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SMAD4泛素化调控介导TGF－β通路信号转导的研究进展
TGF－β超家族蛋白成员作为一种多效细胞信号分子普遍存在于各种基本生物进程当中，包括诱导胚胎胚芽层生长、维持成人组织体内稳态等［1］。与其多效性相对应的，TGF－β信号通路缺陷与癌症发生、组织纤维化、生长缺陷密切相关［2］。TGF－β配体与胞膜上的跨膜激酶受体复合体结合，导致R－SMAD的丝氨酸C端残基磷酸化，磷酸化后的R－SMADs与SMAD4结合转运至胞核，与转录因子特异性启动子相结合调节基因表达。因此，SMAD4作为TGF－β通路上的关键蛋白，对介导该通路的信号传导具有重要作用［3，4］。
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特异性溶瘤腺病毒治疗膀胱癌的研究进展
溶瘤腺病毒因能够杀伤膀胱癌细胞同时对正常组织几乎没有影响而受到人们的广泛关注，对其进行了多方面的研究，其中特异性启动子调控的溶瘤腺病毒是研究热点。人们通过插入单个或多个特异性启动子构建了治疗膀胱癌的组织特异性溶瘤腺病毒来提高其靶向性、特异性和安全性。现就特异性启动子调控溶瘤腺病毒治疗膀胱癌的原理、研究进展以及存在的问题等方面进行综述。
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肿瘤基因靶向治疗中的启动子研究
利用肿瘤特异性启动子调控治疗基因在肿瘤细胞中的表达,是实现肿瘤靶向性基因治疗以及提高转导效率的重 要手段和有效途径.肿瘤特异性启动子可耦联溶瘤基因、抑癌基因、自杀基因以及 siRNA/MicRNA 等,特异性调控这些 基因在肿瘤治疗中杀死或诱导癌细胞凋亡,或抑制其生长,而对正常细胞影响非常小,从而达到特异性治疗的目的.
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睾丸特异性启动子计算机识别方法研究
目的 研究应用生物信息学技术对小鼠睾丸特异启动子进行识别、预测.方法 分析睾丸特异性启动子序列和非睾丸特异性启动子序列,通过反式作用因子在两种序列中的对应密度比,确定识别特征,进行睾丸特异性启动子识别.结果 收集了24条睾丸特异性启动子序列,分析得到9个反式作用因子及其特征向量.结论 本方法对小鼠睾丸特异启动识别、预测具有较高的准确性.
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特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用
目的 构建晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)特异性启动子LEP503(lens epithelium gene product 503)调控的Lenti- LEP503 -HSV-tk-EGFP载体,观察慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙环鸟苷系统(herps simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的靶向性抑制作用.方法 用RT-PCR方法从HLEC基因组中克隆LEP503启动子序列,构建单纯LEP503启动子调控HSV-tk基因表达的慢病毒载体Lenti-LEP503 - HSV-tk-EGFP,同时构建广谱启动子巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)调控的HSV-tk载体Lenti- CMV-HSV-tk-EGFP.将特异性表达载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC和Hela细胞,用荧光显微镜观察荧光强度,用RT-PCR方法评估相关蛋白的组织特异性表达.将Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP和Lenti-CMV -HSV-tk-EGFP分别转入HLEC,通过荧光显微镜观察EGFP的袁达,用流式细胞仪及PT-PCR比较CMV与LEP503启动子介导下游靶基因HSV-tk的表达差异.结果 Lenti-LEP503-HSV -tk-EG FP能在HLEC中特异性表达,但Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的表达效率明显低干Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP.转染Lenti-LEPS03-HSV-tk-EGFP的HLEC在20mg· L-1 GCV作用48h后EGFP阳性细胞的形态发生明显变化；GCV作用24h后Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP转染HLEC较正常HLEC和Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP转染Hela细胞活性有明显抑制,且随时间的延长抑制效果逐渐增强.结论 LEP503启动子能介导HSV-tk基因在HLEC中特异表达,并介导HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性抑制 HLEC增殖,但该启动子表达效率较低,所介导的HSV-tk/G CV系统对HLECs增殖的抑制效率低于CMV启动子.
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前列腺特异性启动子在溶瘤腺病毒中的应用
前列腺癌是老年男性高发性肿瘤疾病.运用雄激素去势治疗早期可以有效的抑制肿瘤生长,但2～3年后大部分前列腺癌进展为去势抵抗性前列腺癌,导致患者死亡.去势抵抗性前列腺癌目前缺乏有效的治疗手段,溶瘤腺病毒是近年来肿瘤基因治疗的热点,也是前列腺癌治疗的新方法.运用特异性的启动子控制关键基因的表达是腺病毒改造的重要策略,能进一步提高抗肿瘤作用的特异性和人体的安全性.本研究对前列腺特异性启动子在溶瘤腺病毒中的应用进行综述.
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小干扰RNA靶向系统的研究进展
小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)是RNA干扰(RNA interference,RNAi)发挥效应的关键分子,可高效、特异地抑制靶基因的表达,实现转录后的基因沉默.RNAi现象的发现及其研究的不断发展,为探查基因功能和开展基因治疗带来了新的契机.目前,siRNA已被广泛应用于各种人类疾病的基因治疗研究,成为一种具有潜在临床应用价值的有力工具.但作为一种新兴技术,siRNA仍然面临许多问题,如稳定性不理想,在体内的分布和作用缺乏靶向性以及可能存在的脱靶效应等[1].如何实现siRNA在活体内的靶向作用是其在走向临床应用过程中遇到的主要瓶颈之一.本文就近年来有关siRNA靶向表达和靶向递送系统的研究中特异性启动子的应用、siRNA表达调控系统、化学修饰及靶向载体等方面的研究进展作一综述.
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TH和AADC基因在帕金森氏病模型大鼠纹状体内的共表达
帕金森氏病是临床常见的中枢神经系统退行性变疾病.对该病的治疗除多巴胺类药物之外,还有颅内移植能产生多巴胺类物质的自体或异体组织,但存在移植物存活困难及多巴胺表达水平等问题 .采用外源基因引入法治疗帕金森氏病是当今神经生物学研究热点之一.我们用6-羟多巴 (hydroxydopamine,6-OHDA)立体定位注射毁损大鼠黑质以建立帕金森氏病模型,再用Dr.Geller实验室构建的无辅助病毒的单纯疱疹病毒包装系统 (helper virus-free HSV-1 plasmid vectors )将在多巴胺产生过程中起重要作用的酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxy lase,TH)、芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic amino acid d ecarboxylase,AADC)的基因同时引入帕金森氏病模型大鼠纹状体内,并使用神经元特异性启动子以提高长期表达.对照组用PBS代替携基因的病毒载体.免疫组化结果显示:在基因引入后4天和28天,6-OHDA损伤模型大鼠纹状体内均查见TH和 AADC免疫反应阳性神经元.并且,多数大鼠的旋转行为得到了明显改善.结果提示,由 Helper virus-free HSV载体系统携带的外源基因进入纹状体的神经元并表达了TH和AADC酶活性.
