.[结论]冰茶栓具有抑制肝癌细胞增殖的作用,为临床抗肝癌治疗提供实验依据.
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冰茶栓对骨癌痛大鼠脊髓GFAP及其mRNA表达的影响
目的 观察冰茶栓对W256细胞诱导的骨癌痛大鼠脊髓GFAP及其mRNA表达的影响,以探讨其抗骨癌痛的中枢机制.方法 将SD大鼠分成假手术组、模型组、给药组三组.给药组给予冰茶栓101mg·kg-1;给药10 d后截取脊髓组织,检测GFAP蛋白及mRNA表达.结果 给药组大鼠脊髓组织GFAP蛋白及其mRNA表达均较模型组显著降低(P<0.01;P<0.05).结论 冰茶栓抗骨癌痛作用的中枢机制可能与其抑制星形胶质细胞的激活有关.
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冰茶栓对骨癌痛大鼠不同脑区亮氨酸脑啡肽和β内腓肽含量的影响
目的 通过观察冰茶栓对骨癌痛大鼠不同脑区亮氨酸脑啡肽(leucine enkephalin,L-EK)和β内啡肽(β-endorphin,β-EP)含量的影响,探讨其抗骨癌痛的中枢作用机制.方法 取雌性SD大鼠30只,采用W256癌细胞骨髓腔注入术复制骨癌痛模型.术后7d选取26只骨癌痛大鼠随机分为冰茶栓组和模型组,每组13只,另取同期饲养的10只大鼠为正常对照组.术后15d开始连续10d给予冰茶栓101 mg/kg.分别于手术前后不同时点测量各组大鼠机械痛阈和热痛阈;未次给药后于冰盘取脑,采用放射免疫法检测各组大鼠大脑皮质、丘脑、海马区LEK和β-EP含量.结果 给药后5d和10 d,冰茶栓可显著提高骨癌痛大鼠的机械痛阈和热痛阈(P＜0.05,或P＜0.01).冰茶栓可明显提高骨癌痛大鼠丘脑区L-EK、伊EP含量及海马区L-EK含量(P＜0.05,或P＜0.01).结论 冰茶栓对W256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠具有明显镇痛作用,其抗骨癌痛作用的中枢机制可能与其提高部分脑区的L-EK和β-EP有关,丘脑和海马可能是冰茶栓镇痛作用的靶部位.
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冰茶栓对骨癌痛大鼠骨溶解的影响
目的 观察冰茶栓对W256细胞诱导的骨癌痛大鼠骨溶解的影响.方法 将40只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、邦罗力组及冰茶栓组,采用骨髓腔注射W256癌细胞复制骨癌痛模型;模型复制第13天开始,假手术组和模型组给予空白栓,邦罗力组给予邦罗力20 μg/kg,冰茶栓组给予冰茶栓101 mg/kg.末次给药后,对各组大鼠患肢进行X线摄片并评分以观察骨溶解情况,采用苏木精-伊红染色观察骨组织病理学变化,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞数量.结果 冰茶栓可明显降低骨癌痛大鼠患肢X线评分(P<0.01),改善肿瘤引起的骨损伤,降低骨组织破骨细胞数量(P<0.01).结论 冰茶栓对W256细胞诱导的骨癌痛大鼠骨溶解具有较好的抑制作用.
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高效液相色谱法测定冰茶栓中的桂皮醛
目的:研究用HPLC法测定戒毒新药冰茶栓中桂皮醛含量.方法:样品经三氯甲烷溶解,用一定比列的甲醇稀释,用ODS-C18柱进行分离,用水和乙腈(30:70)作为流动相,紫外 270 nm 高效液相色谱法检测.结果:加标平均回收率为 96.9%～100.5%,变异系数(CV)为 0.35%,低检出限为 6.4 μg/L,低定量限为 64 μg/L,线性范围为 3.5～45 μg/ml,相关系数为0.9991.结论:方法简便,快速,重现性好,灵敏度高.
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高效液相色谱法测定冰茶栓中的咖啡因
目前,常用的咖啡因含量测定方法有紫外分光光度法[1]、高效液相色谱法[1-3]等.紫外分光光度法虽然简便、快速,但当样品中含有270nm附近具有紫外吸收的杂质时,可产生较大的误差,使结果偏高;用高效液相色谱法测定各种饮料中的咖啡因已有许多报道,但冰茶栓作为一种新药,测定其中的咖啡因还没有报道.
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高效液相色谱法测定冰茶栓中的桂皮醛
目的:采用HPLC检测法建立冰茶栓中桂皮醛的含量测定方法.方法:色谱柱:ODS-C18(5 μm,4.6 mm×150 mm)不锈钢柱,流动相A:水,流动相B:乙腈,A:B=30:70,流速:1 ml·min-1,检测波长270 nm,进样量20 μl.结果:该方法的样品回收率大于95%,系统精密度误差小于3%,方法精密度误差小于0.5%,且无基质等其他成分的干扰.结论:方法简便,准确,灵敏度高,可用于冰茶栓的含量测定和质量控制.
