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大鼠穹窿下器微量注射与位点确定的技术关键
目的 探索大鼠穹窿下器(SFO)微量注射与注射位点确定的技术与关键点.方法 本实验采 用SD 大鼠20 只,麻醉后用大鼠脑立体定位仪固定头部,根据包氏图谱确定SFO 位点,微量注射后用多聚甲 醛溶液做组织灌注和固定,将脑组织震荡切片后进行尼氏染色,显微镜下读片及照相,根据针道轨迹末端或 伊红的位置判断注射部位是否准确.结果 图片显示注射位点清晰;SFO 注射成功18 例,成功率达90%.结论采用大鼠脑立体定位仪,包氏图谱确定位点,多聚甲醛灌注固定,震荡切片及尼氏染色等技术可以给 大鼠SFO 进行微量注射和注射后位点确定.
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大鼠脑穹窿下器官微量注射AngⅡ对肾近球小管Na+,K+-ATPase功能的影响
目的:探讨大鼠穹窿下器官(SFO)对外周肾小管钠泵的调节作用及机制.方法:在SFO分别微量注射血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),其中氯沙坦(losartan)组先用AngⅡ的1型受体(AT1)拮抗剂losartan预处理后再注射AngⅡ;放免法检测血清中内源性洋地黄样物质(EDLS)的水平和血浆AngⅡ水平;微分离大鼠肾脏单根近球小管,液闪法测定小管管周膜钠泵活性.结果:①SFO注射AngⅡ后,血清中EDLS在15 min开始升高,约60 min达高峰;②肾近球小管钠泵活性在SFO注射AngⅡ后30min和60min都显著下降;③用losartan预处理SFO后,再注射AngⅡ,血清EDLS水平升高和小管钠泵活性下降的效应被显著削弱.结论:大鼠SFO注射AngⅡ后,肾近球小管钠泵活性将下降,原因可能与SFO注射AngⅡ后,激动SFO的AT1受体,直接或间接升高血清EDLS水平有关.
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荷瘤大鼠伽玛刀治疗前后穹窿下器形态学变化与免疫状态的研究
目的 以穹窿下器(subfornical organ,SFO)为观察靶位,通过伽玛刀治疗后SFO的变化,研究 SFO与伽玛刀治疗疗效的关系.方法 建立C6大鼠胶质瘤模型,对其行伽玛刀治疗,于治疗后14 d对SFO用扫描电镜及透射电镜进行形态学观察.结果 大鼠SFO室管膜细胞凋亡数量增加,细胞坏死明显.结论 SFO的形态学变化与脑内免疫状态有关.
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大鼠脑内AV3V心房肽降压区和穹窿下器之间的功能联系
目的:为了验证ANP能神经是否从第三脑室前腹侧区(AV3V)投射到穹窿下器(SFO).方法:用脑内微量注射药物,观察动脉血压和心率变化.结果:(1)心房钠尿肽(Ape Ⅲ)注入SFO后,引起血压下降.(2) 在SFO预注射A 71915(一种心房钠尿肽Ⅲ的抑制剂),产生谷氨酸兴奋AV3V的相反效应.结论:刺激AV3V的心房钠尿肽能神经,可在SFO引起降压效应.A71915注入SFO核团可反转AV3V的降压效应.
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糖尿病大鼠穹窿下器室管膜细胞的形态学变化
目的:观察糖尿病大鼠不同时期穹窿下器的室管膜细胞的形态学变化.方法:雄性Wistar大鼠,每只大鼠给予链脲佐菌素60 mg/kg,腹腔一次性注射,建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型.造模成功后分别于2、4及8周,扫描电镜和透射电镜观察穹窿下器不同时期室管膜细胞的形态学变化.结果:扫描电镜观察,对照组细胞膨隆,表面光滑,有清晰的微绒毛.2周组细胞扁平、塌陷,细胞表面可见到圆形小破孔.4周组室管膜细胞表面凹凸不平,出现皱褶,细胞膜可见大小不一的多个小破孔,并可见细胞膜缺失、细胞器裸露的细胞.8周组室管膜细胞表面皱褶明显,可见大量的球形分泌颗粒.透射电镜观察显示,对照组穹窿下器室管膜细胞脑室面完整,有少量的微绒毛和乳头状微突起,模型组室管膜面可见大量分泌颗粒.结论:糖尿病可导致大鼠穹窿下器室管膜细胞破损及分泌大量的分泌颗粒.
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外周给予内毒素后穹窿下器细胞凋亡的时程变化
目的:研究穹窿下器细胞在外周给予内毒素后的凋亡变化.材料和方法:实验动物用SD大鼠,应用扫描电镜和TUNEL检测方法,分别观察腹腔注射大肠杆菌内毒素2、6、8和16小时后穹窿下器的形态学改变.结果:穹窿下器处发现有TUNEL阳性细胞,扫描电镜观察室管膜细胞及膜上结构随着时间的变化而形态各异.结论:外周给予内毒素引起穹窿下器细胞凋亡,而且作为感受性室周器官较其他脑区更早地发生了捌亡,提示穹窿下器很可能是优先感受血携免疫信息的窗口之一.
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不同免疫状态下穹窿下器的一氧化氮合酶细胞的变化
目的:实验通过对不同免疫状态下的穹窿下器处的一氧化氮合酶细胞变化的研究,以期证明穹窿下器可能参与脑内的免疫调节.方法:应用还原型尼克酰胺腺瞟呤二核苷酸脱氢酶组化方法.结果:(1)穹窿下器的一氧化氮合酶阳性细胞的面密度值较高,明显高于一般脑区;(2)一氧化氮合酶细胞的表达即可随着大肠杆菌内毒素剂量的增大而增多,也可随着地塞米松剂量的增大而增多.结论:提示穹窿下器可能为血携免疫信息进入脑内的部位之一;一氧化氮可能是脑内免疫状态的双向调节介质.
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穹窿下器内雌激素受体阳性细胞的分布
雌激素的生理作用不仅限于促进生殖系统各器官的发育和维持第二性征,还能作用于中枢神经系统,在神经组织的发育、分化,神经功能的维持方面发挥重要作用,并具有一定的神经保护作用.
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实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠穹窿下器的扫描电镜观察
穹窿下器属于感受性室周器官,缺乏血脑屏障,可能是外周免疫信息进入脑内的窗口之一.为证实这一观点,我们观察了在外周致敏引起中枢神经系统炎症情况下,即实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalallergic encephalomyelitis,EAE)大鼠穹窿下器脑室面的形态变化.
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实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠发病中脑组织血红素氧合酶-1基因和蛋白表达的动态变化
为探讨脑组织血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)的作用,分别应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化技术测定了豚鼠脊髓生理盐水匀浆+完全福氏佐剂诱导EAE大鼠1、7、14、21 d时,脑组织HO-1基因和蛋白表达的动态变化,并观察与症状之间的关系.结果显示:对照组大鼠脑组织仅有少量HO-1基因和蛋白表达;诱导EAE后,伴随着大鼠EAE症状及脑组织病理损伤的出现和进行性加重,脑组织HO-1基因和蛋白表达量逐渐增高.在豚鼠脊髓生理盐水匀浆+完全福氏佐剂诱导7 d后,HO-1 mRNA上升至高峰.14 d时,HO-1蛋白表达至高峰,HO-1阳性细胞主要位于脉络丛、穹隆下器、血管"套袖样"病灶的周围,与EAE病变部位一致.此时大鼠的病情重、体重减轻显著、脑组织病理改变明显.21 d时脑组织HO-1基因和蛋白表达量逐渐下降,大鼠EAE症状也逐渐减轻.应用HO-1特异性抑制剂锡原卟啉-9以抑制脑内HO-1蛋白表达后,大鼠EAE症状和脑组织损伤明显减轻,说明脑组织HO-1的动态变化与EAE症状及脑组织损伤密切相关.提示脑组织HO-1基因和蛋白过表达对EAE发病起着重要的作用,应用HO-1抑制剂可能是防治该病的有效方法之一.
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脑内血管紧张素Ⅱ系统在穹窿下器升压反应中的作用
文献报道脑内存在血管紧张素Ⅱ系统.与此一致,本工作用氨基甲酸乙脂麻醉、箭毒制动、人工呼吸的大鼠观察到: (1)穹窿下器(SFO)、室旁核(NPV)或 NPV 的投射区: 延髓头端腹外侧区(RVLM)、导水管周围灰质(PAG)、蓝斑(LC)内注入血管紧张素Ⅱ(AⅡ)均引起升压反应;(2)SFO升压反应可被双侧NPV或RVLM内预先注入[Sar1,Thr8]-AⅡ(ST-AⅡ,AⅡ拮抗剂)明显衰减,NPV升压反应也可被RVLM内注入ST-AⅡ削弱;(3)双侧PAG用ST-AⅡ预处理后,AⅡ引起的NPV- 或SFO- 升压反应均明显减小;(4)NPV升压反应还可被双侧LC内预先注射ST-AⅡ衰减,但SFO升压反应不受影响.结合我们以往工作曾显示兴奋PAG或LC均可作用于RVLM引起升压反应,目前的结果表明:SFO内的AⅡ能神经元通过 NPV 内AⅡ能神经元,不仅可直接作用于RVLM引起升压反应,而且还可间接通过PAG作用于RVLM起升压作用,但LC不参与SFO升压反应.
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NO 缺乏型高血压大鼠穹窿下器的超微结构观察
目的：观察高血压大鼠不同时期穹窿下器的水肿变化。方法雌性Wistar大鼠予以左旋硝基精氨酸（L-NNA）15 mg/（kg · d）腹腔注射，成功制备高血压动物模型。随机选择对照组、用药2周组、用药4周组、用药8周组，常规经心灌注固定取脑，取材后经处理用透射电镜观察高血压不同时期穹窿下器的水肿改变。结果随着血压的升高，穹窿下器的水肿逐渐加重，当血压稳定后，水肿减轻。结论穹窿下器在高血压不同时期的水肿改变与血压改变呈一致性。
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穹窿下器神经元瞬时感受器电位离子通道TRPV4在急性缺氧大鼠饮水减少中的作用
急性缺氧引起大鼠饮水量显著减少，其机制不清楚。穹窿下器（ SFO）是与饮水行为有关的脑室周器官，其神经元表达的TRPVs是一种阳离子通道，在调节水电解质平衡中起重要作用。为探索SFO区TRPVs在急性缺氧大鼠饮水减少中的作用及机制，我们通过第三脑室注射TRPV1和TRPV4的抑制剂，观察大鼠在模拟海拔6000 m高原缺氧6 h和24 h的饮水量；用原代培养SFO区神经元，构建TRPV4过表达的HEK293细胞，观察缺氧及TRPV4激动剂对细胞内钙离子浓度的影响。研究发现，急性缺氧24 h大鼠饮水量从正常的14 mL降至7 mL，但血钠离子、pH及颅脑温度无明显变化；TRPV4抑制剂，而不是TR－PV1抑制剂，能够部分恢复大鼠缺氧时的饮水量，TRPV4抑制剂还能降低SFO区缺氧诱导的TRPV4蛋白表达；缺氧或TRPV4激动剂均能增加原代培养的SFO区神经元和转染TRPV4的HEK293细胞内钙离子浓度，而缺氧诱导的钙离子增加能被TR－PV4抑制剂所抑制。这些结果表明，缺氧可直接激活SFO区神经元TRPV4，升高胞内钙离子，从而介导大鼠饮水量的减少。
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SOX2/Nestin阳性细胞在糖尿病大鼠穹窿下器中的表达
目的:观察神经干细胞特异性标记物性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)、巢蛋白(nestin)在不同时期糖尿病大鼠穹窿下器(SFO)中的表达情况并探讨其意义.方法:雄性Wistar大鼠给予链脲佐菌素(STZ,60mg/kg,腹腔一次性注射)建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型.用免疫组织化学染色方法观察SOX2、Nestin阳性表达细胞在正常大鼠及2、4、8、12周糖尿病大鼠SFO的表达情况.结果:模型组各个时间点的SOX2和Nestin的阳性表达细胞数量及平均光密度均高于正常对照组,且均在第4周表达达到高峰,而后逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在不同病程糖尿病大鼠模型中,SOX2及Nestin在SFO的阳性表达一过性增强,表明糖尿病时可能会短暂性提高SFO神经干细胞的增殖功能.
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SAMP8小鼠穹窿下器内神经干细胞的定位分布
目的:观察溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)及巢蛋白(Nestin)阳性细胞在SAMP8小鼠穹窿下器的分布.方法:成年SAMP8小鼠20只,随机分为四组,一组按每只50 mg/kg (0.3ml)的剂量腹腔注射BrdU,另外三组不作处理.经灌注后,分别采用免疫组织化学方法进行检测.结果:免疫组织化学染色,可见少量BrdU阳性细胞,胞核呈棕褐色或棕黑色;Nestin免疫阳性细胞在室管膜下区密集分布;SOX2免疫阳性细胞散在分布,在室管膜区和大血管周围分布密集.SOX2/Nestin免疫荧光双标染色:可见少量SOX2/Nestin双阳性细胞.结论:穹窿下器内SOX2及Nestin阳性细胞密集,并可见少量BrdU阳性细胞及SOX2/Nestin双阳性细胞,提示SAMP8小鼠穹窿下器存在神经于细胞/祖细胞,可能具有神经元发生功能.
