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白介素28B 基因多态性与慢性丙型肝炎患者抗病毒疗效的相关性研究
目的：检测丙型肝炎患者白细胞介素28B（IL－28B）基因型，探索IL－28B（rs12979860）位点多态性与慢性丙型肝炎（ CHC）患者抗病毒疗效的相关性。方法2011年11月至2014年5月收集解放军第三〇二医院就诊的CHC患者样本共1153例，其中303例CHC患者接受了聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗24～48周。采用双色荧光TaqMan技术检测IL－28B rs12979860多态性位点的基因型。结果 1153例丙型肝炎患者中， IL－28B rs12979860的 CC、CT、TT 基因型频率分别为83．26％、16．22％和0．52％；其中580例样本的HCV基因分型检测结果显示，1b、2a与非1b／2a亚型的频率分别为63．45％、35．00％和1．55％；303例明确用药史的CHC患者中，IL－28B的CC基因型与CT＋TT联合基因型获得持续病毒应答（ SVR）的比率分别是71．98％和16．90％，校正年龄、性别、病毒含量、HCV GT等混杂因素后显示，具有CT＋TT联合基因型的人群比CC基因型人群更难获得病毒持续应答，OR（95％CI）为11．10（5．35～23．04）（P＜0．0001）。 HCV基因型（HCV GT）的1b亚型与2a亚型获得SVR的比例分别是48．02％和81．19％，两者差异具有统计学意义（χ2＝30．639，P＜0．0001）。结论丙型肝炎患者IL－28B（ rs12979860）基因型与接受聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗的CHC患者病毒持续应答关系密切，CC基因型分布频率明显高于CT、TT基因型，具有CC基因型的患者更易获得高病毒持续应答率，可应用于丙型肝炎患者抗病毒疗效的预测指标。（中华检验医学杂志，2015，38：155－158）
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TaqMan MGB蛋白探针法检测IL28brs12979860位点基因多态性
目的 建立一种TaqMan real-time PCR探针杂交法,用于快速检测人rs12979860位点多态性.方法 从人各不同组织器官中提取基因组DNA,利用小沟结合蛋白(MGB)探针的高度特异性,设计相应的引物探针,根据实时荧光定量PCR过程中产生的信号在2个检测通道的强弱变化来鉴别等位基因差异.后所测样本经DNA测序验证结果的准确性.采用x2检验进行统计分析.结果 利用TaqMan MGB蛋白作为探针,能够区分只有1个碱基差异的目标基因组片段.该方法低检测浓度为1.5 ng/μl,扩增有效率达97.6％.不同组织器官(肾、心脏、子宫、血浆)及分泌物(鼻咽部)的DNA均可以用于检测.在随后对40例高加索人和50例黄种人的检测中亦证实,rs12979860位点的基因型及等位基因频率存在差异,高加索人以CT基因型为主(26/40),而黄种人以CC基因型为主(40/50),差异有统计学意义(x2=18.75,P＜0.05).在两种族人群中,抗病毒治疗血清学转换与患者基因型之间差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 TaqMan MGB法能快速并准确地区分rs12979860位点多态性,具有高度特异性和灵敏度,适用于多种样本的临床检测,是对丙肝患者抗病毒个体化治疗进行遗传分析的理想工具.
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丙型肝炎患者病毒基因型与抗HCV水平的相关性研究
目的 探讨丙型肝炎患者抗-HCV水平性与病毒基因型的相关性.方法 采用回顾性研究方法,收集2013至2014年上海市15家医疗机构抗-HCV阳性标本603份,应用雅培Architect I1000免疫分析系统进行复检.对复检阳性标本检测HCV RNA及进行基因分型,并以患者的抗HCV浓度水平的四分位间距为区间,分析不同基因型患者抗HCV浓度水平的分布规律,探讨机体对病毒应答的抗体产生与病毒基因型的相关性.各基因型在不同抗体浓度区间分布率比较采用x2检验.结果 603份标本中抗HCV双试剂复检阳性412份(68.33％),其中174(42.3％)份标本检测出HCV RNA;174份HCV RNA阳性标本中169份得到丙肝基因型结果.以抗体浓度四分位间距为区间,不同基因型患者中不同抗体浓度患者的分布为:1a型(8份)1/8、11/8、4/8、2/8;1b型(112份)25.9％(29/112)、17.0％(19/112)、25.9％(29/112)、31.3％ (35/112);2a型(14份)3/14、4/14、5/14、2/14;3a型(11份)3/11、6/11、2/11、0/11;3b型(16份)4/16、11/16、1/16、0/16;6a型(8份)为2/8、2/8、1/8、3/8.在HCV患者中不同基因型的HCV患者的抗体浓度不同,1b、2a、6a型患者抗体浓度分布均匀,1a型患者的抗体浓度(13.65)相对较高,3b型的患者的抗HCV水平(8.77)相对较低,各基因型在不同抗体浓度区间分布率有差异(x2=35.2,P＜0.05).结论 HCV患者的抗体水平与病毒基因型可能存在相关性.由于部分基因型的例数较少,相关性需要更大标本量的研究证实.
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外泌体开辟肝炎标志物检测的新视角
本文从外泌体的发生和释放机制出发,阐述了HBV和HCV标志物在外泌体中的存在情况和随外泌体释放的效应,探讨了由此产生的传染性、保护作用以及对治疗和检测的影响.并以研究数据初步证明了核酸检测这一金标准的重要性,指出隐匿性感染的又一新的原因是HBV和HCV标志物存在于外泌体.
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从全国室间质量评价结果探讨HCV RNA检测中的问题
目的 评价2012年第一次HCV RNA检测的全国室间质量结果,以分析探讨我国临床实验室HCV RNA检测中存在的问题,为进一步改进和提高实验室检测质量提供依据.方法 卫生部临检中心(以下简称“部中心”)2012年共发放5份样本至927家参评实验室,其中1份为阴性,4份为与国际标准物质比对定值的内含HCVRNA相应片段的病毒样颗粒.参评实验室按照规定的时间检测样本,并向部中心回报结果.然后,计算所有参评实验室和各检测试剂(实验室数≥5家)对每份质评样本定性和定量检测的符合率.计算总体参评实验室和不同试剂对阳性样本检测的均值(GM)和标准差(s).将所有参评实验室和不同试剂检测的GM和靶值比较,绘制相关性曲线.结果 参评实验室检测1211、1212、1213、1214号样本定性结果的符合率分别为99.5％ (403/405)、98.5％(400/406)、100.0％ (405/405)、100.0％(406/406),阴性样本的符合率为99％ (401/405)；检测1211、1212和1213号样本定量结果的符合率相近,分别为93.8％(549/585)、92.3％ (541/586)和94.5％(554/586),HCV RNA浓度高的1214号样本符合率仅为87.7％ (514/586).试剂A对1214号样本定量符合率仅为67.2％ (92/137).总体参评实验室HCV RNA定量结果GM(1211、1212、1213和1214号样本GM分别为4.63、4.11、5.41和6.23)与靶值(1211、1212、1213和1214号样本靶值对数值分别为4.64、4.16、5.40和6.20)结果非常接近.试剂C、试剂E和试剂G的GM均与靶值不一致,试剂C检测1211、1212、1213和1214号样本的GM依次为4.22、3.56、5.16和5.90,试剂E检测1211、1212、1213和1214号样本的GM依次为4.52、3.78、5.55和6.29,试剂G检测1211、1212、1213和1214号样本的GM依次为4.83、4.36、5.72和6.56.结论 临床实验室定性和定量检测HCV RNA的结果较为理想.但在检测试剂和临床实验室检测过程中,仍存在试剂GM与靶值偏差较大、使用同一试剂的不同实验室间结果差异较大、临床实验室检测存在系统和随机误差等问题,此外,检测重复性和试剂质量也有待进一步提高.
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新型二聚体突变荧光引物定量PCR方法的建立及其在检测HCV中的应用
目的 开发新型二聚体突变荧光引物技术,建立一种能广泛应用于临床检测HCv的实时PCR方法.方法 构建重组质粒pMD18-T-HCV 5′NCR作为标准品,设计二聚体突变荧光引物,优化定量PCR体系,并进行方法学评价.将本法应用于临床确诊的30份HCV阳性患者、30份其他病毒性肝炎患者和30份健康志愿者血清标本的检测,定量结果与商品化TaqMan HCv定量试剂盒的定量结果进行比较.结果 建立了利用二聚体突变荧光引物的实时PCR方法,检测的线性范围为20～109IU/ml;批内CV在1.37%～4.59%之间,批间CV在1.58%～4.81%之间;对所有其他病毒性肝炎患者和健康志愿者血清HCV的检测结果均阴性,检测特异性为100%(60/60);对临床确诊的HCV感染患者血清标本全部检出HCV阳性,定量结果与商品化TaqMan HCV定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数R2=0.9501.结论 建立的以二聚体突变荧光引物为平台的HCV实时PCR检测方法,具有快速、价廉、准确、结果可靠等特点,可为HCV感染的诊断、治疗监测和流行病学调查提供较好的技术支持.
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血液透析患者HCV感染不同筛查指标的比较研究
测方法相比,HCV Ag/抗-HCV联合检测可提高血液透析人群HCV感染的检出率.
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丙型肝炎病毒基因型及其宿主基因型的检测及临床意义
丙型肝炎病毒(HCV)持续感染导致的慢性丙型肝炎(CHC)是一个全球性的公共卫生问题.HCV感染是病毒因素与宿主因素相互作用的复杂的过程,HCV基因型与宿主基因型均在其中发挥重要作用.HCV分为6个基因型和多个亚型,不同基因型对聚乙二醇干扰素α联合利巴韦林的标准化抗病毒治疗的应答不同,因此治疗前需要确定HCV基因型以制定相应的治疗方案.近几年随着HCV蛋白酶抑制剂等特异性靶向治疗药物的研究进展,要求基因型的检测要精确到“亚型”的水平.基于测序法、反相杂交或实时PCR的HCV分型方法已经被广泛应用,但必须解决几个问题以实现方法学的标准化.近两年来,宿主白细胞介素28B的基因型被发现与CHC的自然清除和抗病毒治疗的应答有密切的关系,此外,肌苷腺苷三磷酸酶的基因型与利巴韦林引起的溶血性贫血相关,这些宿主基因型的检测已经在预测抗病毒治疗疗效和监控药物不良反应上得到初步的应用.
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妊娠合并重症肝炎29例临床分析
目的探讨妊娠合并重症肝炎的发病情况与有关围产期正确处理方式,减少对母儿的威胁.方法对我院近8年来29例妊娠合并重症肝炎的病例进行回顾性分析,通过分析其临床表现、病毒标志物、血生化、B超、病理观察、临床处理与妊娠结局,总结对该病的诊治经验和教训.结果急性重症肝炎7例(乙型3例、乙丙重叠感染1例、乙戊重叠感染2例、戊型1例),亚急性重症肝炎11例(乙型7例、戊型1例、病毒阴性3例),慢性重症肝炎11例(乙型10例、病毒阴性1例).孕产妇预后:治愈2例、好转13例、未愈自动出院5例、死亡9例,死亡率为31. 0%.死胎1例,死产2例,新生儿死亡4例,新生儿存活率占69.2%,围产儿死亡率为43.8%.结论妊娠合并重症肝炎严重危及母婴生命安全,是产科严重的合并症之一,定期产前教育和检查及早发现和处理是关键.
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HCV刺激小鼠小胶质细胞后TLR9mRNA的表达
目的 检测丙型肝炎病毒(HCV)刺激小鼠小胶质细胞(BV2)后Toll样受体9(TLR9)的表达,探讨TLR9参与小胶质细胞抗HCV的免疫发病机制.方法 将BV2细胞分为HCV阳性血清组(以含20％ HCV阳性血清的DMEM培养),健康人血清组(以含20％健康人血清的DMEM培养),空白对照组(以含10％胎牛血清的DMEM培养),分别在培养4、12、20、36 h收集细胞,以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法观察TLR9mRNA表达.结果 BV2细胞有TLR9 mRNA表达.HCV阳性血清组中TLR9 mRNA于4、12、20、36h各时间点相对表达量分别为3.50土0.33、2.03土0.10、2.05+0.12、2.02±0.14,均高于健康人血清对照组(分别为0.99士0.08、1.01土0.09、1.00士0.10、0.99士0.09)和空白对照组(均为1)(P＜0.01),且以HCV阳性血清刺激4h后TLR9 mRNA表达量高(P＜0.01).结论 BV2细胞能够表达TLR9 mRNA,且BV2经HCV刺激后TLR9 mRNA表达明显增加,提示TLR9可能参与BV2抗HCV的免疫发病机制.
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HCV刺激小胶质细胞后不同时间点TLR9的表达水平
目的 观察丙型肝炎病毒(HCV)刺激体外培养小鼠小胶质细胞(BV2)后不同时间Toll样受体9(TLR9)mRNA和TLR9蛋白表达的变化,初步探讨TLR9在HCV感染中枢神经系统(CNS)中的表达水平.方法 体外培养BV2细胞,将BV2细胞随机分为HCV阳性血清组、健康人血清组、空白对照组,分别用不同血清刺激4、12、20、36 h后收集细胞,并用反转录PCR和流式细胞仪检测TLR9 mRNA和TLR9蛋白的表达.结果 各组不同时间点BV2细胞均有TLR9 mRNA和TLR9蛋白的表达,且HCV阳性血清组高于健康人血清组和空白对照组(F=21.921,P<0.01;F=32.762,P<0.01);HCV阳性血清组4 h时TLR9 mRNA(F=8.364,P<0.05)和20 h时TLR9蛋白(F=16.517,P<0.01)表达量高,其他时间点之间比较无统计学差异(P>0.05);健康人血清组和空白对照组间比较无统计学差异(P>0.05).结论 HCV阳性血清刺激可使体外培养的BV2细胞TLR9 mRNA和TLR9蛋白表达增高,TLR9可能在HCV感染CNS中起重要作用.
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HCV感染小鼠小胶质细胞后TLR7mRNA和IL-6表达
目的 通过观察丙型肝炎病毒(HCV)感染小鼠小胶质细胞BV2后Toll样受体(TLR)7 mRNA及白细胞介素(IL)-6水平的动态变化,探讨HCV对中枢神经系统(CNS)的免疫发病机制.方法 用20%(体积分数)的HCV阳性血清感染BV2细胞,在感染后6、12、24、48 h收集细胞,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和ELISA法检测TLR7 mRNA和IL-6表达,同时设空白对照组和正常血清组.结果 3组BV2细胞中均有TLR7 mRNA表达;HCV阳性血清感染BV2细胞后TLR7 mRNA表达随时间延长而逐渐增高,其中在12、24、48 h时表达水平均较其他两组增高(P<0.05).IL-6表达在HCV阳性血清组也逐渐增高,48 h时与空白对照组、正常血清组48 h时比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 BV2细胞可以表达TLR7 mRNA,HCV感染能上调BV2细胞TLR7 mRNA和IL-6表达.TLR7可能参与了HCV对CNS的病理生理过程.
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丙型肝炎抗病毒治疗对儿童生长发育的影响研究
儿童慢性丙型肝炎的治疗一直是临床上十分棘手的问题.近美国食品与药品管理局批准了聚乙二醇干扰素-α2a联合利巴韦林用于儿童患者的治疗,已有大型的前瞻性临床研究证明其疗效及安全性,但在也发现药物对儿童的生长发育存在一定影响.因此,临床上对儿童丙型肝炎患者的治疗更须慎重考虑,避开儿童发育的重要时期(新生儿及青春期)进行治疗,并做好随访,及时评估药物对儿童的影响.
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丙型肝炎病毒感染对精子和辅助生殖技术结局的作用
丙型肝炎病毒(HCV)感染尤其是围生期HCV的感染近来备受关注.男性精液和精子中检出较低浓度的HCV RNA,HCV患者的精液质量包括常规和生物功能参数的下降和HCV患者男性生育功能的明显降低,证实HCV可以影响男性生殖系统并可能造成垂直传播风险.辅助生殖技术(ART)在很好地解决HCV男性患者生育的同时极大地降低了HCV围生期传播,但HCV患者子代的健康仍不容忽视.
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南京地区丙型肝炎病毒患者基因型分布特征
目的：探讨南京地区慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因型分布特征和相关的影响因素,以对 HCV 感染的控制和个体化治疗提供依据。方法收集南京市第二医院慢性丙型肝炎患者1030例,采用基因芯片法检测 HCV 患者基因型,分析 HCV 基因型的组成及其与性别、年龄的关系。结果本研究中南京地区基因型有1a,1b,2a,3a,3b,6型和少量混合型,1b 型占73.0%(752/1030),其次为2a 型占9.4%(97/1030),未见4型和5型；在男女慢性 HCV 患者中,1b 型均为主要基因型,1b 型在男性组中比例明显高于女性组,差异有统计学意义(P <0.01)；1b 型与2a 型患者平均年龄大于3b 型患者,差异有统计学意义(P <0.01)。结论南京地区 HCV 基因型以1b 型为主,其次为2a 型,未见4 型、5型；3b 型患者的平均年龄均比1b 型和2a 型患者小。
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丙型肝炎的直接抗病毒药物
丙型肝炎病毒(HCV)感染是全球性的公共卫生问题之一。清除 HCV 感染，达到治愈是丙型病毒性肝炎治疗的主要目标。近年来直接抗病毒药物(DAA)发展迅猛，可以有效清除病毒，而且安全性和耐受性均较好，国际上已广泛用于 HCV 感染者的治疗。本文就 DAA 的分类、特点、耐药问题及不同 HCV 基因型的治疗方案等的研究进展进行概述。
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输血前或术前患者乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人体免疫缺陷病毒和梅毒螺旋体抗体检测结果分析
目的：分析输血前或术前患者乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、人体免疫缺陷病毒（HIV）和梅毒螺旋体抗体（TP - Ab）检测结果。方法选取2010—2011年于高安市人民医院进行输血的患者11987例，检测 HBV、HCV、HIV、TP - Ab 的阳性率。结果11987例患者输血前或术前血清检测显示阳性853例（7.13%），其中 HBV 阳性396例（3.30%），抗- HCV 阳性152例（1.27%），抗- HIV 阳性97例（0.81%），TP -Ab 阳性208例（1.74%）。结论输血前和术前患者 HBV、HCV、HIV、TP - Ab 检测可避免输血医疗纠纷及院内交叉感染的发生。
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酶联免疫吸附试验试剂与核酸检测联检丙型肝炎病毒的检测模式的选择分析
目的 探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂与核酸检测(NAT)联检丙型肝炎病毒(HCV)的检测模式的选择分析.方法 选取厦门市中心血站2013年8月—2015年1月无偿献血者68661位,采用进口和国产抗-HCV酶联免疫试剂对其血液标本进行常规检测,再筛选出2种抗HCV试剂同时阳性反应的血液样本后,运用Cobas S201全自动核酸检测系统对剩余标本进行HCV NAT,再随机挑出部分的阳性反应标本进行免疫印迹法分析实验,后结合3种不同检测方法的结果进行数据分析以探讨HCV筛查策略.结果 68661份无偿献血者血液样本,检出165份HCV抗体阳性反应样本,抗HCV抗体阳性反应率为0.24％.HCV抗体阳性反应样本中,A、B试剂检测双边阳性反应率为17.6％(29/165),A试剂检测单边阳性反应率为93.3％(154/165)、B试剂检测单边阳性反应率为24.2％(40/165).除29份A、B试剂检测双边阳性标本未进行NAT,68632份血液标本经NAT检测为阴性.68661例血液样本中,采用A、B试剂单复检模式检出165例HCV阳性,检出率为0.24％;采用NAT+A模式,不合格154份,检出率为0.22％;采用NAT+B模式,不合格40份,检出率为0.06％.165份HCV抗体阳性血液标本经MP Diagnostics HCV Blot 3.0检测,结果显示,共67份样本确定为阳性,阳性符合率为40.6％,其中29份进口和国产试剂双边阳性反应标本经MP Diagnostics HCV Blot 3.0试剂检测阳性率为96％(28/29),而进口试剂单边阳性标本经MP Diagnostics HCV Blot 3.0试剂检测阳性率为43.5％(67/154),国产试剂单边阳性标本的MP Diagnostics HCV Blot 3.0试剂检测阳性率为0.另外33例不确定样本,32例为进口试剂单边阳性样本,1例为国产试剂单边阳性标本,而64例阴性样本则由54例进口试剂单边阳性样本和10例国产试剂单边阳性样本组成.结论 在无偿献血者血液HCV筛查中,NAT及ELISA两种方法相互补充,在选择ELISA抗-HCV试剂时除需符合国家批检要求外,核心的是要提高献血者阳性标本检出率,防止漏检现象发生.目前,抗-HCV的ELISA试剂有国产试剂和进口试剂多种品牌.因此,若要采用一种试剂ELISA法加NAT检测HCV,需慎重选择试剂,以确保临床用血安全.
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新型治疗慢性丙型肝炎药特拉瑞韦的药理与临床评价进展
特拉瑞韦是一种可逆的丙型肝炎病毒(HCV)NS3/NS4蛋白酶抑制剂,2011年5月23日获得美国食品药品管理局(FDA)批准与聚乙二醇干扰素α和利巴韦林联合使用用于治疗HCV.本文对特拉瑞韦的药理作用、药动学、临床评价、安全性以及药物相互作用等进行了综述.
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两种RNA提取方法对丙型肝炎RNA定量分析的影响
目的 比较两种RNA提取方法对丙型肝炎病毒( hepatitis C virus, HCV) RNA检测结果的影响,为临床实验室质量控制和结果评价提供依据. 方法 以定值质控品为标准物质,采用硫氰酸胍法和蛋白酶K法两种RNA提取方法对我院2014年11月确诊的33例HCV感染者进行HCV RNA定量分析. 结果 两种检测方法检测定值质控品的批内不精密度分别为3. 7%和2. 2%、批间不精密度分别为5. 0%和4. 3%. 硫氰酸胍法提取定值质控品RNA进行定量PCR检测结果lg 值为4. 15 ± 0. 21 低于蛋白酶 K 法的4. 80 ± 0. 21,差异有统计学意义(t =10. 88,P <0. 001);两种方法对本组HCV感染者检测结果lg值分别为4. 86 ± 1. 14和5. 29 ± 1. 22,差异有统计学意义(t=12. 10, P<0. 001),且二者呈显著线性相关(r=0. 987,P<0. 001). 结论 与硫氰酸胍法比较,蛋白酶K法是一种效率更高,检测数据更准确的RNA提取方法.
