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小鼠胚泡移植法在研究羟基脲发育毒性中的应用
目的探讨体外染毒后胚泡移植方法评价羟基脲发育毒性的可行性.方法由C57BL/6J雌性小鼠和DBA雄性小鼠交配产生BDF1小鼠,以BDF1雌性小鼠作为供胚鼠进行超排卵,并与BDF1雄性小鼠交配后采集受精卵,再以20μg/ml的羟基脲对着床前胚胎进行体外染毒,将染毒后可胚泡化的胚胎移植于假孕昆明种代母鼠体内继续生长发育,观察出生前胎鼠形态学改变和出生后子鼠的行为改变,并对子鼠大脑进行病理检查.结果(1)在实验剂量下,羟基脲染毒组胎鼠出生前形态学检查未见异常.(2)羟基脲染毒组子鼠出现行为异常:回旋运动、阴性趋地运动、翻正反射和断崖回避阳性日均迟于阴性对照组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05);悬挂时间短于阴性对照组(P＜0.05);10日龄游泳积分低于阴性对照组(P＜0.01).(3)电镜超微结构显示染毒组子鼠大脑中毒性损伤.结论将胚胎体外培养和胚泡移植技术结合起来,排除母体因素的影响探究羟基脲的发育毒性,是一可行的方法.
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体外研究整合素α5对小鼠胚泡着床的作用
目的在人蜕膜细胞与小鼠胚泡共培养过程中,研究整合素α5(integrin α5)在小鼠胚泡着床中的作用,分析其作用机制. 方法利用人蜕膜细胞与小鼠胚泡共培养模型,模拟胚泡在体内的着床过程,加入integrin α5抗体及其配体纤粘连蛋白(FN)抗体,对胚泡的粘附、外延生长、着床率进行形态学观察和统计学分析. 结果人子宫蜕膜经分离纯化后,检测活细胞比例>92%,贴壁的蜕膜细胞比例>95%,小鼠胚泡可在蜕膜上粘附、生长;integrin α5抗体及配体FN的抗体均能抑制小鼠胚泡的侵入、外延生长,但不抑制胚泡的孵出和粘附. 结论建立了小鼠体外着床模型:integrin α5在着床中促进小鼠胚泡的侵入与铺展,但对胚泡孵出、子宫内膜的识别与粘附不产生影响.
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显微注射技术的改进和用灵长类间充质干细胞制备嵌合体小鼠
显微注射法制备嵌合体动物,早在Gardner[1,2]1968年报道,他们将小鼠胚胎泡内细胞群细胞注射入另一种毛色基因不同的小鼠胚泡中,获得毛色混杂的嵌合鼠.随后,显微注射法逐步发展起来,上世纪90年代起,主要通过转入外源基因的小鼠ES细胞(embryonic stem cell)显微注射,制备嵌合体,进而获得转基因小鼠.但对成体干细胞在异种动物内的嵌合报道不多.Harder[3,4]等将人脐带血来源的造血干细胞注射到小鼠胚泡中,发现在成年小鼠造血系统中有人的细胞嵌合.我们改进了显微注射技术,并通过该技术探讨了灵长类动物骨髓来源间充质干细胞的嵌合体构建,建立了干细胞在体内分化技术平台.
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干细胞研究进展
干细胞是近年来医学研究的热门课题之一,由于它对疾病防治潜在的重要性,特别是用于组织器官移植的可能性,以及伦理上的争议,因此引起了社会各界广泛的关注.1981年Evans等[1]首次成功地从小鼠胚泡内层细胞团中分离培养出胚胎干细胞(embryonic stem cell);1998年,Thomson等[2]首次培养出人的胚胎干细胞;同年, Shamblott等[3]首次从5～10周胎儿的性腺嵴中培养出人的胚胎生殖细胞,目前正研究在体外培养胚胎干细胞并使其直接分化成人类组织(如胰岛、心肌等),从而为器官或组织移植的长远目标打下良好基础.
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干细胞研究的回顾与展望
自1981年Evans等[1]首次成功地从小鼠胚泡内层细胞团中分离出胚胎干细胞以来,干细胞的研究已成为生命科学活跃和有影响的领域之一.
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单克隆抗体阻断LeY寡糖对小鼠胚泡细胞外基质与基质金属蛋白酶的影响
目的:探讨着床前阶段表达的LeY寡糖对小鼠胚泡细胞外基质(ECM)与基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响.方法:应用半定量RT-PCR及免疫印迹法观察体外培养的着床前表面LeY寡糖被封闭的胚泡ECM主要成分纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和其水解酶类MMP-2,MMP-9的表达和分泌水平的变化.结果:体外培养表面被封闭胚泡6 h,其FN及LN的分泌明显升高(P＜0.01),但随着培养时间延长,其增高水平有下降趋势,而其基因的转录变化不明显.在同一时期内,胚泡MMP-2、MMP-9的分泌明显被抑制,其抑制程度随培养时间延长减弱,其基因表达也被抑制,与其分泌水平的变化趋势一致.结论:LeY寡糖抗原被封闭使MMPs的分泌和基因表达被抑制的同时,FN、LN的分泌增加,提示可能与LeY寡糖封闭引起MMPs的活性下降,使其底物FN、LN分解减少,从而引起含量增加有关.
