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体外研究整合素α5对小鼠胚泡着床的作用
目的在人蜕膜细胞与小鼠胚泡共培养过程中,研究整合素α5(integrin α5)在小鼠胚泡着床中的作用,分析其作用机制. 方法利用人蜕膜细胞与小鼠胚泡共培养模型,模拟胚泡在体内的着床过程,加入integrin α5抗体及其配体纤粘连蛋白(FN)抗体,对胚泡的粘附、外延生长、着床率进行形态学观察和统计学分析. 结果人子宫蜕膜经分离纯化后,检测活细胞比例>92%,贴壁的蜕膜细胞比例>95%,小鼠胚泡可在蜕膜上粘附、生长;integrin α5抗体及配体FN的抗体均能抑制小鼠胚泡的侵入、外延生长,但不抑制胚泡的孵出和粘附. 结论建立了小鼠体外着床模型:integrin α5在着床中促进小鼠胚泡的侵入与铺展,但对胚泡孵出、子宫内膜的识别与粘附不产生影响.
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整合素α5在胚胎小鼠肾脏发育过程中的表达
目的 观察细胞外基质的受体一整合素α5在胚胎小鼠肾脏发育过程中的时空性表达,探讨其在胚胎肾脏发育中的作用.方法 采用免疫组织化学(酶组织化学和荧光组织化学)方法观察不同胚龄小鼠肾组织中整合素α5的表达,细胞图像分析技术检测阳性表达的灰度值,体视学技术检测阳性表达的体密度值.结果 免疫组化结果显示:胚龄12 d时整合素α5在输尿管芽(UB)周围的生后肾组织有表达.胚龄14 d时整合素α5在生肾区有表达.胚龄16 d和18 d时整合素α5在发育各个阶段的肾小体、肾小管都有一定程度的表达.图像分析和体视学结果显示:整合素α5的表达随着肾脏发育逐渐增强.结论 整合素α5在发育各个时期的肾小体、肾小管都有一定程度的表达,且随着肾脏的发育表达逐渐增多.提示整合素α5对肾小体、肾小管的发育都起一定的诱导作用.
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整合素α5和肌动蛋白在周期性压力下椎间盘细胞中的表达
目的探讨整合素α5和肌动蛋白在周期性压力下椎间盘细胞中的表达.方法对猪椎间盘组织进行体外细胞的分离和培养,对细胞施加周期性液压,通过对细胞的形态学观察、Western免疫印迹和免疫组化染色,分别检测整合素α5和肌动蛋白在周期性压力下椎间盘细胞中的表达.结果经加压后,纤维环细胞和髓核细胞均可见体积缩小,由多角形转变为细长形,整合素α5和肌动蛋白在纤维环细胞和髓核细胞中的表达均明显减少.结论体外培养的单层椎间盘细胞在受力状态下,整合素α5的表达减少,整合素α5将力信号转换到细胞内时,进一步影响到与其关系密切的肌动蛋白.这可能是椎间盘细胞力学传导的重要机制.
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卵巢上皮性癌组织中转移抑制基因ME491/CD63与整合素α5蛋白和mRNA的表达及其意义
目的探讨转移抑制基因ME491/CD63、整合素(integrin)α5蛋白和mRNA在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其意义.方法应用RT-PCR技术和原位杂交方法检测正常卵巢组织(Ⅰ组,30份)、卵巢良性上皮性肿瘤组织(Ⅱ组,10份)、卵巢交界性上皮性肿瘤组织(Ⅲ组,6份)和卵巢癌组织(Ⅳ组,48份)中ME491/CD63及integrin α5蛋白和mRNA的表达,并分析其与患者各临床病理指标的关系.结果 (1)ME491/CD63与integrin α5 mRNA表达水平:Ⅰ组均为1.7±0.3,Ⅱ组均为1.5±0.3,Ⅲ组均为1.1±0.5,Ⅳ组均为0.6±0.4.各组间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).卵巢癌组织中,ME491/CD63和integrin α5 mRNA表达水平,不同年龄、病理类型间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而不同病理分化程度、手术病理分期及有无淋巴结转移间比较,差异均有统计学意义(P<0.01).(2)ME491/CD63和integrin α5蛋白表达阳性率:Ⅰ组和Ⅱ组均为100%,Ⅲ组均为50%;Ⅳ组均为31%,其中手术病理分期为Ⅰ期者均为7/7,Ⅱ期均为6/9,Ⅲ～Ⅳ期均为6%.Ⅰ、Ⅱ组分别与Ⅲ、Ⅳ组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).卵巢癌组织中,ME491/CD63和integrin α5蛋白表达阳性率,不同年龄、病理类型间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而不同病理分化程度、手术病理分期及有无淋巴结转移间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论ME491/CD63和integrin α5蛋白和mRNA在卵巢癌组织中呈低表达,其表达缺失与病理分化程度、手术病理分期及淋巴结转移有关.
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牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中对整合素α5、β1表达的影响
目的 探讨牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中对整合素α5、β1的调节机制,为牙周炎发病机制的研究提供理论依据.方法 标准厌氧环境下培养牙龈卟啉单胞菌W83,分离提纯牙龈蛋白酶.用8.348 U/L牙龈蛋白酶处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1 48 h,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法-4’,6-二脒基-2-苯基吲哚[transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotinnick end labeling-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride,TUNEL-DAPI]双染色法检测细胞凋亡；蛋白质印迹法检测整合素α5、β1蛋白的表达水平.结果 精氨酸-蛋白酶活性为(41.74±2.11) U/L,赖氨酸-蛋白酶活性为(1.02±0.25)U/L.TUNEL-DAPI染色显示牙龈蛋白酶作用于MC3T3-E1细胞48 h后诱导细胞发生凋亡.在短时间内(≤72 h)牙龈蛋白酶呈时间依赖性下调整合素α5、β1的表达水平,48 h时整合素α5、β1相对表达量分别为(0.485±0.039)、(0.504±0.002),72 h时分别为(0.398±0.058)、(0.179±0.001),与对照组(蛋白相对表达量分别为1.000±0.000、1.000±0.000)相比差异均有统计学意义(P ＜0.05)；72 h后,整合素α5表达水平与对照组相比差异无统计学意义,但整合素β1仍持续下调(96、120 h时相对表达量分别为0.604±0.003、0.357±0.002),均显著低于对照组(1.000±0.000) (P＜0.05).牙龈蛋白酶特异性抑制剂甲苯磺酰-L-赖氨酰-氯甲基酮(tosyl-CL-clysine-chloromethyl-ketone,TLCK)可有效抑制蛋白酶活性,使整合素α5、β1蛋白表达量分别从(0.398±0.058)、(0.179±0.001)显著上升至(0.781±0.012)、(0.857±0.060)(P＜0.05),但TLCK本身不改变整合素α5、β1的表达水平(P＞0.05).同时牙龈蛋白酶还呈剂量依赖性下调整合素α5、β1的表达水平,20.8700 U/L牙龈蛋白酶作用下整合素α5、β1相对表达量达低值(0.105±0.004、0.020±0.000),与对照组(1.000±0.000)相比差异有统计学意义(P＜0.05).牙龈蛋白酶直接处理成骨细胞膜蛋白提取物,与对照组相比各组间整合素α5、β1相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05),提示牙龈蛋白酶不直接降解整合素α5、β1.结论 牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中呈时间和剂量依赖下调整合素α5、β1的表达,下调途径不是通过该蛋白酶的直接蛋白水解发挥作用.
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小鼠肾小管发育过程中纤维粘连蛋白与整合素α5的表达
背景:纤维粘连蛋白-整合素α5 相互作用影响肾小管发育的体内研究较少.目的:观察小鼠肾小管发育过程中纤维粘连蛋白及其受体整合素α5 的表达.方法:选取胚龄(E)12,14,16,18 d 和生后日龄(P)1,3,7,14,21,28,40 d 的小鼠.结果与结论:免疫组织化学染色结果显示纤维粘连蛋白于E12 d时即表达于输尿管芽的基底膜处,随后表达于发育各个时期的肾小管基膜;整合素α5 于E12 d 时开始表达,表达部位是肾小管的上皮细胞.体视学测量结果显示纤维粘连蛋白表达的面密度值和整合素α5 表达的体密度值都随肾脏的发育逐渐增大.Western blot 结果显示纤维粘连蛋白和整合素α5 蛋白的水平都随肾脏的发育逐渐增加.可见纤维粘连蛋白和整合素α5 在小鼠肾小管的发育和成熟过程中的表达具有一定的时空性,对肾小管的发育起一定的作用.
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α整合素表达及与骨肉瘤细胞恶性侵袭的关系
目的:探讨人骨肉瘤MG-63细胞表面纤联蛋白相关的α整合素的表达及其在肿瘤侵袭中的作用.方法:实验于2004-01/08在南方医院中心实验室完成.人骨肉瘤细胞系MG-63在含体积分数为0.1的血清的DMEM培养基中培养.采用免疫细胞化学和流式细胞仪检测MG-63细胞表面α整合素的表达;基质胶/滤膜法检测MG-63细胞的侵袭能力;抗体及短肽RGD封闭法研究不同的纤联蛋白相关的α整合素在骨肉瘤侵袭过程中的作用.结果:①α4,α5和αⅤ整合素在MG-63细胞表面均有阳性表达.②α5和αV功能封闭抗体对MG-63细胞的侵袭作用无明显影响.③α4表达较弱,但α4封闭抗体和RGD短肽都可明显抑制MG-63细胞的恶性侵袭能力(P＜0.05).④α4功能封闭抗体和RGD短肽联合应用与RGD单独应用对MG-63细胞侵袭的抑制作用无明显差别.结论:不同α整合素受体对骨肉瘤细胞恶性侵袭的作用不同,α4整合素对MG-63细胞的恶性转移能力有明显的诱导作用,而α5和αⅤ整合素在此作用中无明显的作用.除α4整合素以外,还有其他细胞表面受体可以通过与纤联蛋白的相互作用而诱导MG-63细胞的侵袭.
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小鼠胚胎与子宫内膜中整合素α5的表达
目的:观察整合素α5在小鼠早期胚胎和子宫内膜中的表达分布状况,探讨整合素在胚胎着床中的可能作用.方法:用免疫组织化学ABC法染色,对发育不同时期的小鼠胚卵和妊娠2 d～6 d、8 d、13 d以及非妊娠期的子宫内膜中整合素α5的表达分布进行形态学观察与半定量分析.结果:整合素α5的阳性反应物质在小鼠早期胚卵胞浆内;非妊娠期子宫内膜和妊娠期的脱膜上皮与基质细胞内均有整合素α5表达,植入前表达相对较弱,植入后随妊娠的进展逐渐增强.结论:提示整合素α5在小鼠胚卵着床中起重要作用:推测它不参与胚卵对母体子宫内膜的识别和粘附,而是参与了粘附后的侵入及胚胎发育过程.
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异位子宫内膜细胞中整合素α5的表达及其性激素调控
目的:探讨异位子宫内膜细胞中整合素α5的表达及性激素对其的影响.方法:对18例卵巢子宫内膜异位症(EM)患者的异位子宫内膜组织行体外细胞培养并传代.传代培养中细胞分为非药物干预组(对照组)、雌二醇(E2)组、安宫黄体酮(P)组、米非司酮(RU486)组、三苯氧胺(TAM)组5组,细胞收获后用逆转录-聚合酶链反应技术检测各细胞组中整合素α5 mRNA的表达.结果:整合素α5在E2组及P组的表达水平分别为1.415±0.286及1.304±0.170,与对照组的1.082±0.069相比,差异具有统计学意义(P＜0.05),而TAM组及RU486组中整合素α5表达水平(分别为0.882±0.013及1.304±0.170)明显低于对照组(P＜0.05).结论:整合素α5表达受雌、孕激素调控,E2、P可能通过上调整合素α5的表达而促进EM粘附的发生,TAM、RU486可能通过拮抗E2、P或抑制异位内膜细胞分泌整合素α5分子而延缓EM的发展,从而起到治疗作用.
关键词： 异位子宫内膜细胞 细胞培养 整合素α5 逆转录-聚合酶链反应 性激素 -
整合素α5及整合素β3在子宫内膜异位症中表达的研究
目的:探讨整合素α5、β3在子宫内膜异位症(EM)患者在位和异位内膜中的表达. 方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对18例EM患者在位内膜、异位内膜(研究组)和18例非EM患者子宫内膜(对照组)行整合素α5、β3 mRNA检测.同期放射免疫法测定EM患者体内雌二醇(E2)、孕酮(P)、糖类抗原125(CA125)水平,对EM患者术中行美国生殖学会评分系统(AFS-r)评分. 结果:整合素α5 mRNA在EM患者在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜中表达水平分别为0.773±0.113、1.077±0.032、0.924±0.120,各组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05);整合素β3 mRNA在EM患者在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜中表达水平分别为0.653±0.080、0.963±0.132和0.763±0.090,各组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05).EM组血清E2水平与异位内膜整合素α5、β3 mRNA表达均呈正相关(P<0.05),相关系数分别为0.793、0.917;而P水平与异位内膜整合素α5、β3 mRNA表达均无相关(P>0.05).CA125水平与异位内膜整合素α5、β3 mRNA表达均呈正相关(P<0.05),相关系数分别为0.763、0.754,AFS-r评分与异位内膜整合素α5、β3 mRNA表达均呈正相关(P<0.05),相关系数分别为0.801、0.773. 结论:EM异位内膜组织中整合素α5、β3高表达可能与EM黏附发生有关,整合素α5、β3表达受雌激素调控.
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辛伐他汀对大鼠肾间质成纤维细胞增殖及α5整合素表达的影响
目的 研究辛伐他汀对培养的大鼠肾间质成纤维细胞TGF-β1激活后细胞增殖及表面α5整合素表达的影响.方法 不同浓度辛伐他汀加入到含有TGF-β1培养液培养的大鼠肾间质成纤维细胞,分别采用MTT法及细胞流式仪检测细胞的增殖,RT-PCR法检测大鼠肾间质成纤维细胞表面α5整合素的表达.结果 辛伐他汀能抑制由TGF-β1所引起的大鼠肾间质成纤维细胞的增殖,阻止细胞由G1期进入S期.辛伐他汀能显著抑制TGF-β1对大鼠肾间质成纤维细胞表面α5整合素的表达促进作用,同时随着辛伐他汀浓度的增加,抑制作用明显增强.结论 辛伐他汀能抑制由TGF-β1所引起的大鼠肾间质成纤维细胞的增殖及细胞表面α5整合素的表达.
关键词： 羟甲基戊二酰基CoA还原酶抑制剂 成纤维细胞生长因子 整合素α5 模型 动物 -
黏着斑激酶、整合素α5,β1亚基及转化生长因子β1在人乳腺癌组织中的表达及其意义
目的研究人乳腺癌组织及癌旁组织中黏着斑激酶(FAK),整合素α5,β1亚基及转化生长因子β1(TGFβ1)中表达的差异性,以及它们与乳腺癌生物学行为的相关性.方法运用免疫组化SP法检测76例乳腺癌和36例癌旁组织FAK,整合素α5,β1亚基及TGFβ1表达的情况.结果 76例乳腺癌组织中FAK表达的阳性率为81.58%(62/76),整合素α5为30.48%(23/76),整合素β1为25.00%(19/76),TGFβ1为65.79%(50/76);36例癌旁组织中FAK表达的阳性率为5.56%(2/36),整合素α5为75.00%(27/36),整合素β1为83.33%(30/36),TGFβ1为27.77%(10/36),统计分析发现它们之间差异存在显著差异性(P<0.01).FAK与乳腺癌的大小,组织学分级(SBR分级),pTNM分期及腋淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01),而与患者年龄,绝经状况,ER,PR,C-erbB-2无关(P>0.05).整合素α5,β1与乳腺癌的组织学分级(SBR分级),pTNM分期及腋淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄,肿瘤大小,绝经状况,ER,PR,C-erbB-2无关(P>0.05).TGFβ1仅与腋淋巴结转移有关(P<0.05),而与其他因素无关(P>0.05).FAK与整合素α5,β1之间存在负相关(P<0.05),TGFβ1与FAK之间存在正相关(P<0.01),而整合素α5,β1与TGFβ1之间无显著相关性(P>0.05).结论 FAK、整合素α5、β1,TGFβ1与乳腺癌增殖、分化、侵袭、转移密切相关,其中整合素α5,β1可能对肿瘤的侵袭转移起负性调控作用,而FAK,TGFβ1可能对肿瘤的侵袭转移起正性调控作用且两者有协同作用.联合检测这4种蛋白的表达有助于了解乳腺癌发生的分子机制,并可作为指导乳腺癌临床诊疗较有参考价值的指标.
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人RPE细胞表达整合素α5的调节研究
目的 探讨人视网膜色素上皮(RPE)细胞中整合素α5表达的调节机制.方法人RPE细胞原代、传代培养,RT-PCR及流式细胞术观察血清组、PD98059组和对照组整合素α5mRNA和蛋白的表达,Western blot法检测各组人RPE细胞中MAPK磷酸化水平.结果与对照组相比,血清组能促进整合素α5mRNA和蛋白的表达,而PD98059(20μmol/L)组可抑制此促进作用;流式细胞仅显示培养24 h后3组整合素α5荧光强度分别为1.94±0.22,4.56±0.25,2.39±0.14,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示30 min后血清组ERK1/2磷酸化激活水平高,PD98059组抑制ERK1/2的磷酸化激活,对照组ERK1/2的磷酸化激活作用很弱.结论 10%小牛血清能促进人RPE细胞表达整合素α5,ERK1/2的磷酸化激活参与此过程.
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体外培养人眼晶状体上皮细胞整合素α5的表达
目的探讨体外培养的人眼晶状体上皮细胞整合素α5的表达.方法采用免疫荧光细胞计数检测法,对20例先天性白内障患者术中的环形撕裂前囊膜进行原代培养并传代,取2～3代细胞进行检测整合素α5的表达.结果体外培养人眼晶状体上皮细胞整合素α5的表达阳性率平均为93.30%,阴性率为6.70%.结论体外培养人眼晶状体上皮细胞高表达整合素α5,其可能在后发性白内障的发生和发展过程中发挥作用.
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表皮生长因子诱导人视网膜色素上皮细胞整合素α5表达对细胞增生和迁移的影响
目的 观察表皮生长因子(EGF)诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞整合素α5表达对细胞增生和迁移的影响.方法 在0.1、1.0、10.0、20.0、100.0 ng/ml EGF浓度条件下,体外培养人RPE细胞.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及流式细胞术观察不同浓度组整合素α5mRNA和蛋白的表达.后将实验分为Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)/F12、DMEM/F12+10.0 ng/ml EGF、DMEM/F12+10.0ng/ml EGF+兔抗人整合素α5多克隆抗体(1:100)及DMEM/F12+10.0 ng/ml EGF+兔抗人波形蛋白抗体(1:100)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法和Boyden小室法检测细胞增生及迁移.结果 RT-PCR检测显示,细胞培养12 h,EGF对人RPE细胞整合素α5mRNA合成无明显影响(F-0.618,p=0.687);细胞培养24、48 h,EGF能刺激人RPE细胞合成整合素α5mRNA,并呈浓度依赖性(F=465.303,212.340;P=0.000,0.000).流式细胞术检测显示,10.0 ng/ml组整合素α5荧光强度强,与空白对照组和0.1 ng/ml组比较,差异有统计学意义(P<0.01).MTT比色法和Boyden小室法检测显示,整合素α5的表达促进人RPE细胞增生和迁移.结论 EGF促进整合素α5mRNA和蛋白的表达,整合素α5的表达促进人RPE细胞增生和迁移.
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下颌骨骨折愈合过程中整合素α5表达的免疫组化研究
目的探讨下颌骨骨折愈合过程中整合素α5表达水平的改变.方法用兔作下颌骨骨折的动物模型,分别于骨折前1天及骨折后第1、3、5、7、14、30、60、90天取骨断端组织标本作成石蜡切片并用LsAB法进行免疫组织化学实验,以探讨整合素α5在骨组织,特别是在成骨细胞和破骨细胞中的表达.结果整合素α5在骨组织及其周围软组织中广泛表达;从骨折后第7天出现增强,第14天到第30天表达强,第60～第90天后接近正常.结论在下颌骨骨折的愈合过程中,整合素α5在骨组织细胞上的表达增强, 整合素α5对骨折的愈合过程具有重要作用.
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KAI1/CD82、Integrin α5在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的:探讨KAI1/CD82和Integrin α5在乳腺癌中的表达及其临床意义.方法:用免疫组织化学SP法检测64例乳腺癌组织KAI1/CD82和Integrin α5的表达.结果:乳腺癌组织中KAI1/CD82和Integrin α5阳性表达与正常乳腺组织比较有显著差异(P＜0.05);两种基因蛋白表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移密切相关,差异有统计学意义(P＜0.05);二者在乳腺癌组织中呈正相关(P＜0.01).结论:KAI1/CD82和Integrin α5蛋白的表达与乳腺癌的演进和转移密切相关,检测其表达异常对判断临床进展以及推测预后有一定的参考价值.
