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影响椎间盘退变生物化学改变的因素
椎间盘退卞的生物化学改变表现为:蛋白多糖含量减少,硫酸角质素与硫酸软骨素的比例增加,Ⅰ型型胶原增多,Ⅱ型胶原减少,水分减少等,这一变化严重影响了椎间盘的生物力学特性,由此构成了椎间盘突出的病理基础.近年来,随着分子生物学、分子免疫学等医学基础学科的迅速发展,椎间盘退变生物化学改变及其影响因素等方面的研究取得了一些进展,现在综述如下:
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椎间盘退变机理的研究进展
椎间盘是由多种结缔组织构成的高度特异性结构,这些成分有序合理的组织是椎间盘行使正常功能的基本要求.在椎间盘的结构组成中,胶原和蛋白多糖两种大分子化合物起关键作用.随着年龄增加,椎间盘逐渐发生退行性变化,在退变椎间盘中,胶原类型发生很大变化,甚至完全转换[1];蛋白多糖含量下降,其中呈聚集状态的蛋白多糖下降尤为明显,非聚集状态蛋白多糖比例相对增加.另外,硫酸软骨素浓度下降,硫酸角质素浓度增加[2].因此,伴随年龄增大所引起的椎间盘老化或退变可能是基质合成和破坏之间不平衡所引起的.到底哪种成分在椎间盘退变中起主要作用还不清楚.从机体的生长与发育过程看,椎间盘退变是一与年龄相关的自然老化过程.在出生后不久,椎间盘的高度和直径快速增长以适应椎体生长的需要.椎间盘的结构和组成必然先于其形态学的变化,这些变化出现在退变之前,同时也构成了成熟的基础.从生物化学角度上讲,与年龄相关的椎间盘退变开始于出生后不久.每一个人的每一个椎间盘在其自然生长过程中都要经历过程相似的变化,只不过程度及早晚不同而已.
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HPLC法测定硫酸软骨素含量
硫酸软骨素为动物的软骨骨腱、韧带、血管壁等软体组织经皂化并除去蛋白质后制得.本品对神经痛、关节痛、偏头痛及使用链霉素所引起的听觉障碍,有显著的临床效果.其主要成份硫酸软骨素,现行标准规定用紫外分光光度法测定其含量.实验中发现,因该法需水解、显色,实验时间长,过程复杂,结果不够理想,故研究用高效液相色谱法测定其含量,实验结果表明,本法更能准确反映硫酸软骨素含量,具有快速、简便、重现性好等特点.
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北极海参硫酸软骨素及其低分子量糖抗血栓活性研究
目的 对北极海参硫酸软骨素(Holothuria mexicana)和低分子量糖的体内抗血栓活性和机制进行研究比较.方法 以海参硫酸软骨素(CS)和低分子量海参硫酸软骨素(LCS)为研究对象,使用电刺激颈动脉血栓模型,分析比较不同分子量海参硫酸软骨素对血栓形成时间、血栓烷(TXB2)、6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1α)、组织途径抑制因子(TFPI)、血友病因子(VWF)含量和凝血途径的影响.结果 海参硫酸软骨素和低分子量硫酸软骨素均有较强的抗血栓活性.在有效抗栓浓度下,海参硫酸软骨素和低分子量硫酸软骨素体内抗栓作用机理为:海参硫酸软骨素能够作用于内源凝血途径,并且通过抑制TXA2的生成和调控VWF含量下降来抑制血栓生成,但是其对外源凝血途径TFPI和PGI2无明显作用.同时,海参硫酸软骨素和低分子量硫酸软骨素的抗栓活性相比较得出,当硫酸软骨素分子量下降时,其抗血栓能力也会下降,但是其体内抗血栓作用机制不变.结论 北极海参硫酸软骨素及其低分子量糖具有较强的体内抗血栓活性.
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真鱿软骨硫酸软骨素的提取、鉴定及结构分析
目的 采用酶解提取法,从真鱿软骨中提取1种新型的硫酸软骨素,对其化学结构进行研究.方法 采用酶解法、氯化十六烷基吡啶(CPC)沉淀法从鱿鱼软骨中提取纯化硫酸软骨素,通过PMP柱前衍生液相色谱法、聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)、核磁共振波谱法(NMR)和液质联用分析(HPLC-MS),对硫酸软骨素的化学结构进行分析.结果 使用木瓜蛋白酶酶解鱿鱼软骨,乙酸缓冲液在料液比为1∶30(g/mL)条件下,硫酸软骨素的提取率高,蛋白质残留低,经过CPC纯化,得到了纯度高达99.5％的硫酸软骨素.由PAGE电泳可以看出其分子量很大且能够被硫酸软骨素ABC酶酶解.单糖分析表明,鱿鱼硫酸软骨素主要由乙酰氨基半乳糖、葡萄糖醛酸以及少量的葡萄糖组成.硫酸软骨素ABC酶将其水解为聚合度2-18的偶数糖,采用HPLC-MS分析,可以得到所有寡糖的全指纹谱图.结合1H-NMR分析可知,从真鱿软骨提取出来的硫酸软骨素主要含有6-单硫取代的硫酸软骨素C二糖单元和4,6-双硫取代硫酸软骨素E二糖单元,其所占比例分别为60.3％和39.7％,硫酸根含量为22.3％,是属于高硫的硫酸软骨素.结论 从真鱿软骨中提取出了具有高硫酸根含量的硫酸软骨素组分,可用于开发保健食品和海洋药物.
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岩藻糖基化海参硫酸软骨素抑制肿瘤血管新生作用的研究
目的从 美国肉参(Isostichopus badionotus)中分离纯化岩藻糖基化海参硫酸软骨素(sea cucumber chondroitin sulfate,SC-CHS),体外研究其对肿瘤诱导血管生成的抑制作用.方法 采用MTT法检测SCCHS对95D细胞增殖活性的影响；小管形成实验研究SC-CHS对脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成能力的抑制作用；采用鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管模型,研究其对血管生成的影响；通过RT-PCR和Western Blot法检测其对肿瘤诱导血管生成相关因子缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,Hif-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA和蛋白的表达.结果 结果显示SC-CHS能显著抑制95D细胞的增殖,能抑制HUVEC的小管形成作用和CAM血管新生.RT-PCR和Western Blot检测结果表明,高剂量SC-CHS能显著降低95D细胞中Hif-1α和VEGF mRNA的表达,减少VEGF蛋白的合成.结论 SC-CHS体外能显著抑制肿瘤血管生成,这可能是通过影响肿瘤细胞中VEGF的合成发挥作用.
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硫酸软骨素对慢性酒精损伤大鼠抗氧化作用研究
目的 观察硫酸软骨素(CS)对慢性酒精损伤大鼠的抗氧化作用,并探讨其可能的发生机制.方法 对雄性Wistar大鼠分别进行酒精和药物(纳洛酮和不同剂量的硫酸软骨素)处理,观察大鼠肝组织病理变化及GSH-Px,SOD,MDA等肝脏指标.利用统计学分析方法分析药物的抗氧化性能.结果 酒精模型组大鼠肝细胞脂肪变性明显,多灶性肝细胞嗜酸性变,灶性坏死,肝细胞排列紊乱,同时血清及肝组织GSH-Px和SOD活性均明显降低,MDA含量则明显升高.从肝结构病理学观察,硫酸软骨素各剂量组,肝组织结构均得到不同程度的改善,同时硫酸软骨素各剂量组大鼠血清及肝组织GSH-Px和SOD活性,与酒精模型组比较均有不同程度的提高,而MDA含量均明显降低.结论 硫酸软骨素对慢性酒精损伤大鼠机体氧化损伤具有一定的保护作用,其抗氧化功能可能通过增强大鼠体内抗氧化酶活性,改善肝组织病理损伤来实现.
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不同性质海洋硫酸多糖的制备及其改善大鼠脂肪肝作用的比较研究
目的 探索了不同来源、不同分子量的海洋硫酸多糖对脂肪肝大鼠脂肪代谢的调节作用.方法 SD大鼠随机分为7组,正常对照组、脂肪肝模型对照组、0.1%低分子量海参岩藻聚糖硫酸酯组、0.1%海参岩藻聚糖硫酸酯组、0.2%海参岩藻聚糖硫酸酯组、0.2%海藻岩藻聚糖硫酸酯组、0.2%海参硫酸软骨素组,每组6只.饲料中添加1%乳清酸建立大鼠脂肪肝模型,不同性质海洋硫酸多糖按所给剂量添加于饲料中,连续喂养14 d.称量大鼠体重、肝脏、肾脏以及内脏脂肪重量;分别测定大鼠肝脏TC、TG含量.结果 结果显示,各种硫酸多糖不影响大鼠正常生长且均可显著降低肝脏TC水平(P＜O.01),海藻岩藻聚糖硫酸酯和低分子量海参岩藻聚糖硫酸酯可显著降低肝脏TG水平(P＜0.05).结论 海洋硫酸多糖对脂肪肝具有预防和改善效果,在膳食调节脂质代谢方面有较大的应用价值.
关键词： 低分子量岩藻聚糖硫酸酯 硫酸软骨素 海参多糖 脂肪肝 -
AHMT分光光度法测定软骨鱼类硫酸软骨素
建立一种测定硫酸软骨素(ChS)的新方法.本方法利用4-氨基-3-肼基-5-巯基-1,2,4,-三唑(AH-MT)与硫酸软骨素反应生成紫色的衍生物,即6-巯基-3-均三唑并[4,3-b]对称四嗪,在540nm波长处测定硫酸软骨素,浓度在0.1～1.0g·L-1范围内符合朗伯比耳定律,该方法简单、快速,灵敏度高.
关键词： 硫酸软骨素 分光光度法 4-氨基-3-肼基-5-巯基-1 2 4-三唑 -
孔鳐硫酸软骨素的制备
采用增大碱浓度、复合酶水解及乙醇沉淀的方法提取制备孔鳐硫酸软骨素,并进行工艺条件的探讨,得到硫酸软骨素为白色粉末,其纯度达93.6%,收率为2.82%.
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硫酸软骨素及其衍生物的研究进展
综述近年来硫酸软骨素及其衍生物的研究进展,主要包括制备、药理作用及临床应用等.
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一种新型的大鼠血浆中硫酸软骨素含量测定方法
目的：建立血液中硫酸软骨素含量测定的新方法。方法采用链霉蛋白酶 E 和水饱和酚处理血浆，然后采用改良的1，9-二甲基亚甲基蓝法测定血浆中硫酸软骨素的含量。结果在0~10μg/ ml 的范围内具有良好的线性关系，回归方程为 y =0.014x +0.245，R2=0.998。该方法的日内精密度和日间精密度的 RSD 均小于4%，回收率在102.0%~105.0%之间，CS 提取回收率在80%以上（n =5）。结论所建方法成本低、快速、简便、灵敏，适用于血液中硫酸软骨素的含量测定。
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硫酸软骨素对Lewis肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响
目的 观察硫酸软骨素(CS)对Lewis肺癌细胞(LLC)增殖及侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法 常规方法培养LLC,并给予含不同剂量CS的培养液培养LLC.采用MTT法检测CS对LLC增殖的影响,流式细胞术PI染色法检测CS对LLC细胞周期的影响,Transwell侵袭实验检测CS对LLC侵袭能力的影响.结果 与对照组比较,CS组A值随CS浓度增加而降低(P均＜0.05)；与对照组比较,9、30 mg/mL CS组S期升高(P均＜0.05)；与对照组比较,9、30 mg/mL CS组LLC穿膜细胞数降低(P均＜0.05).结论 CS对Lewis小鼠肺癌细胞具有抑制增殖和侵袭的作用,其机制可能与抑制细胞分裂周期有关.
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自制硫酸软骨素膜剂治疗口腔溃疡
近年来,我们采用自制硫酸软骨素膜剂治疗口腔溃疡患者82例,疗效满意.现报告如下.临床资料:本文161例口腔溃疡患者随机分为两组,治疗组82例(男34例、女48例,年龄19～58岁);对照组79例(男35例、女44例,年龄17～57岁).
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硫酸软骨素辅助治疗急性脑梗死15例疗效观察
近1α来,我们在常规治疗脑梗死基础上,加用硫酸软骨素辅助治疗,取得较好疗效.现报告如下.临床资料:本文30例脑梗死患者,均符合全国第二届脑血管病专科会议制定的诊断标准,并经CT或MRI确诊.随机分为两组各15例.治疗组男8例,女7例;年龄58～75岁,平均61.20岁;轻型7例、中型5例、重型3例.对照组男9例,女6例;年龄56～78岁,平均61.80岁,轻型8例、中型5例、重型2例.两组病情、神经系统缺损程度无明显差异.
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硫酸软骨素和氨基葡萄糖联合制剂的毒理学试验
目的 观察硫酸软骨素片毒性.方法 大耐受量试验(MTD),遗传毒性试验(Ames、骨髓细胞微核及精子畸变试验),30 d喂养试验.结果 硫酸软骨素片MTD＞ 10.0 g/kg BW.Ames试验、小鼠精子畸变及骨髓细胞微核试验结果为阴性.30 d喂养试验中雌性和雄性大鼠的高剂量组为6.67 g/kg BW(即人体推荐剂量100倍)时各测定指标与对照组比较无显著性差异.结论 本试验条件下,硫酸软骨素片未见明显毒性.
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鱿鱼软骨粗多糖提取方法的研究
目的 对鱿鱼加工过程中产生的大量下脚料进行深加工,不仅能减少浪费和对环境的污染,还能提高其附加值.方法 以鱿鱼加工的软骨下脚料为原料去除外部组织,将得到的鱿鱼软骨粉碎,加入4倍体积0.02 mol/L Tris/HCl(pH值为8.5),1％ (m/m)胰蛋白酶,经过24 h酶解、调节pH值为6.6等电点沉淀蛋白质,采用生物膜分离除蛋白得到软骨多糖粗品.结果 软骨多糖得率为2.72％(湿基),总糖含量为75.52％,糖醛酸含量为27.62％,硫酸基含量为23.08％,进一步采用高效液相色谱分析单糖组成,发现含有相同比例的葡萄糖醛酸和氨基半乳糖.其酸碱度和干燥失重的指标达到《中国药典》要求.结论 综合考虑各指标,本文采用的鱿鱼软骨多糖的提取方法较为理想.
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氨糖软骨素胶囊对小鼠免疫增强作用的研究
目的:研究氨糖软骨素胶囊对小鼠免疫功能的影响.方法:采用清洁级KM小鼠,每剂量组12只,分别经口给予0.27、0.53和1.60 g/kg·bw 3个剂量的氨糖软骨素胶囊,以蒸馏水为对照组,通过淋巴细胞转化试验、小鼠迟发型变态反应试验、血清溶血素测定、抗体生成细胞检测、小鼠碳廓清试验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及NK细胞活性测定来评价其对小鼠的免疫增强作用.结果:各剂量组对淋巴器官脏体指数没有影响;3个剂量组均能增强小鼠迟发型变态反应强度,提高溶血空斑数,中、高剂量组能提高小鼠血清溶血素及NK细胞活性,高剂量组能促进淋巴细胞增殖,低、高剂量组能加速小鼠单核-巨噬细胞碳粒廓清速率,低、中剂量组能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数.结论:氨糖软骨素胶囊能增强小鼠的免疫功能.
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硫酸软骨素的方法测定
硫酸软骨素由粘多糖分子链组成,属葡萄糖胺聚糖,富含硫元素,与葡萄糖胺有关系,是软骨的主要成分,构成软骨的结构,吸收和保持软骨的水分,提供软骨营养物质.
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亲水作用色谱法同时测定保健品中的硫酸软骨素和氨基葡萄糖
目的 建立亲水作用色谱结合PDA检测器同时测定保健品中硫酸软骨素和氨基葡萄糖的高效液相色谱法.方法 采用Waters Xbridge HILIC色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),以乙腈-10 mmol/L乙酸铵(95∶5,V/V)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为35℃,检测波长为192 nm,进样体积为5μl.结果 在上述色谱条件下,硫酸软骨素和氨基葡萄糖在10 μg/ml～ 200 μg/ml内线性关系良好,硫酸软骨素和氨基葡萄糖的检出限均为3.0 μg/ml,回收率分别为94.18％、93.45％.混合溶液在48 h内稳定.结论 本方法经方法学检验,灵敏度和专属性高,稳定可靠,适用于同时测定保健品中的硫酸软骨素和氨基葡萄糖.
