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结肠癌PIK3CA基因突变分析
近年来,结肠癌的发病在我国呈逐年上升趋势.研究发现,结肠癌为一个多因素、多步骤的发病过程,通常认为与饮食结构、结肠慢性炎症、结肠腺瘤以及遗传等因素紧密相关~([1]).
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单纯性巨指(趾)症PIK3CA基因突变位点研究
目的 研究单纯性巨指(趾)患者的PIK3CA基因突变位点.方法 前瞻性系统研究2017年5-8月在北京积水潭医院手外科就诊的12例单纯性巨指(趾)患者的临床资料.患者男性6例,女性6例,平均年龄4.5岁.手术中切除单纯性巨指(趾)患者的病变组织,采用改良的Sanger DNA测序方法来检测PIK3CA基因突变.对Sanger测序结果阴性的患者样本采用下一代测序(NGS).结果 12例患者中,9例经Sanger DNA测序检测到PIK3CA基因突变,突变水平在7％～27％.突变的位点包括p.His1047Arg、p.His1047Leu、p.Glu545Lys和p.Glu542Lys.NGS又发现1例携带p.Glu453Lys的患者.12例患者中,PIK3CA基因突变阳性者10例.在收集的病变组织检查中,脂肪组织中突变率高(9/9),其次是皮肤和神经组织(5/6).结论 PIK3CA基因突变率在单纯性巨指(趾)中极高.受累脂肪、神经及皮肤组织均为理想的基因检测组织来源.Sanger测序目标基因片段可经济适用地检测单纯性巨指(趾)基因突变.
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靶向PIK3CA候选miRNAs在胃癌细胞与血清中表达的分析
目的:预测和筛选靶向PIK3CA的候选miRNAs并检测其在胃癌细胞和血清中的表达.方法:采用生物信息学并结合既往文献和前期研究,预测和筛选出靶向PIK3CA的候选miRNAs(miR-203和miR-506).常规提取胃癌细胞和血清总RNA,并用DNase Ⅰ进行消化.以miRNAs特异性茎-环引物引导反转录,通过实时荧光定量PCR对miR-203、miR-506和内参U6进行检测,并采用琼脂糖凝胶电泳检测定量PCR产物.结果:电泳检测细胞和血清中RNA纯度较好；胃癌细胞和血清中miR-203、miR-506和内参U6均能实现特异性扩增.miR-203在胃癌细胞SGC-7901及MGC-803中表达分别为1.360±0.102和1.241±0.110,差异无统计学意义,t=3.125,P=0.09;miR-203在胃癌患者血清中表达为1.420±0.122,明显低于健康人的3.450--0.206,t=2.521,P=0.02.miR-506在胃癌细胞SGC-7901和MGC-803及胃癌患者和健康人血清中表达水平分别为1.256±0.113、1.158±0.109、1.735±0.220和1.592±0.134,差异无统计学意义,P＞0.05.结论:miR-203可能是调控PIK3CA基因的miRNAs之一.PIK3CA在胃癌中的高表达可能与miR-203的异常低表达有关,而与miR-506无关.胃癌患者血清中miR-203的表达有望成为预测胃癌发生或发展的一个重要的分子标志.
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原发小细胞肺癌中BRAF/KRAS以及PIK3CA突变的基因特征及临床特征
目的 在中国人群小细胞肺癌(SCLC)标本中检测BRAF/KRAS以及PIK3CA基因突变频率,分析这些基因突变的基因特征和临床特征.方法 2009-2014年共收集557例单纯SCLC患者组织样本.利用双脱氧测序法进行BRAF、KRAS、PIK3CA、NRAS、MEK1基因突变检测.χ2检验分析临床因素与基因突变的相关性,Kaplan-Meier法生存分析,Cox模型多因素预后分析.结果 在557例标本中检测到13例BRAF突变,突变类型包括V600E(n=5)、V600A(n=2)、V600M(n=1)、D594G(n=1)、G464E(n=1)、K601R(n=2)、S605N(n=1).6例KRAS突变,突变类型包括G12C(n=3)、G12A(n=1)、G12D(n=1)、G13D(n=1).4例PIK3CA突变,突变类型包括E545G(n=2)、H1047R(n=2).另外1例NRAS突变(Q61R)和1例MEK1突变(D61Y).这些突变基因与患者年龄、性别、吸烟状态、临床分期均无相关性.单因素生存分析结果显示基因突变组患者的生存时间比无此类突变者生存时间差,中位生存时间分别为(10.30±0.75)个月(95％CI为8.83～11.77个月)和(12.80±0.54)个月(95％CI为11.74～13.86)(P=0.011).结论 在单纯SCLC中存在小比例的BRAF/KRAS、PIK3CA基因突变群体,这些基因突变与患者的临床特征无明显统计学相关性,但单因素生存分析显示与患者生存预后呈负相关.
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PIK3CA基因突变与乳腺癌的关系
近年来女性乳腺癌的发病率明显上升,并趋于年轻化,尽管手术治疗和术后多种辅助治疗对患者的预后有明显的改善,但仍有较高的复发率和死亡率[1].
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CLOVES综合征
CLOVES综合征是一种以先天性脂肪瘤过度生长、血管畸形、表皮痣、脊柱侧弯/骨骼畸形或脊髓异常为主要临床表现的罕见的过度生长综合征，其病因为PIK3CA基因突变。治疗是一个长期复杂的过程，需多学科联合管理，目前主要是对症处理。随着分子诊断技术的发展，基因靶向治疗会成为一种可能。本病长期预后不明。
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miR-520a靶基因PIK3CA结合位点多态性与中国汉族人群大肠癌易感性的关联研究
背景与目的：越来越多的研究表明，微小RNA(microRNA，miRNA，miR)靶基因位点的多态性可能会影响miRNA的转录或生成能力，影响个体对肿瘤的易感性。本研究旨在探讨大肠癌患者miR-520a靶基因PIK3CA 3’端单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)位点rs141178472与中国汉族人群大肠癌易感性之间的关系。方法：选取386例大肠癌标本作为实验组，394名年龄及性别比例匹配的非肿瘤个体作为对照组。病例对照研究检测rs141178472的分布频率。统计分析大肠癌易感性与多态性之间的关系。结果：携有rs141178472 CC基因型或C等位基因显著增加了大肠癌的发病风险(CC vs TT，OR=1.716，95%CI：1.084~2.716， P=0.022；C vs T，OR=1.258，95%CI：1.021~1.551，P=0.033)。通过检测大肠癌患者外周血单个核细胞PIK3CA的表达发现，PIK3CA mRNA的表达与SNP基因型rs141178472具有关联性。结论：miR-520a与PIK3CA 3’UTR的SNP位点rs141178472相互作用可能与大肠癌易感性有关。
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PIK3CA基因拷贝数变异与肺鳞癌易感性相关性分析
目的 分析PIK3CA基因拷贝数变异与肺鳞癌易感性的相关性.方法 采用基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR法检测肺鳞癌患者(50例)以及健康人群(50例)PIK3CA基因Variation91720拷贝数的差异以及肺鳞癌患者癌及癌旁组织PIK3CA基因表达量的变化.结果 PIK3CA基因表达量与Variation91720拷贝数之间存在正相关关系(r=0.5917,P＜0.05).结论 PIK3CA基因Variation 91720高拷贝数与肺鳞癌易感性密切相关.
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乳腺癌中PIK3CA基因突变与HER2表达及其基因扩增的关系
目的 探讨乳腺癌中PIK3CA基因突变与HER2蛋白表达和基因扩增之间的关系.方法 收集134例乳腺癌组织,采用免疫组化EnVision两步法检测HER2蛋白表达,采用FISH法检测HER2基因扩增,运用突变富集液相芯片法检测PIK3CA基因第9、20号外显子的突变状况,分析PIK3CA基因突变与HER2蛋白表达和基因扩增之间的关系.结果 134例乳腺癌组织中,49例检测到PIK3CA基因突变,突变率为36.6%,其中第9号外显子突变者16例(32.7%),20号外显子突变者33例(67.3%),50例(37.3%)检测有HER2基因扩增.在50例HER2基因扩增的病例中12例有PIK3CA基因突变(24.0%),84例无HER2基因扩增的病例中37例有PIK3CA基因突变(44.0%).有HER2基因扩增的乳腺癌PIK3CA基因突变率较无HER2基因扩增的乳腺癌低,差异具有统计学意义(χ2=5.431,P=0.020).PIK3CA基因突变与HER2蛋白表达的关系受HER2阳性定义标准的影响,不具有确定性.分别按乳腺癌HER2检测指南(2006版)、乳腺癌HER2检测指南(2009版)及2012年WHO乳腺肿瘤分类标准对入组病例进行分组分析,其中按2006版标准,PIK3CA基因突变率在HER2蛋白表达组间无差异(χ2=2.751,P=0.253);按2009版标准,PIK3CA基因突变率在HER2蛋白表达3+与非3+组间有差异(χ2=5.478,P=0.019);按2012版标准,PIK3CA基因突变率在HER2阳性与阴性组间有差异(χ2=4.286,P=0.038).结论 PIK3CA基因突变率在FISH检测的HER2基因扩增阳性与阴性之间有差异,HER2基因扩增的乳腺癌PIK3CA基因突变率低,与HER2蛋白表达的关系与阳性判断标准有关.
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两种不同荧光标记的PIK3CA siRNA体外转染特性分析
目的 比较两种不同荧光标记的PIK3CA siRNA体外转染特性,筛选出转染效率高、抗淬灭能力强的PIK3CA siRNA.方法 利用脂质体Lipofectamine 2000转染两种荧光标记PIK3CA siRNA及阴性对照siRNA人胃癌细胞BGC-823,倒置荧光显微镜观察其荧光分布和淬灭情况,并通过Image J软件分析其转染效率.实时定量PCR检测不同荧光标记的PIK3CA siRNA对靶mRNA表达的影响.结果 相同转染条件下,两种荧光标记的PIK3CA siRNA转染效率及抗淬灭能力不同.Cy3或FAM标记的PIK3CA siRNA与阴性对照siRNA转染效率无明显差异,但Cy3标记的PIK3CA siRNA与阴性对照siRNA转染效率较FAM标记的明显升高(P＜0.05).Cy3标记的PIK3CA siRNA对靶mRNA的抑制作用明显高于FAM标记的PIK3CA siRNA(P＜0.05).结论 Cy3标记PIK3CA siRNA可以起到良好的示踪作用,为进一步构建Cy3标记PIK3CA siRNA纳米粒子提供了重要的实验依据.
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PIK3CA突变影响因素对鳞状细胞肺癌预后的影响
目的 探讨PIK3CA基因突变与鳞状细胞肺癌患者临床病理特征及预后的关系.方法 选取2013年2月-2016年2月于上海长海医院收治的鳞状细胞肺癌患者81例,同时选取癌旁组织(≥5 cm)作为对照组,检测样本PIK3CA突变情况,以及随访患者生存情况.结果 肺癌组织PIK3CA基因突变率高于癌旁组织(P<0.05);不同性别、年龄、分化程度、TNM期及有无淋巴结转移患者PIK3CA基因突变率比较差异无统计学意义(P>0.05);PIK3CA基因突变组患者中位生存期与PIK3CA基因未突变组比较差异有统计学意义(P<0.05);分化程度、TNM分期及PIK3CA基因突变是患者预后的影响因素(P<0.05).结论 鳞状细胞肺癌组织PIK3CA基因突变高于癌旁组织,但与病理特征无明显关系,PIK3CA基因突变患者预后较未突变者差.
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鼻咽癌组织中PIK3GA基因热点突变区的突变筛查
背景与目的:近期研究发现磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α基因(phosphatidylinositol 3-kinase catalytic alpha polypeptide gene,PIK3CA)在多种肿瘤中存在高频的体细胞突变,并且突变常发生在PIK3CA的第9外显子和20外显子两个热点突变区.对这两个热点突变的研究表明,这些突变能增强该酶的活性、有助于肿瘤细胞的侵袭、对抗凋亡等.因此提示PIK3CA基因是与多种肿瘤发生、发展相关的癌基因.本研究旨在检测鼻咽癌组织中PIK3CA两个热点突变区的突变,以及该基因的变异与鼻咽癌发病的关系.方法:在鼻咽癌组织及患者外周血中筛查PIK3CA的突变热点区第9外显子和第20外显子.对46例散发性鼻咽癌组织标本采用PCR产物克隆测序,对与之匹配的46例鼻咽癌患者外周血标本和3个鼻咽癌细胞系(CNE1,CNE2,SUNE1),则将PCR产物直接测序.结果:在46例鼻咽癌组织标本中在PIK3CA热点突变区第9号外显子检出2例突变(4.3%):1例为T1563G(521Asn→Lys);另1例为A1646G(549Asp→Gly).在46例鼻咽癌标本第9外显子中18例检出A1634C-G1658C-del 1659T"复合突变",进一步研究表明该"复合突变"可能为22号染色体上同源区域的序列.在对PIK3CA另外一个突变热点区第20外显子的检测中,46例鼻咽癌组织标本中都没检测到突变.另外,在3个鼻咽癌细胞系和46例鼻咽癌匹配外周血DNA标本用PCR-直接测序法均未检测到第9外显子和第20外显子突变.结论:PIK3CA基因第9外显子与第20外显子鼻咽癌中较少发生突变;克隆测序检测体细胞突变具有更高的敏感性,通过该方法在第9外显子发现的"复合突变"可能是22q11.2的Cat Eye Syndrome region高度同源区域的序列而非PIK3CA基因座的变异.
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PIK3CA基因在肝细胞癌的表达和突变
目的 检测PIK3CA基因在广西HCC里的表达和突变.方法 收集61例手术切除,并经病理证实的肝细胞癌的癌组织及其相应的癌旁组织.用PCR-SSCP法和DNA序列测序对PIK3CA基因的第1、9和20外显子进行检测.另外,用免疫组化SP法检测癌组织和相应癌旁组织里PIK3CA基因的表达.结果 PCR-SSCP法和DNA序列测序在肝癌和癌旁组织PIK3CA基因的第1、9和20外显子都没有发现PIK3CA基因点突变,但在25例癌组织第9外显子的序列峰图的末端发现有异常重叠的波峰.用免疫组化SP法检测发现50.81%癌组织里存在PIK3CA基因的高表达.结论 广西HCC可能存在PIK3CA基因突变,但点突变率较低.PIK3CA在广西肝细胞性肝癌的癌组织里存在表达,其在癌组织的表达水平可能与原发性肝癌发生有关.
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结直肠癌组织中PIK3CA基因突变与AKT1/2蛋白的表达及其意义
目的 探讨结直肠癌患者PIK3CA基因第9、20外显子点突变率及其与AKT1/2蛋白表达的关系.方法 用免疫组织化学En Vision法和SSCP-PCR(单链构象多态性聚合酶链反应)分别检测42例结直肠癌组织AKT1/2蛋白表达情况和PIK3CA基因第9、20外显子突变情况,并与20例健康体检者正常大肠黏膜作对照.结果 AKT1/2蛋白在PIK3CA基因突变组中比无突变对照组有更高表达(P＜0.05);AKT1/2蛋白在结直肠癌组织中表达显著高于正常结直肠黏膜(P＜0.05);AKT1/2蛋白表达与有无淋巴结转移、癌组织浸润程度、临床分期有关(P＜0.05);14.3%(6/42)的结直肠癌存在PIK3CA基因突变;PIK3CA基因在结直肠癌组织中突变率明显高于癌旁正常黏膜(P＜0.05).PIK3CA基因突变与AKT1/2蛋白阳性表达低度相关.结论 PIK3CA基因在结直肠癌中存在高频率突变,该基因的突变导致AKT1/2蛋白表达上调,可能在结直肠癌进展过程中起重要作用.
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PIK3CA 基因突变状态在乳腺癌不同临床病理特征中的研究
目的：检测乳腺癌组织磷脂酰肌醇‐3‐激酶催化亚单位α（PIK3CA）基因突变状态，并分析突变与临床病理特征的关系。方法选取176例原发性乳腺癌患者石蜡组织标本，提取组织DNA ，对外显子9及20进行探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应（ARMS‐PCR）扩增，检测PIK3CA基因的突变状态，另取20例乳腺腺病组织标本作为阴性对照。结果176例乳腺癌组织中发现突变45例，突变率25．6％，其中以20号外显子 H1047R突变率为主，突变率26．7％（12／45）；PIK3CA 基因突变在ER阳性和阴性、PR阳性和阴性患者中差异有统计学意义（P＜0．05），但在 HER2阳性和阴性患者中差异无统计学意义（P＞0．05）；PIK3CA基因突变与乳腺癌患者肿瘤大小、年龄、淋巴结状态之间无明显相关性，但与组织学分级有相关性。结论 PIK3CA基因突变与乳腺癌激素受体表达和肿瘤进展相关，PIK3CA 基因突变检测对指导临床制订个体化治疗有重要意义。
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PIK3CA基因突变在结直肠癌中的研究进展
结直肠癌是较常见的恶性肿瘤,发病率在我国呈逐年上升趋势.肿瘤的发生是多因素、多阶段、多基因改变的结果,包括原癌基因的激活与抑癌基因的失活.PIK3 CA基因是近年发现的除KRAS突变之外的结直肠癌常见的突变基因,PI3K下游信号通路的异常活化在结直肠癌的发生过程中发挥着重要的作用.本文就PIK3CA基因的生物学作用,参与肿瘤不同阶段的发展,以及PIK3CA作为肿瘤标志物和分子靶点的潜在临床价值简要作一综述.
