首页 > 文献资料
-
重组腺相关病毒介导抑癌基因联合诱导人肝癌细胞系凋亡与生长抑制研究
目的观察腺相关病毒介导的抑癌基因p53,p16和p21联合治疗肝癌的可能性和效果.方法用携带人野生型p53,p16和p21的腺相关病毒分别或联合转导人肝癌细胞系HLE,HepG2,QGY-7701,QGY-7703,BEL-7402,SMMC-7721,通过体外及裸鼠体内实验研究转基因的表达及对癌的促凋亡和生长抑制作用.结果腺相关病毒介导的p53,p16及p21对人肝细胞肝癌细胞系均有明显的促凋亡作用,体外凋亡率约30%左右,体内生长抑制率30%～44%;联合感染肝癌细胞效果更明显,体外凋亡率达56%,体内癌生长抑制率65%.结论腺相关病毒介导的外源抑癌基因p53,p16和p21不仅对多种肝癌细胞系均有诱导凋亡和抑制生长作用,联合应用治疗肝癌更具有明显的相互协同作用.进一步提高病毒滴度和纯度是腺相关病毒作为载体进行基因治疗的目标.
-
PTEN-反义AKT2联合基因治疗胶质瘤的体内外实验研究
目的 研究PTEN-反义AKT2的联合基因治疗在动物体内、体外抑制脑胶质瘤生长的效果.方法 将大鼠C6胶质瘤细胞进行PTEN-反义AKT2的共转染,进行了原位杂交等体外实验研究,并进行了大鼠的体内实验研究.结果 PTEN与反义AKT2共转染在体外可以产生比较明显的协同作用,在体内实验中,对照组和空载组大鼠均于3周内死亡;转染组8只大鼠和治疗组7只大鼠观察60d内无自然死亡.结论 PTEN-反义AKT2联合基因治疗可以产生明显的协同作用,与单一治疗效果相比抑瘤作用明显增强,可以作为联合基因治疗的候选基因组合.
-
wt-p53基因联合HSV-TK/GCV对C6鼠胶质瘤杀伤作用的实验研究
目的研究wt-p53基因联合自杀基因治疗恶性胶质瘤的可行性.方法体外试验以腺病毒为载体转导wt-p53和HSV-TK入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的GCV,以MTT法检测细胞生存率.体内实验以C6鼠胶质瘤细胞和SD大鼠建立动物模型,原位注射腺病毒为载体的wt-p53和HSV-TK基因,腹腔给以GCV(15mg.kg-1day-1×14).观察荷瘤鼠生存期;强化MRI动态监测荷瘤鼠肿瘤大小;TUNEL法检测凋亡.结果wt-p53基因明显提高鼠胶质瘤细胞对HSV-TK/GCV的敏感性,p53联合HSV-TK基因转染C6的GCV ID100=0.01μg.ml-1,而单独HSV-TK转染C6的GCVID100=1μg.ml-1,约提高100倍;p53基因还可使C6细胞凋亡增加.体内p53基因联合HSV-TK/GCV治疗使荷瘤鼠生存期明显延长,凋亡明显增加(P＜0.001);强化MRI示4周肿瘤消失.结论p53基因和HSV-TK基因的联合基因治疗可作为临床上优化自杀基因治疗方案的一种可能选择.
关键词： 胶质瘤 wt-p53 HSV-TK/GCV 自杀基因治疗 联合基因治疗 -
眼科疾病联合基因治疗的研究现状
联合基因治疗是当前多基因遗传性疾病治疗研究的热门策略,正逐渐形成一套较完整的技术理论体系.在单基因治疗研究的基础上选择一些有协同作用的基因联合治疗,取得更好疗效.在眼科,联合基因治疗遗传性视网膜色素变性、眼部新生血管性疾病、青光眼等已得到初步研究结果.本文综述了联合基因治疗的概念、优势、构建联合基因的方法、基因载体的选用以及相关实验操作,以及现阶段国内外的研究现状.
-
电离辐射对卵巢癌细胞SKOV3中Beclin1基因的影响
自噬(autophagy)是指细胞通过溶酶体对自身结构的吞噬降解,实现细胞的代谢需要和某些细胞器的更新.当自噬调控机制发生异常时,将导致细胞功能改变,甚至引起细胞死亡,即自噬性细胞死亡[1-3].Beclin 1又称BECN1,是早被发现的哺乳动物调控自噬性死亡的基因,与酵母自噬基因ATG6同源,位于人染色体17q21上,编码一个含有450个氨基酸、相对分子质量为60×103的蛋白质[4].Beclin 1是自噬调节通路中重要的自噬调节基因,是一种双等位抑癌基因,与传统的抑癌基因不同,只有在双等位基因都表达时才能够发挥抑癌作用,其杂合性缺失可明显导致肿瘤的发生[5].有研究表明,Beclin 1在人类散发性前列腺癌中下降40％,在乳腺癌中下降50％,在卵巢癌中下降达到了75％[6].本实验中,通过基因工程的方式构建Beclin 1基因的过表达模型和干扰模型,在基因水平改变Beclin 1的表达,通过检测电离辐射后Beclin 1的表达变化,探讨其在自噬中的作用,从而为辐射联合基因治疗提供理论依据.
-
鼻咽癌联合基因治疗的体外研究
目的:探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT),癌基因蛋白(C-myc),存活素(Survivin),血管内皮生长因子(WGF)基因对人类鼻咽癌细胞生长的影响,以及同时编码四个基因的短发夹重组质粒对人鼻咽癌细胞生长抑制作用及机制.方法:利用基因重组技术构建一个同时靶向作用四个基因的短发夹双链RNA(shRNA)真核表达载体和靶向单独作用hTERTmRNA的shRNA真核表达载体,脂质体法转染人CNE-2Z细胞；试验分组:空白对照组BC组(不进行干扰),阴性对照组NC组(加入阴性质粒),A组(hTERT单基因质粒组),B组(多基因联合质粒组).激光共聚焦显微镜观察转染情况；MTT法检测细胞增殖活性；RT-PCR和Western blot法分别检测转染后细胞内各基因mRNA和蛋白表达情况.结果:MTT法检测,与BC相,NC组相比,A组和B组的细胞增殖活性均降低,与A组相比,B组的增殖活性降低更显著；RT-PCR,Western blot法,A组和B组mRNA和蛋白表达水平均降低,B组降低更显著.结论:四个基因共同参与了鼻咽癌细胞的发生和发展.多个基因的联合干扰与单基因干扰相比,能更高效下调各基因蛋白在鼻咽癌细胞的表达水平,更好抑制鼻咽癌细胞的增殖.
-
减毒沙门菌体内介导基因转移对ACC-M抑制的实验研究
目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒伤寒沙门菌对腺样囊性癌肺转移抑制作用.方法:4周龄BALB/Cnu nu雄鼠25只,随机分成5组,每组5只,其中对照组5只(PBS)、单纯减毒沙门菌组5只(SL7207)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-IFN)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30)、携带Tip30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30/IFN),均于尾静脉接种高转移腺样囊性癌(ACC-M)细胞.10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次.检测:裸鼠肺转移肿瘤细胞内IFN-γ、Tip30的表达、肿瘤生长体积、瘤体重量、带瘤存活期.结果:在治疗组裸鼠肺转移肿瘤细胞胞浆内有对应表达IFN-γ、Tip30;各治疗组均较对照组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;携带基因治疗组较SL7207治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;联合基因治疗组较单基因治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长.结论:减毒伤寒沙门菌不仅能作为载体介导基因对腺样囊性癌肺转移有抑制作用,而且自身对腺样囊性癌肺转移也有抑制作用.联合基因较单基因抑制效果好,有协同作用.
-
人端粒酶逆转录酶-双自杀基因对肝癌的靶向杀伤作用
目前联合基因治疗常用的是有单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD).同时,肿瘤的基因治疗要求导人的自杀基因表达严格限制于靶细胞(肿瘤细胞),而对正常细胞的生长无影响,因此寻找肿瘤细胞的靶点成为哌待解决的现实问题[1].端粒酶是维持端粒长度的一种逆转录酶,对细胞增殖、衰老及永生化和癌变起重要作用[2].在端粒酶的二三个亚单位中端粒酶逆转录酶(hTERT)是其活性的关键限速步骤,因而hTERT启动子将成为基因靶向表达的理想开关[2].已有研究证实CD、TK自杀基因治疗肿瘤已取得了初步成效[4,5],但是两者联合应用,尤其是在hTERT启动子特异调控下靶向抗肝癌,研究尚少.本研究旨在观察评价hTERT启动子驱动下的联合自杀基因体系对肝癌细胞靶向高效表达.
-
p53基因优化恶性胶质瘤HSV-TK/GCV治疗的体外研究
目的研究p53基因优化恶性胶质瘤自杀基因治疗效果的可行性.方法以腺病毒载体转导p53和HSV-TK入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的GCV,MTT法监测细胞生存率,TUNEL法检测凋亡.结果p53基因明显提高胶质瘤细胞对HSV-TK/GCV的敏感性,增加细胞凋亡.结论p53和HSV-TK的联合基因治疗有望成为一种较佳的优化自杀基因治疗方案.
关键词： 胶质瘤 P53 HSV-TK/GCV 联合基因治疗 体外实验 -
小发卡状RNA联合脱氧核酶抑制鼻咽癌细胞中EB病毒潜伏膜蛋白基因表达研究
目的:探讨小发卡状RNA单独及联合脱氧核酶对鼻咽癌细胞中EB病毒EBV潜伏膜蛋白1(LMP1)基因表达的抑制作用.方法:带绿色荧光报告基团的LMP1mRNA表达载体,小发卡状RNA及脱氧核酶按照阳性对照组、RNA干扰组、联合组和脱氧核酶组4组分别共转染HNE1细胞,观察分析计数细胞中绿色荧光表达情况,检测LMP1mRNA和蛋白表达水平.结果:联合组细胞绿色荧光OD值均数与RNA干扰组差异有统计学意义(P<0.01);联合组绿色荧光抑制率分别为86.31%和88.88%,比RNA干扰组抑制率75.15%高;EBV LMP1mRNA和蛋白水平检测提示联合组抑制效率较RNA干扰组高.结论:小发卡状RNA联合脱氧核酶能够提高抑制EBV-LMP1基因表达的效率.
-
Cx43基因提高自杀基因治疗恶性胶质瘤疗效的实验研究
目的 探讨连接蛋白43(Cx43)基因联合自杀基因提高恶性胶质瘤治疗疗效的可行性.方法 体外实验以脂质体介导Cx43和腺病毒介导HSV-tk基因转染入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的更昔洛韦(GCV),以MTT法检测细胞生存率.体内实验以C6鼠胶质瘤细胞和SD大鼠建立动物模型,原位注射Cx43和HSV-tk基因,腹腔给以GCV,观察荷瘤鼠生存期;强化MRI动态监测荷瘤鼠肿瘤大小;采用原位杂交方法检测Cx43和HSV-tk基因的表达;TUNEL法检测细胞凋亡. 结果 Cx43基因在体内、外均明显提高HSV-tk/GCV对胶质瘤的疗效.当tk基因转导的细胞约占50%时,Cx43基因联合HSV-tk基因转染C6的GCVID50和ID100均较单独HSV-tk转染的降低10倍.体内Cx43基因联合HSV-tk/GCV治疗使荷瘤鼠生存期显著延长(P＜0.001),凋亡明显增加,其中3只荷瘤鼠的强化MRI示肿瘤于8周消失.结论 Cx43基因和HSV-tk基因联合基因治疗可作为临床上胶质瘤联合基因治疗方案的一种优化组合.
关键词： 神经胶质瘤 连接蛋白43 HSV-TK/GCV 联合基因治疗 -
靶向蛋白激酶B1、环氧合酶2和磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基1 shRNA腺病毒表达载体的构建及其抗胃腺癌增殖作用的研究
-C-A-P转染组细胞贴壁生长能力明显减低,体内实验中肿瘤生长也明显减慢(P<0.01).结论 靶向COX-2,AKT1和PIK3R1的shRNA技术可以序列特异性地抑制SGC7901细胞的COX-2,AKT1和PIK3R1表达,在体内外对SGC7901细胞增殖产生明显抑制作用.
-
反义hTERT/PTEN联合基因治疗恶性胶质瘤的体内外研究
目的 探讨腺病毒介导的反义hTERT和野生型PTEN联合基因转染对恶性胶质瘤细胞生长的影响.方法 用细菌内高效同源重组系统构建的含有hTERT反义序列及野生型PTEN的腺病毒在体内外单独或联合转染恶性胶质瘤细胞系U251,检测肿瘤细胞生长情况、端粒酶活性、蛋白表达、细胞周期变化等.结果 在体外试验中单独或联合转染都能明显抑制肿瘤细胞的生长,以联合转染效果明显,转染后第6天联合转染组的细胞生存率为37.6%,端粒酶活性水平和hTERT蛋白表达水平明显下降,分别为28.8TPG、0.2106,PTEN蛋白表达水平上升为0.9630;在体内试验中肿瘤生长也明显减慢.结论 腺病毒介导的反义hTERT和野生型PTEN联合转染能明显抑制恶性胶质瘤细胞的生长.
-
FUS1和IL-12双基因真核共表达质粒的构建及对A549细胞促凋亡作用研究
目的 构建FUS1和人IL-12双基因真核共表达质粒并在肺癌A549细胞中检测基因表达及诱导细胞凋亡作用.方法 采用RT-PCR技术从人肺成纤维细胞MRC-5中逆转录扩增全长FUS1基因,通过PCR技术从pORF-hIL-12质粒中扩增含双亚基的全长IL-12基因.FUS1和IL-12分别经酶切后定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点中,酶切和测序鉴定双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12的构建.以pVITRO2-FUS1-IL-12转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR、ELISA 和Western blot方法 检测目的 基因的表达,以Hoechst33258染色及流式细胞术验证pVITRO2-FUS1-IL-12在体外的促凋亡作用.结果 酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达质粒 pVITRO2-FUS1-IL-12,在转染后的细胞中同时检测到了FUS1和IL-12的表达,两种基因在双基因表达载体上的表达量基本不受影响.双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12具有明显诱导肺癌细胞凋亡的作用.结论 成功构建pVITRO2-FUS1-IL-12双基因真核共表达质粒,为肺癌的多基因联合治疗提供了又一新的思路和方法.
-
腺病毒介导p21WAF-1联合GM-CSF基因对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用的研究
目的 探讨腺病毒介导p21WAF-1联合GM-CSF基因对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用.方法 将32只裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞移植瘤动物模型.成瘤后动物随机平均分为4组:对照组、p21WAF-1基因治疗组、GM-CSF基因治疗组、p21WAF-1+GM-CSF联合基因治疗组;分别由皮下瘤体内注射重组体腺病毒0.1 mL Ad-LacZ、Ad-p21、Ad-GM、Ad-p21+GM,每周1次,共3次,3个月后观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和动物存活情况以及肿瘤组织病理切片.结果 (1)联合基因治疗组动物的肿瘤生长受到明显抑制,与单独给予p21WAF-1和GM-CSF基因治疗动物相比,抑制作用显著提高(P＜0.05);(2)荷瘤小鼠生存期观察,与对照组相比,p21WAF-1基因组和GM-CSF基因组有所延长,联合基因治疗组显著延长(P＜0.01);(3)病理切片示各基因治疗组肿瘤组织均有出血、坏死和炎性细胞浸润,联合基因治疗组有片状坏死.结论 p21WAF-1和GM-CSF两种基因联合治疗胃癌,可以有效抑制肿瘤生长、延长生存期,为胃癌的治疗提供新的思路.
